HMW-GS的SDS-PAGE图谱在小麦品质评价中的应用

采用SDS—PAGE技术对陕西关中地区各时期大面积推广小麦品种、品种资源和新品系的HMW—GS组成进行了分析。在该地区50多年大面积推广的33个品种中,检测出9种HMW亚基(对)及其组成;品种HMW—GS的评分在5～10分之间,平均6．9分;4个时期品种HMW-GS的平均评分有升有降,优质亚基出现的频率普遍偏低;向小麦品种中聚合多种优质HMW—GS将成为陕西关中未来小麦育种的主要目标之一。53种小麦品种资源的亚基或亚基对组合类型比较丰富,具有一批携带优质亚基5 10、1、2*、7 8、14 15或17 18等资源。8个新选品系中,有4个品系携带了多种优质亚基,其中3个品系HMW—GS的评分为10分;Q1043已被审定通过,目前正在陕西关中推广种植。实践证明,采用SDS—PAGE方法对生产上推广品种、品种资源和新选品系的HMW—GS变异研究,有助于在短时间内了解生产上推广小麦品质生产现状、制订育种目标、选配亲本和品系品质性状筛选,是一种非常实用的品质快速检测方法。     

牡山羊草Aegilops juvenalis Puroindoline b基因的克隆

Puroindoline a（Pina）和puroindoline b（Pinb）是控制小麦籽粒硬度的主效基因。根据已报道的小麦Pinb基因的保守序列,设计合成了一对特异性引物,对六倍体牡山羊草Aegilops juvenalis（UUMMDD）的基因组DNA和胚乳eDNA进行Pinb基因扩增、克隆和序列测定,发现了两个新型Pinb等位基因Pinb-allele-1和Pinb-allele-2。该基因全长360bp,编码119个氨基酸残基。它编码的蛋白和麦类作物Puroindoline B（PinB）的成熟蛋白有非常高的同源性,具有麦类作物PinB蛋白所特有的WPTKWWK的色氨酸结构域和10个半胱氨酸所形成的5个二硫键结构。与软粒小麦ev．Capitole的Pinb-D1a相比较,其核苷酸同源性为93．1％、93．3％,氨基酸同源性为90．8％、92．4％。Pinb。allele。1和Pinb—allele一2分别含有11和9个氨基酸变异位点。RT—PCR证实了Pinb—allele一2基因在籽粒胚乳中的表达。SouthernBlot分析结果表明,牡山羊草中含有两个拷贝的Pinb基因,其中包含着与小麦差异较大的籽粒硬度控制基因。     

尿素改善SDS-PAGE分离小分子肽的效果

目的：探讨尿素对Tricine—SDS—PAGE系统分离小分子蛋白的影响。方法：利用常规SDS-PAGE和Tricine-SDS-PAGE分离小分子肽,比较不同组成的分离胶的分离效果。结果：调整聚丙烯酰胺凝胶的分子组成,使丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺的交联度为5．05％,能够改善小分子肽的分离效果。加入36％的尿素比加入甘油可以更有效分离1kD的小肽。但尿素胶聚合太快影响分离效果。结论：尿素改善SDS—PAGE分离小分子肽的效果,制作尿素胶时,宜采用低浓度的AP和TEMED使凝胶慢速聚合。     

Frankia菌全细胞可溶性蛋白图谱分析及分类

本文采用单向聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS—PAGE)对十八株Frankia菌的全细胞可溶性蛋白进行了图谱分析。Frankia菌蛋白图谱不受菌龄的影响。不同接种组的菌株具有不同的蛋白图谱,同一组内的菌株也有所差异。     

牡山羊草Aegilops juvenalis Puroindoline b基因的克隆

Puroindoline a(Pina)和puroindoline b(Pinb)是控制小麦籽粒硬度的主效基因。根据已报道的小麦Pinb基因的保守序列,设计合成了一对特异性引物,对六倍体牡山羊草Aegilops juvenalis(UUMMDD)的基因组DNA和胚乳cDNA进行Pinb基因扩增、克隆和序列测定,发现了两个新型Pinb等位基因Pinb-allele-1和Pinb-allele-2。该基因全长360 bp,编码119个氨基酸残基。它编码的蛋白和麦类作物Puroindoline B(PinB)的成熟蛋白有非常高的同源性,具有麦类作物PinB蛋白所特有的WPTKWWK的色氨酸结构域和10个半胱氨酸所形成的5个二硫键结构。与软粒小麦cv.Capitole的Pinb-D1a相比较,其核苷酸同源性为93.1%、93.3%,氨基酸同源性为90.8%、92.4%。Pinb-allele-1和Pinb-allele-2分别含有11和9个氨基酸变异位点。RT-PCR证实了Pinb-allele-2基因在籽粒胚乳中的表达。Southern Blot分析结果表明,牡山羊草中含有两个拷贝的Pinb基因,其中包含着与小麦差异较大的籽粒硬度控制基因。     

94份小麦种质Puroindoline和HMW-GS分子检测与品质分析

籽粒硬度和高分子量谷蛋白亚基（HMW-GS）对小麦品质起决定作用,为发掘和利用硬度Puroindoline基因和HMW-GS优异等位变异,提升长江中下游麦区中强筋小麦品质,对长江中下游麦区推广品种以及其他麦区优质推广品种和地方品种共计94份材料进行分子检测和品质分析。结果表明,硬度变幅7.21～72.91,软质类型42份、占44.68%,硬质类型42份、占44.68%,混合类型10份、占10.64%。硬度突变基因型共有5种,包括Pina-D1b/Pinb-D1a、Pina-D1r/Pinb-D1a、Pina-D1s/Pinb-D1a、Pina-D1a/Pinb-D1b和Pina-D1a/Pinb-D1p,数量分别为8份、3份、1份、29份和9份,籽粒硬度表现依次为Pina-D1r/Pinb-D1a>Pina-D1s/Pinb-D1a>Pina-D1b/Pinb-D1a>Pina-D1a/Pinb-D1p>Pina-D1a/Pinb-D1b。HMW-GS分析表明,Glu-A1位点1和Null亚基材料比例分别为53.33%和45.56%,此外有1G330E亚基材料1...     

小麦面粉Puroindoline蛋白的提取与纯化

Puroindoline蛋白是小麦面粉中一种非常重要的蛋白质,不仅影响和决定了籽粒的硬度,而且有抗G^＋、G^-菌以及抗真菌的作用。用含4％TritonX-114、100mmol／L pH7．8Tris-HCl缓冲液处理小麦面粉来分离Puroindoline蛋白。经处理后得到的蛋白质混合溶液首先用分子筛葡聚糖G-75纯化,每个收集管内的组分经SDS-PAGE分析,分子量小于31kD的蛋白质组分被回收和集中,回收的蛋白质组分经PEG20000浓缩后,再用离子交换柱羧甲基纤维素（CM-23）进行纯化。其洗脱液分别是双蒸水和NaCl,梯度为0．05～0．7mol／L、8mmol／L pH5．5的MES缓冲液,回收只含15kD的蛋白质的组分,接着用PEG20000浓缩。最后冷冻干燥得到Puroindoline蛋白。     

多种小麦种子储藏蛋白的电泳分析

采用不同的提取液,对１０个小麦品种的非酶功能性种子储藏蛋白进行提取,分别进行梯度凝胶电泳分析。电泳依据提取液的不同,分别采用酸性或碱性系统。对酸性凝胶催化系统,采用Ａｐ－Ｖｃ－ＦｅＳＯ４系统代替Ｈ２Ｏ２－Ｖｃ－ＦｅＳＯ４系统,克服了酸性凝胶的不足,提高了凝胶的性质性能并使之容易操作。应用新的催化系统配制的酸性梯度胶,提高了分辨率。并初步尝试以酸性系统分析种子谷蛋白,获得了成功,经过对不同提取液蛋白     

SDS—PAGE垂直板电泳技术鉴定脆弱类杆菌及相关菌株的探讨

本文报告了采用SDS—PAGE垂直板电泳技术对脆弱类杆菌及相关菌株超声波粉碎的可溶性蛋白抗原进行了电泳谱分析。结果证明这些菌株有三种共同的蛋白抗原组分,但不同菌种间蛋白成分存在着差异。     

植株内种子蛋白多样性与繁育系统

用聚丙烯酰胺凝胶电泳分析了３种锦鸡儿属植物种子的同工酶。分布在典型草原上的小叶锦鸡儿（Ｃａｒａ－ｇａｎａ ｍｉｃｒｏｐｈｙｌｌａ Ｌａｍ．）、典型荒漠的柠条锦鸡儿（Ｃ．ｋｏｒｓｈｉｎｓｋｉｉ Ｋｏｍ．）或荒漠草原的中间锦鸡儿（Ｃ．ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ Ｋｕａｎｇ ｅｔＨ．Ｃ．Ｆｕ）,同一植株不同单粒种子酶谱表现显著的变异,类似于经典遗传分析中互显性等位基因分离现象,７７株植株无一例外,因此可以进行     

高大山羊草Aegilops longissima puroindoline b基因的克隆与表达分析

籽粒硬度是小麦加工品质的重要影响因素。puroindoline a（Pina）和puroindoline b（Pinb）是控制小麦籽粒硬度的主效基因。根据已报导的小麦Pinb基因的保守序列,设计合成了一对特异性引物,对高大山羊草Aegilops longissima（SS）的基因组DNA和胚乳RNA进行Pinb基因扩增、克隆、序列测定和表达分析,发现了一个新型Pinb等位基因。基因长360bp,编码119个氨基酸残基,对应于麦类作物Puroindoline B（PinB）成熟蛋白的结构区域,具有麦类作物Pinb基因特有的WPTKWWK的色氨酸结构域基因序列和10个半胱氨酸所形成的5个二硫键结构。与软粒小麦cv．Capitole的Pinb—D1a相比较,其核苷酸和氨基酸同源性分别为93．3％和92．4％。RT—PCR证实了Pinb基因在籽粒胚乳中的表达。研究结果表明,高大山羊草中包含着与小麦差异较大的籽粒硬度控制基因,为栽培小麦品质改良提供了丰富的遗传资源。     

适合SDS-PAGE分析的黑根霉菌丝蛋白质提取方法

为制备适合SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分析的黑根霉菌丝蛋白样品,采用不同的提取方法对黑根霉的茵丝进行蛋白质提取。结果表明：黑根霉菌丝经低温冷冻过夜后,直接用0．2mol／LNaOH处理10min,再加入上样缓冲液沸水浴,这一方法能快速、方便、有效的提取蛋白质。利用该方法比较了黑根霉与黑根霉甲苯耐受茵菌丝蛋白组成上的差异。     

植物绿叶粗蛋白在SDS-PAGE中向负极泳动的富含苯丙氨酸的碱性蛋白的测定

提取菜心(BrassicacampestrisL.ssp.chinensis(L.)Makinovar.utillisTsenetLee)和生菜(LactucasativaL.)绿叶粗蛋白,经SDS-变性后作醋酸纤维素薄膜电泳,证实这两种蔬菜含有分别向负极泳动和向正极泳动的蛋白。菜心绿叶粗蛋白经SDS-PAGE电泳后,从负极电泳缓冲液中获得向负极泳动的蛋白,其苯丙氨酸含量为57.05%,碱性/酸性氨基酸残基的比例为3.04,表明是富含苯丙氨酸的碱性蛋白。     

银杏不同器官蛋白质动态变化的电泳分析

利用SDS-PAGE电泳技术对不同季节银杏(Ginkgo bilobaL.)雌雄株叶片和枝条中的贮藏蛋白质组分和可溶性蛋白质含量进行了研究。结果表明,银杏叶片中的可溶性蛋白质含量从10月中旬开始逐渐减少,11月中旬降到最低;枝条中的可溶性蛋白质含量从秋末到整个冬季逐渐增加,进入早春后大幅度下降;同一季节内,叶片中的蛋白质含量明显高于枝条,且雄株叶片和枝条的蛋白质含量高于雌株。单向电泳结果表明,银杏雌雄株叶片中相对分子质量为55 000和32 000的蛋白质谱带均于11月中旬前消失,表明这些蛋白质在银杏落叶前发生了转移。在银杏雌雄株枝条中,相对分子质量为59 000、32 000和27 000的蛋白质谱带均在12月底染色最深,进入早春后消失;雄株枝条中相对分子质量为18 000的蛋白质谱带在12月底前稳定出现,进入早春后消失。表明银杏枝条中的这些蛋白质均表现出冬季积累而春季降解的动态过程。     

苦瓜仁蛋白饮料的加工技术

以苦瓜籽仁为原料 ,加工生产苦瓜仁乳饮料 ,探讨了工艺要点 ,对产品质量进行了分析测试     

西藏豌豆资源蛋白质含量及遗传多样性分析

为探究西藏高原豌豆资源遗传多样性,分析种子蛋白质含量与生态地理环境间的关系。本研究搜集整理了54份来自西藏不同生态地理环境条件下的豌豆材料。利用SDS-PAGE对54份豌豆种子水溶性和盐溶性蛋白进行遗传多样性分析,测定种子蛋白质含量,分析地理生态因子(经度、纬度、海拔)与总蛋白含量间的关系。结果表明,54份豌豆材料种子总蛋白含量为17.58%~28.67%,其中水溶性蛋白占86.12%~91.40%,盐溶性蛋占4.76%~8.29%。相关分析表明,西藏豌豆种子总蛋白含量与经度呈显著正相关,与纬度呈正相关,而与海拔高度呈负相关。54份豌豆种子水溶性和盐溶性蛋白SDSPAGE分别检测出蛋白谱带1588条和699条,其中水溶性蛋白分出迁移率不同的谱带类型43种,基因多样性指数为0~0.50,相对分子量在24.71~149.54 Ku之间,且其谱带多集中于24.87~50.41 Ku低相对分子量区和56.34~88.08 Ku高相对分子量区;盐溶性蛋白分离出迁移率不同的谱带类型24条,基因多样性指数0~0.50,相对分子量在24.85~91.24 Ku之间。基于蛋白的谱带的聚类分析将54份豌豆资源可划分为7个类群,遗传相似系数变异范围为0.60~0.91;根据海拔高度将54份豌豆资源划分为4个地理类群,各类群蛋白谱带的基因多样性指数分别为0.23、0.18、0.35和0.31,Shannon's信息指数分别为0.33、0.41、0.52和0.46。西藏豌豆资源遗传变异较丰富,表现出随着海拔高度增加,遗传变异呈增大趋势。同时种子贮藏蛋白含量与经度呈显著正相关,而与纬度和海拔高度相关性不大。     

五种啮齿类动物核型和血清蛋白质的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析

本文对5种啮齿类动物(岩松鼠、花鼠、五趾跳鼠、棕背(鼠平)和岢岚绒鼠)的核型及其血清蛋白质的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳进行了分析。通过分析结果,探讨了它们的核型及血清蛋白在其分类中的意义。     

Analysis of protease digestion patterns in tideland sediments using SDS-PAGE

A method to analyse protein hydrolysis in tideland sediments was developed using sodium lauryl sulphate (SDS)-polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE). Bovine serum albumin was used as a substrate and sonication in SDS solution was employed to extract hydrolysed peptides from tideland sediments. By combining these techniques, digested peptides were fractionated reliably on slab gels by SDS-PAGE.Using this method, the protease activities in a tideland were found to be distributed only in the sediment fraction and not in the seawater. The protease activities in sediments were compared among three tidelands in the Seto Inland Sea. Niho tideland, the most polluted of the three tidelands examined, showed the highest levels of protease activity. Peptide cleavage patterns were very similar among the tidelands despite the differences in levels of protease activity, suggesting that the tidelands all contain common types of protease. Furthermore, the properties of proteases in tideland sediments were also characterised using the present method.     

腰带长体茧蜂Macrocentrus cingulum毒液和卵巢蛋白的电泳分析

寄生蜂毒液和卵巢蛋白在寄生过程中起着重要作用,蛋白成分和性质的研究日益深入.本文主要通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)试验,分析了腰带长体茧蜂毒液和卵巢蛋白的分子量组成.结果表明,腰带长体茧蜂毒液蛋白图谱显示约有7条蛋白带介于43～100 kDa之间,含量较高的三条带为97kDa、64kDa、45kDa;卵巢蛋白图谱显示约有12条蛋白带,位于30～200 kDa之间,含量较高的两条带为39kDa、43kDa.并对毒液和卵巢的生物学功能进行了探讨.