胆碱脱氢酶光谱性质的研究

胆碱脱氢酶（ＣＤＨ）蛋白质部分内源荧光发射峰在３３５ｎｍ,并不受底物的影响,但底物可改变辅基ＦＡＤ部分的内源荧光光谱。应用ＦＴＩＲ技术研究了增溶ＣＤＨ的二级结构,其结果如下：５３．４％α－螺旋,２４．５％β－片层,１３．９％３１０－螺旋及０．５％β－回折。在ＣＤＨ处于非底物结合状态时,分子内部结构表现为α－螺旋以及β－片层优势构象,呈现出球状蛋白样的空间结构特征。在与底物作用过程中,３１０－螺旋的比例逐渐上升至４２％左右,与此同时α－螺旋结构则降低到３５％。提示了底物诱导ＣＤＨ分子内部发生了蛋白分子的重新折叠。     

胆碱脱氢酶的底物保护作用

胆碱脱氢酶（ＣＤＨ）是线粒体电子传递酶系的一个重要组成,它位于线粒体内膜。膜固有的ＣＤＨ与用去垢剂从线粒体上增溶下来的酶在性质上有一定差异,本文研究了温度、ＳＤＳ对增溶ＣＤＨ的失活作用,发现底物胆碱的存在有明显的保护作用,说明底物诱导ＣＤＨ产主构象变化．     

胆碱脱氢酶的动力学性质

本文对增溶胆碱脱氢酶的稳态初速度及产物抑制动力学做了。底物胆碱和ＰＭＳ的相互影响：变化一个底物的浓度,另一个底物的Ｋｍ及Ｖｍａｘ均变化。该酶的产物三甲胺 地 制表现为对底物胆碱非竞争性而地ＰＭＳ竞争性,在胆碱饱和的情况下,三甲胺乙醛对酶的抑制仍表现为对ＰＭＳ竞争性。这些结果表明增溶胆碱脱氢酶的催化机制搂双底物双产物乒乓机制。１－ＰＣ与９－ＡＣ对增溶胆碱脱氢酶均有抑制作用,且均为混和型抑制,Ｋ１分别     

酵母乙醇脱氢酶胍变性时的失活与去折叠的比较研究

应用荧光发射光谱,圆二色光谱,二阶导数光谱和紫外差吸收光谱等监测手段,研究了酵母乙醇脱氢酶在胍溶液中的去折叠,比较不同盐酸胍浓度下酵母乙醇脱氢酶的失活与构象变化,实验表明酶的失活先于构象变化,在低浓度胍溶液中,构象尚未发生明显变化时,酶活几乎已经完全丧失,由上述结果可见,含有辅基金属离子Ｚｎ＾２＋酶的活性部位较酶分子的整体结构也具有柔性。     

蛋白质溶液可逆热变性及其与肽链构象关系的研究

用微量扫描量热技术及远紫外圆二色谱研究了蛋白质水溶液的浓度和ｐＨ对蛋白质热变性可逆性的影响及其与在热变性时肽链构象的关系。结果表明,当蛋白质溶液的浓度为０．０４％、ｐＨ为３时可实现完全可逆的热变性,然而蛋白质溶液宏观上的热变性并不意味着微观上蛋白质分子肽链的完全伸展。     

酵母乙醇脱氢酶胍变性时的失活与去折叠的比较研究

应用荧光发射光谱,圆二色光谱,二阶导数光谱和紫外差吸收光谱等监测手段,研究了酵母乙醇脱氢酶在胍溶液中的去折叠。比较不同盐酸胍浓度下酵母乙醇脱氢酶的失活与构象变化,实验表明酶的失活先于构象变化：在低浓度胍溶液中,构象尚未发生明显变化时,酶活几乎已经完全丧失。由上述结果可见,含有辅基金属离子Ｚｎ~（２＋）酶的活性部位较酶分子的整体结构也具有柔性。     

胆碱脱氢酶与脂质体的重组

 用预先制备的脂质体与含Triton X-100的胆碱脱氢酶保温随后用Bio-beadsSM-2去除去垢剂而使酶重组到脂质体,Triton X-100的浓度,磷脂-蛋白比,Mg~(2+),pH等均影响重组,脂质体的大小在重组中不是关键因素,重组酶的活力比纯化酶增加70％,重组酶对PMS的Km,相转变温度及活化能均与线粒体内膜接近而不同于纯化酶。     

胆碱脱氨酶光谱性质的研究

胆碱脱氢酶（ＣＤＨ）蛋白南部分内源荧光发射峰在３３５ｎｍ,并不受底物的影响,但底物可改变辅基ＦＡＤ部分的内源荧光光谱。应用ＦＴＩＲ技术研究了增溶ＣＤＨ的二级结构,其结果如下：５３．４％α螺旋,２４．５％β－片层,１３．９％３１０－螺旋及０．５％β回折。在ＣＤＨ处于非底物结合状态时,分子内部结构表现为α－螺旋以及β－片怪优势构象,呈现出球状蛋白样的空间结构特征,在与底物作用过程中,３１０－螺旋的比例     

L-乳酸脱氢酶热变性的热力学研究

用差示扫描量热法对L-乳酸脱氢酶的热变性进行了研究(温度扫描范围为290—390K,酶蛋白溶液浓度为0.28—0.72mg蛋白/mg溶液)。实验观察到当酶溶液浓度在0.62—0.72mg蛋白/mg溶液范围内有一个吸热转变,酶溶液浓度小于0.62mg蛋白/mg溶液时有两个未完全分开的吸热转变。 这个酶的量热焓与范德霍夫焓的比远大于1,而接近于2,这表明乳酸脱氢酶的变性过程不是一个简单的两态转变,从热力学和吸热峰的形状、大小分析,可以推断乳酸脱氢酶分子是由两个以弱相互作用相连结的合作结构区组成,而每一个结构区是由两个相互作用很强的亚基组成。也就是说乳酸脱氨酶的变性过程包括两个半独立的合作结构区的转变,每一个结构区的转变都近似一个两态转变,ΔHeal与ΔHvh的比值是随着两个半独立部分相互作用的增强,即蛋白浓度的增加而减小。随着蛋白浓度的减小,蛋白质周围水分子增多,酶分子中两个半独立部分的相对独立性增强,这可由热谱图上一个吸热转变变成两个半独立的转变得到证实。     

胆碱脱氢酶的N端氨基酸序列测定

采用SDS-PAGE凝胶电泳及电转移方法,将增溶的鼠肝线粒体胆碱脱氢酶进一步纯化,且去掉增溶线粒体胆碱脱氢酶(CDH)中所包含的大部分磷脂、去垢剂、辅基FAD等. 对进一步纯化的CDH进行了N端氨基酸序列测定,得到CDH N端10个氨基酸残基序列为VAAAAGGGKD,这一部分序列与小鼠CO5蛋白(即补体C5的前体蛋白)、大鼠腺苷酰(基)环化酶(adenylyl cyclase)、人甾体结合蛋白(oxysterol-binding protein)有很高同源性,但与大肠杆菌CDH并无明显的同源性.     

神经变性构象病及其分子基础

构象病的概念被广泛用于命名与蛋白质的构象异常相关的疾病。随着生命科学的进步,人们对神经变性疾病发病的分子机制有了较好的认识,发现几乎所有的此类疾病,诸如阿尔采末病（AD）、帕金森病（PD）、亨廷顿病（HD）以及朊蛋白病（PrD）等都具有一个共同的特征,即病变细胞中蓄积有大量错误折叠并易于聚合的蛋白质,这符合构象病的特点,所以又派生了神经变性构象病的新概念。近年来,人们在神经变性构象病的蛋白质错误折叠和聚合以及其细胞毒性方面的认识越来越走向深入,这将对寻找有效的治疗方法起到极大的推动作用。     

胆碱脱氢酶基因的转化及转基因番茄耐盐性的鉴定

采用PCR方法从E.coliTG1菌株中扩增得到胆碱脱氢酶（choline