论核糖核酸酶P

<正> 核糖核酸酶P(RNase P)是一类使转移核糖核酸(tRNA)5′端成熟的加工酶,在tRNA生物合成中起着非常重要的作用。RNase P活性于1972年在大肠杆菌中首次发现,到1977年证明该酶是一个由核糖核酸(RNA)和蛋白质两者构成的核糖核蛋白(RNA蛋白,ribonucleoprotein),RNA部分为酶活性所必需。1979年将无活性的RNA组分和蛋白质组分重组得到有活性的酶。1983年分离出RNase P中RNA组分的前体分子,同时阐明,无论     

文昌鱼核糖核蛋白体结构与功能的研究——Ⅰ. 文昌鱼tRNA和5SRNA的制备

本文报导了从厦门白氏文昌鱼(Branchiostoma belcheri Gray)中制备tRNA和5S RNA的方法。将文昌鱼洗净,用搅碎机破碎,然后用苯酚法提取小分子RNA。RNA粗制品经DEAE—纤维素DE22、DEAE—Sephadcx A—50和Sephadex G—100柱层析分离纯化,分别得到tRNA和5S RMA。再用12％聚丙烯酰胺疑胶电泳进一步纯化。测定了tRNA接受甘氨酸、丙氨酸和酪氨酸的活力分别为6.3％、5.2％和21％—25％。 tRNA的主要生物功能是携带与转移氨基酸参与蛋白质生物合成,并对基因表达进行调节控制。5S RNA是核糖核蛋白体的一个组分,在蛋白质生物合成中具有重要的功能,也是研究生物进化比较理想的一种生物大分子。自Hoagland等(1957)发现tRNA及Tissieres等(1959)发现核糖核蛋白体RNA后,科学工作者便广泛地开展了对tRNA和5SRNA结构与功能的研究。 文昌鱼是一种处于脊椎动物与无脊椎动物之间过渡类型的脊索动物,属脊索动物门的头索亚门,最接近脊椎动物亚门。因此对它进行深入的生化研究,在探索生物进化方面有较大的学术意义。本文报告从文昌鱼中制备tRNA和5SRNA以及tRNA接受氨基酸活力的初步结果。     

核不均一性核糖核蛋白在RNA加工过程中的作用

在真核细胞中,初始转录产物（前体mRNA）经过一系列复杂的转录后加工过程形成成熟的mRNA.在这一过程中,大量蛋白质和加工因子有序汇集在核糖核蛋白复合体中并参与对前体RNA的加工过程. 该复合体中的蛋白质部分主要由一类约20种称为核不均一性核糖核蛋白的多肽分子构成.除了早期了解的一些结构性功能外,近来已有许多证据显示这些蛋白质在细胞中RNA的代谢及其他活动方面具有更加广泛和积极的作用.     

Gem小体缺失与肌萎缩侧索硬化症

肌萎缩侧索硬化症(ALS)是一种以运动神经元死亡为特征的神经退行性疾病,Gem小体缺失是ALS的细胞特征。研究表明m RNA前体剪接异常与ALS有关。剪接体负责m RNA前体的剪接,而Gem小体参与构成剪接体核心组件的富含尿苷的小核核糖核蛋白(U sn RNP)的生物合成。本文将综述ALS相关肉瘤融合蛋白(FUS)、TAR DNA结合蛋白-43(TDP43)以及铜锌超氧化物歧化酶(SOD1)突变体引起Gem小体缺失的机制,为探索ALS的发病机理和开发新的治疗手段提供启示。     

小细胞核核糖核蛋白体(snRNP)

大约十年前,人们在真核生物基因表达过程中,在细胞核中发现一种小细胞核RNA(snRNA),它与特殊的蛋白质结合成为小细胞核核糖核蛋白体(small nuclear ribonucle0pr0tein particle,简称snRNP),参与前体mRNA(pre-mRNA)的剪接。我们知道,真核生物的基因表达比较复杂,它的DNA碱基序列中包含编码序列称外显子,也插入非编码序列称内含子。DNA在核中转录出的mRNA同时含有外显子和内含子,不能做为模板翻译出蛋白质,而必须在细     

核蛋白体的中子散射研究

制造蛋白质的细胞器——核蛋白体含有58个大分子。这些大分子的空间排列已经用中子束照射的方法搞清楚。用电镜观察大肠杆菌中的核蛋白体,只看到一些小的不规则的颗粒。如用X-射线衍射法研究这些颗粒(亚单位),颗粒又太大,这样有人就用中子散射进行研究,得到了很有用的资料。目前已知道核蛋白体它的     

促红细胞生成素的分泌过程三维模式图

DNA经转录得到前体 m RNA,进一步剪切加工修饰得到成熟的 m RNA。核糖核蛋白体与 m RNA串连成多聚核糖核蛋白体 ,并通过信号识别颗粒及其受体结合于粗面内质网膜上 ,新合成的蛋白质进入内质网腔 ,经过加工修饰 ,以转运小泡的形式 ,运输到高尔基复合体。高尔基复合体由大囊泡、小囊泡和扁平囊组成 ,呈弯曲圆盘状。凸面称形成面或顺面 ,朝向胞核 ,凹面称分泌面或反面 ,朝向细胞表面 ,小囊泡多位于顺面 ,由粗面内质网出芽而来 ,运送新合成的蛋白质到扁平囊中 ,并不断补充扁平囊的膜结构。蛋白质在囊腔中经进一步加工修饰 ,由扁平囊两端和…     

snoRNP的生物发生

核仁小核糖核蛋白体颗粒(small nucleolar ribonucleoproteins partical,snoRNP)是一种定位于核仁的复合物,它由一系列核仁小RNA(small nucleolar RNA,snoRNA)和核心蛋白质结合而成。这些snoRNP指导核糖体RNA(rRNA)前体的加工修饰,在核糖体的生物发生中起着重要的作用。研究显示大多数snoRNP加工和组装的早期阶段发生在核浆,在Cajal小体(Cajal body,CB)中组装成熟之后,在PHAX、p50、p55、SMN和Nopp140等蛋白质的帮助下穿越各种不同的核间隔转运至核仁,并在核仁中发挥功能。本文对snoRNP的生物发生过程作一综述。     

高等植物端粒和端粒酶的研究进展

端粒是构成真核生物线状染色体末端重要的DNA-蛋白质复合结构,DNA由简单的串联重复序列组成。它的合成由一个特殊的具有反转录活性的核糖核蛋白-端粒酶完成。端粒对染色体、整个生物基因组,甚至对细胞的稳定都具有重要意义。本文就植物端粒、端粒酶、端粒结合蛋白,以及端粒变化、端粒酶在植物生长发育中的调节作一概述。     

RNA研究的一些新进展——RNA生物功能的多样性

近几年发现某些RNA具有酶(Ribozyme)的催化功能。这不仅改变了酶都是蛋白质的传统观念,而且认为在远古时期RNA可能就具有自我复制的活力,因而RNA是先于DNA和蛋白质的最早出现的生物大分子。真核细胞mRNA的剪接机制比较复杂,至今还远没有搞清楚。现在知道,必须通过一个由2′,5′磷酸二酯键形成的“套环”结构,另外还有一类核蛋白体(snRNP)参与反应。反义RNA通过其碱基序列与相关的mRNA形成互补碱基对的方式影响mRNA的翻译。tRNA是蛋白质生物合成中必不可少的一类RNA。此外,它还有其它重要的生物功能。     

侵染细胞中一种内含物的组化研究

在大豆根瘤中有一种非常特殊的细胞质内含物，只存在于侵染细胞中，一个细胞通常只有一个，一般位于细胞的外周部分，常常靠近胞间隙。这种内含物通常为圆形，其直径在１－２μｍ之间，主要由颗粒状物质，管状和泡状成分组成。它经甲苯胺蓝Ｏ染色后呈深蓝色，苏丹黑Ｂ染色后呈深黑色，考马斯蓝染色后呈蓝色，因此它不是类聚核糖核蛋白体，也不是一般的蛋白体和脂滴或脂质体，而可能是一种蛋白质和脂的复合物。其作用可能与共生固氮中     

正常肝信息核糖核酸的翻译和对离体肝癌细胞的逆转分化作用

正常肝信息核糖核酸是从肝聚核蛋白体抽提RNA,通过寡聚(dT)纤维素亲和层析制备。分离的正常肝mRNA在麦胚蛋白合成系统和爪蟾卵翻译系统检定,能够翻译白蛋白,由此证明是有生物学活性的。用正常肝mRNA在离体情况下对肝癌细胞进行逆转分化研究,发现:(1)小鼠正常肝mRNA能抑制小鼠腹水肝癌细胞核酸和蛋白质的合成;初步见到人的正常肝mRNA能轻度抑制人体肝癌细胞(BEL-7404)的生长。(2)相应的正常肝mRNA分别在小鼠腹水肝癌和人肝癌细胞诱导了白蛋白合成;在人体肝癌细胞内核蛋白体聚成聚核蛋白体。(3)人体肝癌细胞受刀豆凝集素(Con A)凝集的能力减弱,这种凝集特性的改变,可以维持至3次细胞传代。这些实验结果显示肝癌细胞并非固定不可改变的,在正常肝mRNA作用下能够向正常逆转分化;讨论了mRNA转化机理,认为可能是通过肝mRNA翻译的蛋白质或mRNA本身直接调节基因转录来实现的。     

侵染细胞中一种内含物的组化研究

在大豆根瘤中有一种非常特殊的细胞质内含物,只存在于侵染细胞中,一个细胞通常只有一个,一般位于细胞的外周部分,常常靠近胞间隙。这种内含物通常为圆形,其直径在1—2μm之间,主要由颗粒状物质、管状和泡状成分组成。它经甲苯胺蓝O染色后呈深蓝色,苏丹黑B染色后呈深黑色,考马斯蓝染色后呈蓝色,因此它不是类聚核糖核蛋白体,也不是一般的蛋白体和脂滴或脂质体,而可能是一种蛋白质和脂的复合物。其作用可能与共生固氮中的能量转换和供应有关。     

核糖糖基化BSA单体对SH-SY5Y细胞的毒性明显

研究显示,蛋白质异常修饰形成的寡聚体,与其多聚体、淀粉样纤维相比,具有更强的细胞毒性．这一发现被认为是蛋白质错误折叠和聚集研究领域中的重要进展．蛋白质的异常修饰如还原糖的非酶糖基化,是糖尿病最基本的病理特征．2型糖尿病患者尿液中的核糖浓度显著升高,表明糖尿病不仅与葡萄糖代谢紊乱相关,同时也与核糖代谢失调相关．以牛血清白蛋白(BSA)为研究对象,通过荧光分光光度计检测、原子力显微镜、透射电子显微镜观察以及分子排阻色谱分离,观察到核糖糖基化能够诱导BSA聚集,从单体、寡聚体逐渐形成多聚体．通过CCK-8 Kit、乳酸脱氢酶细胞活性检测、TUNEL染色、caspase-3活性检测以及流式细胞检测等方法,发现核糖糖基化的BSA单体对SH-SY5Y细胞(人神经母细胞瘤细胞系)具有明显的毒性,与此同时,糖化寡聚体和多聚体没有表现出显著的毒性．进一步研究发现,核糖糖基化的BSA单体通过与AGEs的受体RAGE相互作用,激活细胞内的MAPK通路,从而导致细胞凋亡．     

核糖糖基化BSA单体对SH-SY5Y细胞的毒性明显（英文）

研究显示,蛋白质异常修饰形成的寡聚体,与其多聚体、淀粉样纤维相比,具有更强的细胞毒性.这一发现被认为是蛋白质错误折叠和聚集研究领域中的重要进展.蛋白质的异常修饰如还原糖的非酶糖基化,是糖尿病最基本的病理特征.2型糖尿病患者尿液中的核糖浓度显著升高,表明糖尿病不仅与葡萄糖代谢紊乱相关,同时也与核糖代谢失调相关.以牛血清白蛋白(BSA)为研究对象,通过荧光分光光度计检测、原子力显微镜、透射电子显微镜观察以及分子排阻色谱分离,观察到核糖糖基化能够诱导BSA聚集,从单体、寡聚体逐渐形成多聚体.通过CCK-8 Kit、乳酸脱氢酶细胞活性检测、TUNEL染色、caspase-3活性检测以及流式细胞检测等方法,发现核糖糖基化的BSA单体对SH-SY5Y细胞(人神经母细胞瘤细胞系)具有明显的毒性,与此同时,糖化寡聚体和多聚体没有表现出显著的毒性.进一步研究发现,核糖糖基化的BSA单体通过与AGEs的受体RAGE相互作用,激活细胞内的MAPK通路,从而导致细胞凋亡.     

酵母双杂交检测C17orf25蛋白与ADP-核糖焦磷酸水解酶NUDT9的相互作用

通过RACEPCR的方法从肝组织中分离得到C17orf2 5基因。利用酵母双杂交的方法以C17orf2 5为结合结构域筛选人HeLacDNA文库分离得到nudt9基因。NUDT9是一种焦磷酸酶 ,可以将ADP 核糖水解成AMP和核糖 5 磷酸。在大肠杆菌中直接表达了C17orf2 5蛋白、6×His tag与NUDT9的融合蛋白质 ,两者均以包涵体形式存在。蛋白质条带割胶纯化 ,并复性。之后的NTA Ni2 亲和柱层析实验表明这两种蛋白质在体外相互作用。将C17orf2 5与绿色荧光蛋白基因在SMMC772 1中融合表达 ,结果表明C17orf2 5蛋白可能定位在线粒体中 ,侧面印证了在细胞内与NUDT9作用的空间可能性。ADP 核糖在体内具有重要的生理作用 ,在细胞内的累积对细胞生长不利 ;同时 ,ADP 核糖化是一种重要的蛋白质修饰方式 ,与多种细胞凋亡的发生有关。因此从实验结果可以判断 ,C17orf2 5对细胞生长的抑制作用可能通过与NUDT9的相互作用来实现     

抗汉坦病毒核蛋白单链抗体的构建与表达

汉坦病毒核蛋白在病毒各个基因组片段核糖核蛋白(RNP)复合物的形成,以及RNP复合物装配入病毒颗粒中发挥重要作用。体外研究表明,核蛋白与病毒RNA的特异性结合结构域位于第175—217个氨基酸残基,羧基端其它部分为非特异性结合结构域。为了在细胞内病毒复制的正常过程中研究核蛋白的功能,应用噬菌体表面呈现技术,分别从鼠杂交瘤细胞和人外周血淋巴细胞天然抗体库中,筛选出两株不同抗原结合位点的抗汉坦病毒核蛋白抗体L13 F3和H34Fab抗体,并在大肠杆菌中进行表达。L13 F3 Fab抗体的抗原结合位点位于核蛋白氨基端25—65个氨基酸之间,H34的抗原结合位点位于核蛋白的羧基端的一半。分别使重链可变区羧基端与轻链可变区氨基端通过9个氨基酸寡肽连接起来,构建成单链抗体,并在大肠杆菌内进行表达。通过酶联免疫吸附试验(EL-SIA)、间接免疫荧光试验(IFA)和Western blot检测,确定所构建单链抗体与母抗体的抗原结合特性无差别。单链抗体分子量小,易于操作并保留了全部的抗原结合活性,是在细胞内探索汉坦病毒核蛋白功能的良好工具。     

端粒酶与血液系统肿瘤

端粒 (ｔｅｌｏｍｅｒｅ)是真核细胞染色体末端的ＤＮＡ 蛋白质复合物。端粒酶 (ｔｅｌｏｍｅｒａｓｅ)是由ＲＮＡ和蛋白质组成的特殊核糖核蛋白复合体 ,具有逆转录酶活性 ,能以自身ＲＮＡ为模板 ( 5′ ＣＵＡＡＣＣＣＵＡＡＣ 3′)合成端粒。在正常人体细胞中端粒酶活性表达受抑 ,而在肿瘤形成时可被激活。因此在某些永生细胞和肿瘤细胞中随着ＤＮＡ的复制 ,其端粒不会缩短。1 .端粒酶在血液系统肿瘤表达端粒酶在人体细胞大多为阴性 ,但在胚系细胞、精子细胞、小肠陷窝细胞、毛囊细胞、上皮细胞、活化淋巴细胞、子宫内膜细胞和大多数肿瘤细…     

反转录病毒MSCV介导汉坦病毒核蛋白基因在NIH3T3细胞中整合和表达

汉坦病毒是引起肾综合征出血热(HFRS)和汉坦病毒型肺炎综合征(HPS)的主要病原体.由S基因编码的核蛋白(NP)主要与机体的细胞免疫有关,并调节病毒的复制及诱导细胞程序性死亡.构建了汉坦病毒Z10株核蛋白cDNA与含有pac基因的反转录病毒鼠干细胞病毒(MSCV)重组体MSCV-FlagNP,通过磷酸钙转录法导入产病毒的包装细胞系BOSC23中,产生完整的重组MSCV-FlagNP病毒.然后以重组病毒感染NIH 3T3细胞,利用Puromycin的选择特性(pac基因)对感染细胞进行连续压力筛选,获得了转核蛋白抗性细胞.利用Southern blot和PCR方法分别对核蛋白基因在抗性细胞染色体整合情况及其完整性进行了鉴定.并且用Western blot在抗性细胞中可检测到核蛋白的表达.进一步以Flag单克隆抗体介导的免疫荧光染色联合共聚焦激光扫描荧光显微镜,分析了内源性Flag融合核蛋白在抗性细胞内分布,发现核蛋白主要分布于胞浆及胞核周围区,并且部分核蛋白可聚集形成胞浆包涵体.转核蛋白基因细胞模型的建立,对进一步研究汉坦病毒核蛋白功能以及病毒复制机制有重要意义.     

人肺癌DNA转化细胞系I2及其供体和受体细胞的形态结构的观察

本文用相差显微镜、扫描电镜和透射电镜对 NIH3T3、人肺腺癌细胞系 AGZY-83-a 及转化细胞 i_2(系 AGZY-83-a 基因组 DNA 和有抗性标记的载有 neo 基因的质粒 pSV_2-neoDNA 共转染 NIH3T3所得)进行了形态结构的比较观察。结果发现转化细胞呈纤维状,能重叠生长,细胞表面微绒毛明显细长,核形不规则,粗面内质网、核糖核蛋白体丰富等在形态结构上显示了恶性特征。