槲皮素和芦丁抑制Fe~（2＋）和Cu~（2＋）诱导LDL氧化修饰的比较

槲皮素和芦丁抑制Ｆｅ￣（２＋）和Ｃｕ￣（２＋）诱导ＬＤＬ氧化修饰的比较阎道广,周玫,陈瑗（第一军医大学自由基医学研究室广州５１０５１５）关键词低密度脂蛋白的氧化修饰,桷皮素,芦丁,Ｆｅ￣（２＋）,Ｃｕ￣（２＋）黄酮类物质是自由基清除剂,能与超氧阴离子...     

光系统Ⅱ颗粒内单线态氧诱导产生超氧阴离子自由基

活性氧是生物体有氧代谢的必然产物。当机体处于疾病或胁迫条件下 ,活性氧的生成将更加活跃[1] 。由于类囊体膜是植物体光合放氧的器官 ,处于高浓度的氧环境中 ,同时类囊体膜上还存在着活跃的电子传递体系 ,因此类囊体膜是超氧阴离子自由基生成的活跃部位[2 ] 。最近的研究表明 ,ＰＳⅠ和ＰＳⅡ都是超氧阴离子自由基的生成部位[3] 。其中 ,对ＰＳⅠ生成超氧的机制研究已比较深入[2 .4 ] ,而对ＰＳⅡ生成超氧阴离子自由基的机制研究是在近几年内刚刚开展[3 ,5- 7] 。ＰＳⅡ中生成的另一活性氧是单线态氧。通常认为由于强光照射下ＰＳⅡ生成的…     

金属硫蛋白清除自由基及其对自由基引起的核酸损伤保护作用的研究

通过化学反应体系产生ＯＨ＾－和Ｏ＾－２自由基,采用荧光和化学发光检测体系,比较研究了不同亚型及不同结合金属的金属硫蛋白（ＭＴ）清除自由基能力的大小。结果表明,对于同一亚型,Ｚｎ结合ＭＴ清除自由基的能力大于Ｃｄ结合ＭＴ;同一结合金属的ＭＴ,ＭＴ１清除自由基的能力大于ＭＴ２。通过比较ＺｎＭＴ１与谷胱甘肽（ＧＳＨ）及超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）清除自由基的能力大小发现,ＺｎＭＴ１清除ＯＨ的能力是ＧＳＨ的１０     

人铜锌超氧化物歧化酶基因的克隆和乳酸乳球菌中的表达

采用ＲＴ－ＰＣＲ技术从人肝总ＲＮＡ中分离扩增了０．４５ｋｂ的人铜锌超氧化物歧化酶（Ｃｕ／ＺｎＳＯＤ）基因的ｃＤＮＡ序列,首先克隆至大肠杆菌表达质粒ｐＥＴ２３ｂ,进行了序列测定和超高表达,将Ｃｕ／Ｚｎ,ＳＯＤｃＤＮＡ亚克隆至乳酸乳球菌表达载体ｐＭＧ３６ｅ,用电穿孔法将重组质粒ｐＭＧ３６ｅｓｏｄ转化到乳酸乳球菌,获得Ｃｕ／Ｚｎ ＳＯＤ的组成型表达,其表达量约占乳酸乳球菌可溶性蛋白的５％以上,活性染色表     

神经元缺氧复氧损伤时氧自由基的毒性作用及其机制＊

在原代分离培养Ｗｉｓｔａｒ乳鼠大脑皮质神经元上研究了缺氧复氧损伤（Ｈ／Ｒ）对神经细胞乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）,漏出率,死亡率和脂质过氧化物含量的影响,并选用一氧化氮（ＮＯ）合酶抑制剂Ｌ－ＮＧ－硝基－精氨酸（Ｌ－ＮＮＡ）巯基供体Ｎ－乙酰半胱氨酸（ＮＡＣ）和超氧化物歧化酶（Ｃｕ,Ｚｎ－ＳＯＤ）三种自由基清除剂进行预保护等方法来探讨机制。结果表明 Ｈ／Ｒ损伤引起ＬＤＨ漏出率,细胞死亡率和脂过氧化物含量极显著     

绞股蓝超氧物歧化酶及某些理化特性的研究

本文以示同类型绞股蓝植株超氧物歧化酶（ＳＯＤ）和某些理化特性进行了比较分析。结果表明,棚栽型与野生型绞股蓝ＳＯＤ同工酶谱均有１２条（含Ｃｕ,Ｚｎ－ＳｏＤ、Ｍｎ－ＳＯＤ）;ＳＯＤ活性、对热稳定性均为野生型优于棚栽型,理化特性和营养物质的差异程度与生璋水平息息相关。     

神经元缺氧复氧损伤时氧自由基的毒性作用及其机制

在原代分离培养Ｗｉｓｔａｒ乳鼠大脑皮质神经元上研究了缺氧复氧损伤（Ｈ／Ｒ）对神经细胞乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）,漏出率,死亡率和脂质过氧化物含量的影响,并选用一氧化氮（ＮＯ）合酶抑制剂Ｌ－ＮＧ－硝基－精氨酸（Ｌ－ＮＮＡ）巯基供体Ｎ－乙酰半胱氨酸（ＮＡＣ）和超氧化物歧化酶（Ｃｕ,Ｚｎ－ＳＯＤ）三种自由基清除剂进行预保护等方法来探讨机制。结果表明 Ｈ／Ｒ损伤引起ＬＤＨ漏出率,细胞死亡率和脂过氧化物含量极显著     

磷脂酰甘油对光系统Ⅱ放氧活性的影响

通过重组试验表明,磷脂酰甘油（ＰＧ）对菠菜（Ｓｐｉｎａｃｉａ ｏｌｅｒａｃｅａＬ．）光系统Ⅱ（ＰＳⅡ）的放氧活性产生显著影响,具有明显的浓度效应。随ＰＧ浓度的增加,ＰＳⅡ的放氧能力逐渐增强,到１０ｍｇＰＧ／ｍｇＣｈｌ时ＰＳⅡ活性达到最大。此后在１０￣２２ｍｇＰＧ／ｍｇＣｈｌ浓度范围内,ＰＳⅡ放氧活性变化不大。而当ＰＧ浓度继续增大时,ＰＳⅡ放氧活性迅速降低,４０ｍｇＰＧ／ｍｇＣｈｌ时的ＰＳⅡ活性已降     

金属硫蛋白清除自由基及其对自由基引起的核酸损伤保护作用的研究

通过化学反应体系产生ＯＨ－和Ｏ自由基,采用荧光和化学发光检测体系,比较研究了不同亚型及不同结合金属的金属硫蛋白（ＭＴ）清除自由基能力的大小。结果表明,对于同一亚型,Ｚｎ结合ＭＴ清除自由基的能力大于Ｃｄ结合ＭＴ同一结合金属的ＭＴ,ＭＴ１清除自由基的能力大于ＭＴ２。通过比较ＺｎＭＴ１与谷胱甘肽（ＧＳＨ）及超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）清除自由基的能力大小发现,ＺｎＭＴ１清除ＯＨ的能力是ＧＳＨ的１００倍,清除Ｏ自由基的能力分别是ＧＳＨ和ＳＯＤ的２５和０．０１倍。即ＭＴ是一种很好的ＯＨ自由基清除剂。以ＯＨ对核酸（ＤＮＡ）的损伤为例,研究了ＭＴ对核酸损伤的保护作用,其变化规律与上述结果相一致。     

一氧化氮,超氧阴离子和过氧亚硝酸的作用和相互关系的研究进展

一氧化氮、超氧阴离子和过氧亚硝酸的作用和相互关系的研究进展王瑾雯陈瑗周玫（第一军医大学自由基医学研究室,广州５１０５１５）关键词一氧化氮超氧阴离子过氧亚硝酸阴离子一氧化氮（ＮＯ）、超氧阴离子自由基（Ｏ－２·）和过氧亚硝酸（ＨＯＯＮＯ／·ＯＯＮＯ）,三...     

兔肝金属硫蛋白β结构域的制备和鉴定

制备一定量的Ｃｄ、Ｚｎ兔肝金属硫蛋白,然后脱掉其中的金属,获得不含金属的硫蛋白,用一价金属ＣｕＣｌ或ＡｇＮＯ３以５．８：１的金属：蛋白摩尔比与ａｐｏＭＴ结合,将其β结构域用金属饱和,在３７℃,ＰＨ７．０下用枯草杆菌蛋白酶水解掉未结合金属的α结构域,获得Ｃｕ（Ⅰ）、Ａｇ（Ⅰ）结合的兔肝ＭＴ－Ⅰ、ＭＴ－Ⅱ的β结构域,通过ＨＰＬＣ、羧甲基化后的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、氨基酸组成分析、金属定量、Ｎ末端分析和紫外     

超氧阴离子自由基与嘧啶反应产物的量子化学研究

超氧阴离子自由基与嘧啶反应产物的量子化学研究班福强,戴柏青（哈尔滨师范大学,１５００８０）关键词超氧阴离子自由基;嘧啶;ＵＨＦ从头算超氧阴离子自由基（简称超氧自由基,）是一种重要的活性氧,与其他活性氧［如羟自由基（·ＯＨ）和过氧化氢（Ｈ２Ｏ２）等］一...     

超氧阴离子对心肌细胞Ca^2＋平衡的影响及硒的保护作用

在超氧阴离子（Ｏ２＾－）作用下,心肌细胞内游离钙深度（［Ｃａ＾２＋］ｉ）显著升高;心肌细胞膜通透性明显增强;膜脂流动性下降。一定深度的硒代蛋氨酸（Ｓｅ－Ｍｅｔ）亚硒酸钠（ＮａＳｅＯ３）可不同程度地拮Ｏ２＾－的影响。前者作用更为显著。这两种硒化合物也能提高谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨ－Ｐｘ）的活性。综上所述,硒缺乏,高自由基及心肌细胞Ｃａ＾２＋平衡失调三者之间存在着相关性。在Ｏ２＾－作用下,心肌细胞内     

人铜锌超氧化物歧化酶cDNA的克隆,测序及表达

用逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）,以人胎肝组织总ＲＮＡ为模板,扩增了人铜锌超氧化物歧化酶（ｈＣｕ,ＺｎＳＯＤ）的ｃＤＮＡ,并进行序列分析,将该ｈＣｕ,ＺｎＳＯＤｃＤＮＡ重组到Ｔ７启动子控制下的分泌型表达载体ｐＥＴ２２ｂ（＋）中,构建表达质粒ｐＥＴＳＯＤ,并转化大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）。ＳＤＳＰＡＧＥ及蛋白质印迹分析表明,经１ｍｍｏｌ／Ｌ异丙基硫代βＤ半乳糖苷（ＩＰＴＧ）诱导后,可高效表达一分子量为１９ｋＤ的蛋白质,与抗人ＳＯＤ多抗有特异的免疫反应,表达量约为菌体总蛋白质的３０％,具有特异性ＳＯＤ酶活性,酶活力可达１７９７ｕ／ｍｌ培基。     

Ebselen和谷胱甘肽对低密度脂蛋白氧化修饰的抑制和终止作用

研究了人工合成的谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨＰｘ）模拟物－ｅｂｓｅｌｅｎ及其辅助因子谷胱甘肽（ＧＳＨ）对Ｃｕ＾２＋及紫外线（ＵＶ）诱导的低密度脂蛋白（ＬＤＬ）氧化修饰的抑制和终止作用。结果显示：在ＧＳＨ存在的情况下,低至５μｍｏｌ／Ｌ的ｅｂｓｅｌｅｎ就可完全抑制由５μｍｏｌ／Ｌ Ｃｕ＾２＋引发的ＬＤＬ氧化修饰,单独的ｅｂｓｅｌｅｎ和ＧＳＨ没有抑制如果,５０μｍｏｌ／Ｌ的维生素Ｅ只有很微弱的抑制作用。     

铜锌超氧化物歧化酶与过氧化氢反应中羟自由基的形成

应用脱氧核糖降解法研究了离体条件一Ｃｕ,Ｚｎ－ＳＯＤ与Ｈ２Ｏ２反应产生．ＯＨ,并对其机理进行了探讨。Ｈ２Ｏ２可使Ｃｕ,Ｚｎ－ＳＯＤ失活,在失活过程中有．ＯＨ产生。甲酸钠和苯甲酸钠均能不同程度地保护Ｃｕ,Ｚｎ－ＳＯＤ和降低Ｈ２Ｏ２与ＣｕＺｎ－ＳＯＤ反应中。ＯＨ的产额,热失活ＳＯＤ也可和Ｈ２Ｏ２反应生成ＯＨ,且效能高于活性Ｃｕ,Ｚｎ－ＳＯＤ;     

几种氨基酸─铜（Ⅱ）配合物的超氧化物歧化酶活性

用四氮唑蓝光化学还原法对所合成的ＫＣｕ（ＩＤＡ）（Ｓｅｒ）·２Ｈ２Ｏ、ＫＣｕ（ＩＤＡ）（Ａｌａ）·Ｈ２Ｏ、Ｃｕ（ＩＤＡ）（ｅｎ）、ＫＣｕ（ＩＤＡ）（Ｇｌｙ）·Ｈ２Ｏ和Ｃｕ（ＩＤＡ）·２Ｈ２Ｏ（ＩＤＡ＝Ｎ（羧基甲基）－甘氨酸,Ｓｅｒ＝丝氨酸,Ａｌａ＝丙氨酸,ｅｎ＝乙二胺,Ｇｌｙ＝甘氨酸）等５种氨基酸─铜（Ⅱ）配合物进行了活性测定,发现它们均具有天然超氧化物歧化酶活性,其活性依次为０．３４、０．４５、０．５０、０．５４、０．７２Ｃｕμｍｏｌ·Ｌ－１。     

超氧阴离子的产生及其在植物体内作用的研究

超氧阴离子自由基不仅是生物体内重要的自由基之一,也是所有活性氧自由基的前体。近年来许多文献报道生物体的一些重大疾病与超氧阴离子自由基关系密切,因此对超氧阴离子的研究具有非常重要的意义。本文综述了有关超氧阴离子自由基在生物体内及体外的产生、超氧阴离子对生物体的作用、超氧阴离子的检测方法、重点总结了超氧阴离子的产生及其在植物体内的作用。     

高活性重组hG-CSF的制备

我们构建了新的硫氧还蛋白（Ｔｈｉｏｒｅｄｏｘｉｎ）融合表达载体ｐＥＴＴｒｘＬ和ｐＥＴＴｒｘ－ＨｉｓＬ,它们可使功能蛋白在大肠杆菌胞质中以可溶性形式高效表达。利用此表达系统成功地获得的ｈＧ－ＣＳＦ－硫氧还蛋白融合蛋白的高效可溶性表达,表达水平达总细胞可溶蛋白的４１％以上。所表达的ｈＧ－ＣＳＦ－硫氧还蛋白融合蛋白可通过Ｃｕ２＋－ＩＤＡＳｅｐｈａｒｏｓｅＦＦ固相金属螯合层析柱,方便地从细胞破碎可溶上清中直接纯化。所获得的融合蛋白具有ｈＧ－ＣＳＦ特异的生物活性,其比活性达到０．５－１．３３×１０７ｕ／ｍｇ融合蛋白。这样表达的ｈＧ－ＣＳＦ融合蛋白能被ＩｇＡ蛋白酶特异地切割,将ｈＧ－ＣＳＦ从融合蛋白上切下获得与天然蛋白一级结构完全一致的重组ｈＧ－ＣＳＦ 。     

几种氨基酸—铜（Ⅱ）配合物的超氧化物歧化酶活性

用四氮唑蓝光化学还原法对所合成的ＫＣｕ（ＩＤＡ）（Ｓｅｒ）．２Ｈ２Ｏ、ＫＣｕ（ＩＤＡ）（Ａｌａ）．Ｈ２Ｏ、Ｃｕ（ＩＤＡ）（ｅｎ）、ＫＣｕ（ＩＤＡ）（Ｇｌｙ）．Ｈ２Ｏ和Ｃｕ（ＩＤＡ）．２Ｈ２Ｏ（ＩＤＡ＝Ｎ（羧基甲基）－甘氨酸,Ｓｅｒ＝丝氨酸,Ａｌａ＝丙氨酸,ｅｎ＝乙二胺,Ｇｌｙ＝甘氨酸）等５种氨基酸一铜（Ⅱ）配合物进行了活性测定,发现它们均具有天然超氧化物歧化酶活性,其活性依次为０．３４,０．４５．