细胞杂交和肿瘤生长的抑制

一、动物细胞杂交的简史 1965年Harris和Watkins报道了用灭活的病毒可使不同动物种类的细胞融合而产生活的杂种细胞,早在1838年,Müller就已描述了脊椎动物中的多核细胞。Virchow(1858)在各种正常组织、炎症和瘤所侵蚀的组织中都看到多核细胞的存在。de Bary(1859)证明了这些多核细胞中的某些细胞是由单核细胞融合所产生的。     

中心体异常在咖啡因增强顺铂杀伤人肝癌细胞系中的作用

为了探讨咖啡因是否影响细胞周期检验点而增强顺铂杀伤肿瘤细胞及其作用机制 ,选取同步化于S期的肝癌细胞系SMMC 772 1,用顺铂和咖啡因进行不同方式的处理 ,包括顺铂处理、咖啡因处理以及先经顺铂 ,再用咖啡因处理 .利用相关方法对不同处理的细胞进行了分析 ,包括细胞形态 ,细胞生长速率 ,多核细胞的形成与死亡 ,中心体的异常等 .结果显示 ,顺铂与咖啡因联合处理的细胞出现明显的多核化现象 ,多核细胞占总细胞的百分比可以达到 30 %以上 ,高于用顺铂或用咖啡因处理的细胞 .同时观察到多核细胞生存能力较差 ,它们会通过细胞凋亡的形式死亡 .抗中心体人自身免疫血清的免疫荧光结果显示 ,中心体异常与多核细胞的形成直接相关 .在部分多核细胞的核周围有多个不同强度的荧光点 ,在另部分多核细胞中 ,在其中央有一个大的荧光点 ,被多个细胞核围绕 ,荧光较强 .根据结果推测 ,由多个不完整的中心体导致的多极分裂形成多核细胞 ,随后多个中心体聚集到中央形成大的中心体 ,负责间期微管的组装 .结果表明 ,受到顺铂损伤的细胞由于检验点的作用而使细胞周期阻断 ,咖啡因可消除周期的阻断 ,使细胞在中心体未完成正常复制状态下进入有丝分裂 ,产生大量多核细胞 ,这些多核细胞最终发生凋亡 .     

细胞有丝分裂的胞质分裂

细胞有丝分裂通常包括核分裂(karyokinesis)及胞质分裂(cytokinesis)两个方面。两者虽有一定的关系,但核分裂并不一定随之有胞质分裂,结果形成双核或多核细胞,如多核原生动物及合胞体组织。因此,应将两者的分裂机制分别理解。关于核分裂机制,在所有细胞中是十分相似的,一般的认识也比较一致。在胞质分裂方面,存在许多不同的看法。大致在动物细胞     

细胞间隙连接通讯与肿瘤

由连接蛋白构成的细胞间隙连接通讯(GJIC)广泛存在于脊椎动物中,可以直接介导细胞间小分子物质的传递,而不需要通过细胞间质。GJIC与肿瘤密切相关,多数肿瘤GJIC能力降低或丧失,连接蛋白不表达或胞内定位,而恢复GJIC可以抑制肿瘤, GJIC已成为肿瘤预防与治疗研究的潜在靶点之一。     

SARS冠状病毒核衣壳蛋白抑制胞质分裂和细胞增值

目的:SARS冠状病毒(SARS-CoV)的核衣壳蛋白(N蛋白)能够结合病毒RNA形成螺旋状的核衣壳。在3种不同的细胞系中分别表达SARS-CoVN蛋白,研究它对转染细胞生长的影响。方法:将重组质粒pEGFP-N和pEGFP(作为对照)分别转染人胚肾HEK293细胞、成纤维细胞3T3、人宫颈癌HeLa细胞,通过激光共聚焦显微镜、荧光显微镜观察SARS-CoVN蛋白在细胞内的定位以及细胞的生长变化。结果:SARS-CoVN蛋白能定位于细胞质,并不像其他冠状病毒N蛋白那样能够定位到细胞核。同时发现SARS-CoVN蛋白能够诱导形成多核细胞,多核细胞的百分率可达33.9%。结论:SARS-CoVN蛋白抑制胞质分裂,延缓细胞生长。     

蛋白磷酸酶4在人肺癌细胞A549增殖中的功能分析

蛋白磷酸酶4(PP4)是PP2A亚家族的重要成员之一.已有研究表明PP4在果蝇与线虫中参与了中心体成熟,但作为一个进化上高度保守的蛋白质,PP4在哺乳动物细胞中的确切功能至今仍知之甚少.选择人肺癌细胞A549为材料,转染发夹型siRNA表达质粒,筛选鉴定获得了PP4表达抑制细胞株,然后对细胞的形态、生长特性及有丝分裂过程进行观察分析.与对照细胞相比,发现其生长速率明显减慢,细胞群体中DNA含量为4N的细胞比率明显增高.这一结果是由细胞群体中出现了高比例的多核细胞造成的,进一步的分析揭示,高比例多核细胞的产生是由于PP4表达下降,致使细胞有丝分裂和胞质分裂受到严重干扰所导致的.由此推测PP4对于保证细胞有丝分裂及胞质分裂的正常进行具有重要作用,PP4受到抑制将会导致多核细胞的产生,进而抑制A549细胞的增殖.     

无脊椎动物的生殖和发育

无脊椎动物是动物界中除脊椎动物以外所有动物类群的总称,不是一个自然的类群(Barnesetal.,1988;Ruppert&Barnes,1994)。无脊椎动物的门类繁多,即使不算原生动物(原生生物界中的1个亚界,或根据有的分类系统它涉及3个界),亦大约有35个门之多,而脊椎动物只是脊索动物门中的1个亚门(Song&Zhou,2002)。无脊椎动物的现生种类,已知约为120万种,远远多于只有约4.8万多种的脊椎动物。更因为它们的形态极其多样,故其生殖和发育的模式自然远比我们在脊椎动物所见到的为多。从低等到高等,不同类群的无脊椎动物在细胞数目(单细胞到多细胞,在这里我们把…     

GFP示踪观察移植瘤原代培养细胞的生长规律

采用GFP稳定表达的细胞系(293-BAC)接种裸鼠形成移植瘤.取肿瘤组织进行原代培养,通过GFP示踪和细胞形态学变化,观察了肿瘤组织中细胞的生长规律.肿瘤细胞释放并生长在组织块附近,向周围空间延伸.种植时散落的薄层组织细胞则直接贴壁生长.生长的鼠源间质细胞占总细胞量的1%～3%,散在或在组织新生肿瘤细胞外围集中生长.原代培养的细胞在传代5代以后,其中的鼠源细胞消失.经过成瘤和传代过程的肿瘤细胞生长性能稳定、来源纯净,是相关研究的好材料.观察到的细胞生长规律可为移植瘤的相关研究提供参考.     

细胞松弛素D用于鉴别正常细胞与肿瘤细胞的初步探讨

细胞松弛素(Cytochalasin)是一类真菌的代谢产物,迄今已发现有十余种。由于它们具有广泛的细胞生物学效应,颇为人们所重视。在殊多的生物活性中,细胞松弛素B(Cytochalasin B,简称CB)可诱发恶性细胞形成多核细胞,而不诱发正常细胞形成多核细胞这一特     

脊椎动物病毒与微RNA

抗病毒作用是RNA干扰(RNAi)在植物及低等动物中的一个重要功能。一方面,宿主细胞编码并表达短干扰RNA(siRNA),对入侵细胞的病毒产生抑制作用;另一方面,病毒编码并表达特定的RNA或蛋白质,以对抗宿主细胞的RNAi。在部分脊椎动物病毒中已经发现多种由病毒编码的微RNA(miRNA),它们对病毒及细胞基因的表达有重要的调节作用。同时,某些细胞miRNA也可影响脊椎动物病毒的复制。然而,RNAi在脊椎动物细胞中是否具有广谱抗病毒活性、脊椎动物病毒又是否普遍编码miRNA及普遍具备拮抗RNAi的机制?目前尚无定论,有待于进一步的研究加以阐明。     

细胞融合教学实验的改进

细胞融合技术是研究细胞遗传、基因定位、细胞免疫、病毒和肿瘤的重要手段。所谓细胞融合 ( cell fusion)又称体细胞杂交 ,是指用人工方法使两个或两个以上的体细胞融合成 1个双核或多核细胞 ,不经有性过程而得到杂种细胞。自细胞融合技术 ( Barski,1961)创建至今 ,依据融合过程采用的助融剂的不同可分为 :1)病毒诱导的细胞融合 ;2 )化学因子诱导的细胞融合 ;3 )电场诱导的细胞融合 ,此外还有激光诱导的细胞融合。在保证助融剂及操作技巧的前提下 ,细胞融合成功与否及融合率取决于实验所选择的亲代细胞。目前 ,普通高等院校和高等医学院校…     

胞红蛋白:一种新的携氧珠蛋白

胞红蛋白(CGB)是新发现的第四种携氧珠蛋白,广泛分布于多种组织和器官。在不同种类细胞中其亚细胞定位并不相同,在结缔组织中主要定位于细胞质,而在神经组织胞核和胞质中均有分布。小鼠和人CGB基因均编码190个氨基酸,斑马鱼的CGB基因编码174个氨基酸。人CGB基因定位于染色体17q25。系统进化分析表明,CGB与脊椎动物的肌红蛋白(MGB)有共同祖先。CGB可促进向细胞内运输氧,同时也可能作为一种NADH氧化酶或氧感受器而起作用。CGB的发现及其功能的深入研究,将使机体氧运输、氧代谢和氧利用的研究揭开全新的篇章。     

银鲫精母细胞型精原细胞瘤的病理学观察

自银鲫(Carassius gibelio)中发现了一例自发性精母细胞型精原细胞瘤, 详细描述了该肿瘤的组织病理和超微结构。在组织学上, 该肿瘤具有薄膜包被、扩张性生长, 具有高度细胞性和弥漫性结缔组织, 伴有淋巴细胞浸润。透射电镜显示, 该肿瘤显著的特征是含有未分化的精母细胞, 且支撑细胞稀少。对比正常银鲫的精巢组织结构, 排除了其他肿瘤类型, 最终将该肿瘤鉴定为精母细胞型精原细胞瘤。系在低等脊椎动物中首次发现具有淋巴细胞浸润的精母细胞型精原细胞瘤, 丰富了鱼类性腺肿瘤的基础资料, 也为构建人类精母细胞型精原细胞瘤动物模型提供了依据。     

根癌病土壤杆菌(Agrobacterium tumefaciens)Ti质粒的传递性研究及其在遗传工程中的应用

一、Ti质粒的发现 根癌病土壤杆菌是引起许多植物(据文献记载有83属300余种)冠瘿(crown gall)肿瘤的病原体。有关它的研究是从1907年Smith和Townsend提出该病的病原学开始的,40年代While和Braun等人用无菌冠瘿组织证明肿瘤的发生基于肿瘤基因的转化以后,吸引了越来越多的人去进行这种基因的分离和转化研究。特别是60年代,Schilpcroort等人用免疫学和分子杂交的技术,在无菌冠瘿细胞中分别测到了细菌的抗原和细菌Ti质粒的DNA序列以后,这方面的文章更是指数地增加。     

橘络活性成分小分子果胶治疗非小细胞肺癌作用及机制研究

本文观察橘络活性成分小分子果胶在离体细胞水平及整体动物模型中对非小细胞肺癌的治疗作用并初步探索其作用机制。小分子果胶处理人非小细胞肺癌PC-9细胞72 h后,MTS法检测细胞活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率;以PC-9细胞裸小鼠皮下移植瘤模型观察小分子果胶体内对肿瘤生长的抑制作用,免疫组化法检测肿瘤组织Ki67表达水平,TUNEL法检测组织中肿瘤细胞凋亡程度。结果表明小分子果胶(1.5~3 mg/m L)可显著抑制PC-9细胞增殖,与对照组相比细胞凋亡率显著升高,且具有浓度依赖性;小分子果胶(56.25 mg/kg)可显著抑制非小细胞肺癌小鼠体内肿瘤生长,肿瘤组织中细胞凋亡率显著升高。研究证明小分子果胶可显著抑制非小细胞肺癌小鼠体内肿瘤生长,该作用可能与小分子果胶抑制肿瘤细胞增殖、诱导细胞凋亡有关。     

橘络活性成分小分子果胶治疗非小细胞肺癌作用及机制研究北大核心CSCD

本文观察橘络活性成分小分子果胶在离体细胞水平及整体动物模型中对非小细胞肺癌的治疗作用并初步探索其作用机制。小分子果胶处理人非小细胞肺癌PC-9细胞72 h后,MTS法检测细胞活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率;以PC-9细胞裸小鼠皮下移植瘤模型观察小分子果胶体内对肿瘤生长的抑制作用,免疫组化法检测肿瘤组织Ki67表达水平,TUNEL法检测组织中肿瘤细胞凋亡程度。结果表明小分子果胶(1.5~3 mg/m L)可显著抑制PC-9细胞增殖,与对照组相比细胞凋亡率显著升高,且具有浓度依赖性;小分子果胶(56.25 mg/kg)可显著抑制非小细胞肺癌小鼠体内肿瘤生长,肿瘤组织中细胞凋亡率显著升高。研究证明小分子果胶可显著抑制非小细胞肺癌小鼠体内肿瘤生长,该作用可能与小分子果胶抑制肿瘤细胞增殖、诱导细胞凋亡有关。     

免疫活性细胞的实验抗癌研究

肿瘤免疫研究表明,机体对肿瘤的免疫作用主要是细胞免疫。Klein等(1960)将肿瘤细胞与免疫动物的淋巴细胞一起在体外处理以后,就减弱了瘤细胞在宿主中生长的能力。Alexander和Delorme等(1964,1966)注射同种或异种的免疫淋巴细胞,使化学物质诱发的大鼠原发性纤维肉瘤得到缓解或消退。近年来,许多实验证明,脾脏细胞、局部淋巴结细胞、胸导管淋巴细胞和腹膜表面的淋巴细胞都是能够传递肿瘤特异     

草鱼椎骨间质细胞的培养

鱼类细胞培养不仅在病毒学及细胞生物学的研究中起重要作用,也是生物进化、发育及遗传研究的极好材料1,2.有报道指出高等脊椎动物的骨髓间质细胞具有分化成多种细胞的功能3.常用于细胞培养的鱼类组织有心、鳍、卵巢、肾及肿瘤等4,5,鱼类没有骨髓6,因此草鱼(ctenopharyngodon idellus)骨间质细胞的培养,对探讨鱼类免疫细胞分化途径、鱼类造血组织的发育及分化潜能具有重要意义。       

NHE基因家族的研究进展

Na⁺/H⁺交换泵(Na⁺/H⁺ exchanger, NHE)是存在于所有脊椎动物细胞中的重要跨膜蛋白,该蛋白质涉及细胞的多种功能,包括细胞内pH值调节、细胞体积的控制以及离子转运等.目前已克隆了五个亚型NHE的cDNA,它们构成了脊椎动物细胞离子转运泵的一个基因家族. 这五个亚型的表达水平及活性可受多种因素的调节.在肿瘤、高血压及糖尿病等疾病中,已发现NHE-1亚型的表达水平和活性显著增高.因此,研究NHE-1的转录及活性调节机制,将可能为这些疾病的诊治提供新的手段.     

ZNF143调控基因表达的机理

ZNF143(zinc finger protein 143)是由7个锌指结构组成的C2H2型转录因子,其在绝大多数脊椎动物的不同组织、细胞中广泛表达。但通常情况下,ZNF143在癌组织、胚胎发育过程中的表达高于正常组织。研究发现,ZNF143主要通过参与编码和非编码基因的激活,从而在细胞周期、细胞增殖与分裂等细胞活动中发挥重要作用。更为重要的是,近几年研究表明,ZNF143通过与其他调控蛋白质形成转录起始复合物来介导远距离染色质的相互作用,从而参与染色质结构的形成,推测其在细胞身份及命运决定中发挥重要功能。此外,由于ZNF143的表达异常往往伴随着肿瘤的发生,因此,近些年针对ZNF143来设计药物靶点的研究也取得了一定的进展。