高效液相色谱法测定肌肽滴眼液中L-肌肽的含量及有关物质

目的:建立肌肤滴眼液中L-肌肤的含量测定的HPLC方法.方法:采用Kromasil NH2色谱柱(200 mm × 4.6mm,5 μm),流动相为乙腈-40 mmol·L-1磷酸氢二钾溶液(44:56,磷酸调pH 6.3).流速1.0 mL·min-1,检测波长为210 ml,柱温为35℃.结果:肌肤在9.93～99.3μg·mL-1范围内线性关系良好(r=0.999 8),平均回收率为99.8%(RSD=1.0%,n=9),滴眼液中含L-肌肽的标示百分含量为97.0%～102.0%.结论:该方法操作简便、重复性好、专属性强,可用作肌肤滴眼液中L-肌肽的质量控制.     

钝齿棒杆菌中异源表达N-乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶合成L-鸟氨酸的研究

目的:对一株产鸟氨酸的钝齿棒杆菌Corynebacterium crenatum SYPA5-5/△proB/△argF(SYPO-1)进行代谢工程改造,筛选不同细菌来源的N-乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶在大肠杆菌中克隆与表达,纯化后对其进行酶学性质的比较;将黏质沙雷氏菌Serratia marcescens Y213来源的Smarg E基因编码的N-乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶在L-鸟氨酸生产菌株C.crenatum SYPO-1中过量表达,进一步提高L-鸟氨酸的产量。方法:通过利用pDXW10穿梭质粒对不同来源的N-乙酰鸟氨酸脱乙酰化酶进行克隆表达和酶学性质比较,选择性质最优来源的N-乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶编码基因Smarg E在产L-鸟氨酸重组钝齿棒杆菌中表达,考察重组菌株发酵过程中参数的变化。结果:来源于S.marcescens Y213的N-乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶比酶活最高为798.98U/mg,最适pH为7,最适温度为37℃,0.1mmol/L的Mg~(2+)、Li~+、Mn~(2+)促进酶的比酶活提高了50%;在钝齿棒杆菌中表达N-乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶酶活达到128.4U/ml,显著提高了钝齿棒杆菌中胞内乙酰基循环水平;5L发酵罐发酵重组菌株96h,L-鸟氨酸的产量达到38.5g/L,比出发菌株,L-鸟氨酸的产量提高了33.2%,产率达0.401g/(L·h)。结论:筛选出最佳来源的N-乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶,在鸟氨酸生产菌株C.crenatum(SYPO-1)中过量表达,可以促进鸟氨酸的前体物质N-乙酰鸟氨酸的快速消耗,实现鸟氨酸的积累。     

三化螟与荔枝蝽体液氨基酸和脂肪体转氨酶与谷氨酸脱氢酶的研究

1.用纸层析的方法测定了水稻、三化螟与荔枝蝽体液的氨基酸含量。2.在三化螟幼虫脂肪体中,观察到谷天转氨酶、谷丙转氨酶与鸟氨酸转氨酶的活力。在荔枝蝽的脂肪体中有11种氨基酸(L-天门冬氨酸、L-丙氨酸、L-异白氨酸、L-白氨酸、L-缬氨酸、L-苯丙氨酸、L-鸟氨酸、L-酪氨酸、L-色氨酸、L-β-丙氨酸与DL-γ-氨基丁酸)可与α-酮戊二酸进行转氨作用,以形成谷氨酸。3.在三化螟与荔枝蝽脂肪体中均存在谷氨酸脱氢酶。     

顶空毛细管气相色谱法测定异丙托溴铵中7种残留有机溶剂

目的: 建立顶空毛细管气相色谱法, 测定异丙托溴铵中甲醇?丙酮?异丙醇?二氯甲烷?乙酸乙酯?三氯甲烷?甲苯等7 种有机溶剂残留量。方法: 色谱柱:DM-624( 聚乙二醇PEG-20M) 毛细管柱(30.0m×0.53mm,3.00μm)；载气: 氮气, 流速为2.0mL·min-1；柱温:程序升温, 初始温度为40℃ , 保持5min, 然后以6℃·min-1 升温到150℃ , 再以50℃·min-1 升温到230℃ , 保持3min；检测器: 氢火焰离子化检测器, 温度为250℃；进样口温度:240℃；顶空进样量:1.0mL。结果: 甲醇?丙酮?异丙醇?二氯甲烷?乙酸乙酯?三氯甲烷和甲苯分别在15.02~900.92mg·L-1(r=0.9999)、21.03~1262.00mg·L-1(r=0.9999)、21.30~1278.16mg·L-1(r=0.9999)、7.80~468.25mg·L-1(r=0.9998)、22.22~1332.97mg·L-1(r=0.9999)、0.31~18.79mg·L-1(r=0.9992) 和3.48~209.02mg·L-1(r=0.9998) 范围内线性关系良好,平均回收率分别为98.1%(RSD=0.19%)、100.1%(RSD=1.08%)、101.4%(RSD=1.03%)、98.1%(RSD=0.40%)、98.1%(RSD=1.55%)、98.9%(RSD=3.08%) 和101.8%(RSD=2.12%)。结论: 该方法简便?灵敏?重复性好, 结果准确, 适用于异丙托溴铵中残留有机溶剂的检测。     

柱前衍生化HPLC法测定加巴喷丁胶囊中主药的含量

目的:建立柱前衍生化HPLC法测定加巴喷丁胶囊中的主药含量。方法:对加巴喷丁柱前衍生化后进行测定,选择Sinochrom-ODS(250 mm×4.6 mm,5μm)为固定相,0.33 mol.L-1乙酸水溶液-甲醇-乙腈(30∶70∶30)为流动相等度洗脱,流速1.0 mL.min-1,检测波长336 nm。结果:加巴喷丁在1.0～12.0 mg.L-1质量浓度范围内线性关系良好,其平均加样回收率为99.4%(n=9),RSD为0.84%;测得样品中加巴喷丁含量为标示量的99.82%。结论:该法便捷可靠,专属性强,可用于加巴喷丁胶囊中主药的含量测定。     

蒜粉中蒜氨酸酶的分离纯化及性质测定

蒜粉以Na/K磷酸缓冲液抽提、25%～40%(NH4)2SO4分级沉淀后,用Sephadex G-200柱分离得到纯化200倍的电泳纯蒜氨酸酶.测定其性质的结果表明,此酶在25℃下对半胱氨酸亚砜的Km为0.87 mmol·L-1,Vmax为0.46μmol·min-1,最适反应温度为40℃,热稳定性的温度范围在45℃以下,最适pH为6.6.     

不同方法测定聚乙二醇化重组人干扰素α-2b注射液的纯度

目的:建立聚乙二醇化重组人干扰素α-2b(PEG.rhIFNα-2b)注射液纯度测定方法.方法:采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE),对凝胶银染并扫描;采用体积排阻高效液相色谱法(SEC-HPLC),使用TSK G3000SW(7.8mm× 300mm)凝胶柱,流动相:0.2 mol·L-1PB-0.2 mol·L-1NaCl-异丙醇(48.5/48.5/3,v/v);流速:0.6 ml·min-1;检测波长:280 nm;采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC),使用C8(4.6mm×250mm)色谱柱,流动相:A液:0.1%三氟乙酸溶液;B液:95%乙腈的A液,梯度:0%～100%B(30min);流速:1mL·min-1;检测波长:214nm.结果:三种方法测得PEG-rhIFNα-2b的纯度分别为100%、100%、98.90%.结论:三种方法均适用于PEG.rhIFNα-2b注射液纯度测定,检测结果符合生物制品质量控制规定.     

木瓜凝乳蛋白酶的酶学性质研究

以酪蛋白为底物,木瓜凝乳蛋白酶的最适反应温度为80℃(pH7.0),最适pH为3-5(37℃)。在pH为7.0、反应温度为37℃的条件下,木瓜凝乳蛋白酶的Km值为1.25g·L-1,Vmax为0.1 g·L-1min-1。低浓度的NaCl和Ca2+对木瓜凝乳蛋白酶有激活作用,盐酸胍对其有抑制作用。     

GC 法测定丙酮酸乙酯注射液中EP 的含量

目的:建立测定丙酮酸乙酯的含量测定方法。方法:采用气相色谱法,以环戊酮为内标物。色谱柱为VARIAN CP7502(25 m×0.25 mm×0.25μm),柱温115℃,进样口温度210℃,FID检测器温度210℃,氮气(载气)流量为30 ml.min-1;氢气(燃气)流量为40 ml.min-1;空气(助燃气)流量为400 ml.min-1,分流比1:100。结果:EP进样浓度在0.50035 mg.ml-1～9.0063 mg.ml-1范围内与峰面积积分呈良好的线性关系(r2=0.9996),平均加样回收率为99.76%,RSD为0.46%。结论:本方法简便、快速、准确、重复性好,可用于丙酮酸乙酯注射液的质量控制。     

钝齿棒杆菌的代谢改造：L-鸟氨酸与L-瓜氨酸合成菌株的构建

【目的】对一株产L-精氨酸的钝齿棒杆菌(Corynebacterium crenatum)SYPA5-5进行代谢工程改造,构建L-鸟氨酸和L-瓜氨酸合成菌株,并考察其发酵生产相应氨基酸的性能。【方法】分别敲除菌株SYPA5-5鸟氨酸氨甲酰转移酶(Ornithine carbamoyltransferase,OTC)的编码基因argF和精胺琥珀酸合成酶(Argininosuccinate synthase,ASS)的编码基因argG,构建能够合成L-鸟氨酸及L-瓜氨酸的重组菌株SYPA5-5△argF和SYPA5-5△argG;考察不同营养条件对上述重组菌株生长和相应氨基酸积累的影响。【结果】添加0.3 g/L L-精氨酸可满足SYPA5-5△argF的生长及L-鸟氨酸积累所需,L-鸟氨酸产量可达21.5 g/L;添加L-精氨酸有利于SYPA5-5△argG的生长,但不利于L-瓜氨酸的积累;不添加L-精氨酸时,L-瓜氨酸产量可达15.2 g/L,同时积累6.8 g/L的L-谷氨酸。【结论】分别敲除L-精氨酸生产菌株SYPA5-5的argF及argG基因,可实现L-精氨酸合成途径的中间代谢物L-瓜氨酸和L-鸟氨酸的积累,拓展了该菌株的工业应用范围。     

L-鸟氨酸的混合菌种发酵研究

谷氨酸棒杆菌可发酵葡萄糖产L-鸟氨酸。通过连续筛选与驯化筛选到了产量较高的生产菌株CG1006。以GC/MS对发酵液成分的定性分析及鸟氨酸的产量为依据,优化了培养条件,产量从最初的14.346g/L提高到40.416g/L。初步考察了酵母菌CG1006-1对发酵液成分及产量的影响。结果表明混合菌种发酵可纯化发酵液成分。     

Effects of by-products of fermentation of banana pseudostem on ethanol separation by pervaporation

In this work, we performed recovery of ethanol from a fermentation broth of banana pseudostem by pervaporation (PV) as a lower-energy-cost alternative to traditional separation processes such as distillation. As real fermentation systems generally contain by-products, it was investigated the effects of different components from the fermentation broth of banana pseudostem on PV performance for ethanol recovery through commercial flat sheet polydimethylsiloxane (PDMS) membrane. The experiments were compared to a binary solution (ethanol/water) to determine differences in the results due to the presence of fermentation by-products. A real fermented broth of banana pseudostem was also used as feed for the PV experiments. Seven by-products from fermented broth were identified: propanol, isobutanol, methanol, isoamyl alcohol, 1-pentanol, acetic acid, and succinic acid. Moreover, the residual sugar content of 3.02 g/L¹ was obtained. The presence of methanol showed the best results for total permeate flux (0.1626 kg·m⁻²·h⁻¹) and ethanol permeate flux (0.0391 kg·m⁻²·h⁻¹) during PV at 25°C and 3 wt% ethanol, also demonstrated by the selectivity and enrichment factor. The lowest total fluxes of permeate were observed in the experiments containing the acids. Better permeance of 0.1171 from 0.0796 kg·m⁻²·h⁻¹ and membrane selectivity of 9.77 from 9.30 were obtained with real fermentation broth than with synthetic solutions, possibly due to the presence of by-products in the multicomponent mixtures, which contributed to ethanol permeation. The results of this work indicate that by-products influence pervaporation of ethanol with hydrophobic flat sheet membrane produced from the fermented broth of banana pseudostem.     

Studies on cephalosporin-C production in an air lift reactor using different growth modes of Cephalosporium acremonium

This paper deals with the studies on Cephalosporin-C production in a lab-scale airlift reactor using Cephalosporium acremonium. Various growth modes, viz. pellets and Siran supported bioparticles were used to improve the process over conventional free mycelial fermentation. Cephalosporin-C production was significantly improved by using bioparticles over the free mycelial culture, probably due to the enhanced mass transfer in the fermentation broth. However, the biofilm of the bioparticles became unstable as the fermentation proceeded, and increase in the free cells in the broth occurs. The maximum specific growth rate of free cells, pellets and Siran carrier were observed to be 0·037, 0·033 and 0·045 h⁻¹, respectively. The oxygen transfer coefficient also improved for the immobilised modes (100 h⁻¹, 70 h⁻¹ for Siran carrier and pellets) and thereby enhanced specific antibiotic productivity, 18–28% were observed.     

微白黄链霉菌G-1发酵液抗真菌特性研究和发酵条件优化

为明确微白黄链霉菌(Streptomyces albidoflavus)G-1发酵液抗真菌特性和较优发酵条件,本研究采用平板对峙法、生长速率法、单因素试验、RDA分析和响应面CCD设计分别对其抗真菌特性、产抗菌物质关键限制因子和发酵条件较优组合进行了探究.结果 表明:S.albidoflavus G-1发酵液对马铃薯早...     

土壤拮抗放线菌的分离筛选及其抑菌物质特性的研究

目的从土壤中筛选拮抗能力强且抑菌特性稳定的放线菌菌株。方法采用双层琼脂法筛选出4株拮抗放线菌菌株,然后采用杯碟法测这4株菌株发酵液提取物的抗菌谱、最小抑菌浓度、热稳定性和酸碱稳定性。结果 4株菌株发酵液提取物都能抑制金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌和白色念珠菌的生长。以金黄色葡萄球菌为指示菌测发酵液提取物的最小抑制浓度,6#和9#拮抗作用较强,发酵液提取物稀释0.125mg/ml仍有抑菌作用。6#菌株在100℃处理30min后仍有40%的抑菌活性。6#菌株发酵液提取物在碱性环境条件下比在酸性环境条件下稳定。结论 4株菌株中6#菌株发酵液提取物具有拮抗能力强、最小抑菌浓度低和在碱性条件下活性较稳定的特点。     

L-鸟氨酸高产菌的原生质体融合育种

以谷氨酸高产菌S9114和谷氨酸棒杆菌GS538为出发菌株,应用原生质体融合技术,定向选育出一株L-鸟氨酸高产菌株RH169,该菌株能在发酵液中积累L-鸟氨酸,质量浓度可达19.3 g.L-1。     

贝莱斯芽孢杆菌TMQ-KSL-1分离鉴定及其发酵液对番茄根结线虫的生防作用

镰刀菌(Fusarium spp.)和根结线虫(Meloidogyne spp.)都是植物的重要病原物,这两种病原物在寄主植物中存在着非常复杂的互作关系,可导致严重的植物土传病害。为探寻对番茄根结线虫病害具有高效防治作用的优良菌株,本研究以禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)为靶标病菌,采用平板稀释涂布法从多年种植番茄的设施大棚土壤中分离和筛选到一株抑菌效果较好的生防细菌菌株TMQ-KSL-1,根据形态特征、生理生化特性和16S rRNA基因测序对该菌株进行鉴定;测定不同浓度的发酵液及发酵上清液对根结线虫卵孵化率以及根结线虫二龄幼虫死亡率的影响,通过盆栽实验分析其发酵液对根结线虫病害的防治效果。结果表明,菌株TMQ-KSL-1具有较强的杀线虫活性,其发酵液和发酵上清液处理48 h线虫卵孵化抑制率分别为94.76%和90.72%;处理24 h番茄根结线虫二龄幼虫的校正死亡率分别为100%和97.37%;菌株TMQ-KSL-1发酵液100倍稀释液、200倍稀释液对番茄根结线虫病害防治效果分别为59.54%和12.14%,且100倍液处理防效与阿维菌素500倍液处理防效(6...     

发酵液中多拉菌素的提取和萃取条件研究

采用单因素实验,分别研究提取试剂、发酵液放置时间、pH值和温度对发酵液中多拉菌素提取效果的影响;然后以乙酸乙酯为萃取试剂,研究萃取次数及萃取体积对多拉菌素萃取效果的影响。结果显示,甲醇为最佳提取试剂;发酵液在pH为3～11、温度为20～80℃的条件下放置144 h,多拉菌素均能稳定存在,提取得到的多拉菌素的质量浓度没有显著变化;浓缩提取液液经2倍体积乙酸乙酯萃取2次即可。该条件下多拉菌素的质量浓度和萃取率分别为151.78μg/mL和98.00%。     

米曲霉耐热木聚糖酶纯化及酶学特性研究

对米曲霉原始发酵液中耐热木聚糖酶进行纯化和酶学特性研究,利用甘蔗渣为碳源培养米曲霉,通过超滤和阴离子交换柱两步纯化得到木聚糖酶XynH1,分子量35．402kDa,利用飞行时间质谱和SDS—PAGE分析,推断XynH1为XylanaseXynF1,分子量为35．402kDa。XynH1属于糖苷水解酶家族10,酶活为442．2IU／nag,最适pH和温度分别为pH6．0和65℃,80℃以下及pH4．0～10．5范围内较稳定。