琥珀酸发酵研究进展*

琥珀酸在化工和食品行业应用广泛。与传统化学方法相比,微生物发酵法生产琥珀酸具有诸多优点：生产成本具有竞争力;利用可再生的农业资源包括二氧化碳作为原料,避免了对石化原料的依赖;减少了化学合成工艺对环境的污染。主要介绍产琥珀酸微生物的来源和育种,代谢途径和发酵调控机制以及产品回收工艺的进展。     

白僵菌固态发酵试验研究*

以产孢量为指标,筛选出白僵菌固态发酵的培养基为:90%麦麸+5%玉米粉+5%黄豆粉,原孢粉的产孢量可达244.7亿/g。在25m³发酵罐内进行浅盘固态发酵,培养基的最适起始含水率为60%~65%;最佳通气条件为:前12h不通气,12~48h通气量为1:2,48~144h的通气量为1:1;而温度只需在12~48±8h内进行控制。常温干燥能最大限度地维持白僵菌的活孢率。     

羊肚菌液态发酵的研究*

通过摇瓶正交试验研究了圆锥羊肚菌液体发酵的条件,选出最佳培养基配方、接种量、培养温度、pH、通气量,培养时间等参数。在此基础上,应用VIRTIS公司生产的2L－自控发酵罐进行了分批发酵,摸索到了羊肚菌液态深层发酵的基本规律,然后分别以淀粉和玉米粉为碳源进行了补料分批发酵,获得其干细胞产量为25．4g／L和27．4g／L,生长速率为0．45g／（L·h）和0．51g／（L·h）,以碳源为基准的产量得率系数（yx／s）为0.72（g／g）和0.75（g／g）等数据。实验结果表明,羊肚菌的液态深层发酵已达到了真菌菌丝液态发酵的正常水平。     

黄单胞菌多糖发酵中试*

野油菜黄单胞菌（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ）Ｌ４在两吨发酵罐中,以蔗糖为底物发酵７２ｈ,发酵液粘度达到６０００～１２０００ｃｐ,转化率平均达到６２．４５％。     

发酵生产S-腺苷-L-蛋氨酸培养条件的优化研究*

考察了摇瓶发酵生产S-腺苷-L-蛋氨酸过程中碳源、氮源、无机盐和生长因子以及培养过程中补加L-蛋氨酸时间对S-腺苷-L-蛋氨酸的产量、含量及生物量的影响。并通过均匀实验设计对培养基配方进行优化,在30℃、180 r/m in的培养条件下,得到最后的培养基配方为:葡萄糖30g,酵母粉11g,(NH₄)₂SO₄12g,K₂HPO₄.3H₂O 5g,KH₂PO     

一株产木聚糖酶链霉菌的鉴定及发酵产酶*

以木聚糖为唯一碳源,筛选出一株高产木聚糖酶生产菌株。该菌株经形态特征、 培养特征、生理生化和细胞壁组分分析等实验,鉴定为卷须链霉菌（Streptomyces cirratus).摇瓶发酵产酶实验表明：培养基最佳初始pH值为6．0;玉米芯水不溶木聚糖和蛋白胨分别是最佳的碳源和氮源;添加0．5％吐温80使得木聚糖酶活力提高到原来的2．5倍,发酵液最高酶活达到623u／mL。     

高发酵度酵母的筛选及鉴定

主要研究了Saccharomyces cerevisiae wx、Saccharomyces cerevisiae qp、Saccharomycescerevisiae nq、Saccharomyces cerevisiae cx、Saccharomyces cerevisiae hs和Saccharomyces cerevisiae3322(以下简称S.C.wx、S.C.qp、S.C.nq、S.C.cx、S.C.hs和S.C.3322)6株酵母菌的形态、同化氮源、发酵力、α-葡萄糖苷酶活力等生理特性,通过实验比较发现S.C.nq和S.C.cx两株菌种在利用糖的种类、同化氮源、真正发酵度及α-葡萄糖苷酶活力等方面较高,因此对这两株菌种进行了还原双乙酰、糖代谢两方面性质的比较,结果表明:两株菌种在还原双乙酰、糖代谢两方面效果显著,筛选出两株优良的高发酵度啤酒酵母菌种。     

啤酒酵母多糖的提纯、化学组成及抗氧化性质鉴定*

以啤酒酵母为材料 ,通过化学抽提法得到水溶性提取物Ma1 ;经薄层层析分析表明 :Ma1主要含有甘露糖 ;经检测分析 ,Ma1含有蛋白成分 ,为蛋白多糖 ;氨基酸自动分析仪分析表明Mal含有多种氨基酸 ,包括 7种必需氨基酸和 9种非必需氨基酸 ;邻苯三酚自氧化法检测发现多糖能够抑制邻苯三酚自氧化 ,具有抗氧化能力。     

一种筛选自然感受态缺陷突变株方法的改进*

对平板筛选自然感受态缺陷突变株的方法进行了改进,采用改进后的方法可以节省转化ＤＮＡ用量８０％以上,而且筛选时转化ＤＮＡ相对浓度提高约１倍,筛选效果较好。     

Multiple α-Glucoside Transporter Genes in Brewer’s Yeast

Maltose and maltotriose are the two most abundant fermentable sugars in brewer’s wort, and the rate of uptake of these sugars by brewer’s yeast can have a major impact on fermentation performance. In spite of this, no information is currently available on the genetics of maltose and maltotriose uptake in brewing strains of yeast. In this work, we studied 30 brewing strains of yeast (5 ale strains and 25 lager strains) with the aim of examining the alleles of maltose and maltotriose transporter genes contained by them. To do this, we hybridized gene probes to chromosome blots. Studies performed with laboratory strains have shown that maltose utilization is conferred by any one of five unlinked but highly homologous MAL loci (MAL1 to MAL4 and MAL6). Gene 1 at each locus encodes a maltose transporter. All of the strains of brewer’s yeast examined except two were found to contain MAL11 and MAL31 sequences, and only one of these strains lacked MAL41. MAL21 was not present in the five ale strains and 12 of the lager strains. MAL61 was not found in any of the yeast strains. In three of the lager strains, there was evidence that MAL transporter gene sequences occurred on chromosomes other than those known to carry MAL loci. Sequences corresponding to the AGT1 gene, which encodes a transporter of several α-glucosides, including maltose and maltotriose, were detected in all but one of the yeast strains. Homologues of AGT1 were identified in three of the lager strains, and two of these homologues were mapped, one to chromosome II and the other to chromosome XI. AGT1 appears to be a member of a family of closely related genes, which may have arisen in brewer’s yeast in response to selective pressure.     

降解山楂汁中柠檬酸酵母菌的筛选及其降酸特性研究

采用酸碱滴定法和高效液相色谱法对山楂汁中主要有机酸进行分析,结果表明柠檬酸占总酸的83.5%;分别以柠檬酸和山楂黄酮为唯一碳源,筛选能降解柠檬酸而不利用山楂黄酮的酵母菌,结果获得6株菌;再以山楂汁为培养基进行复筛,得到一株酵母菌,该菌能有效降解山楂汁中柠檬酸而对山楂黄酮的影响较小;经鉴定这株菌属于毕赤酵母属,定名为Pichia sp.Y1。发酵特性研究表明该菌在山楂汁中20℃培养3d,总酸量从19.60g/L下降到352g/L,而对黄酮含量无显著影响。     

Assays of glucose tolerance factor and its mode of action,studied with Brewer's Yeast

Glucose tolerance factor (GTF) has usually been assayed by manometric measurement of CO₂ evolved when glucose was metabolizing glucose. By using ¹⁴C labeled substrates it has been shown that GTF increases the decarboxylation of pyruvate to ethanol and CO₂. Thus in addition to measuring CO₂ evolution, the enzymatic estimation of the increased ethanol production can be used to assay GTF. A further effect of GTF was to cause increased carboxylation of pyruvate to substrates that are used in the biosynthesis of cell substance. The metabolic sites of action of GTF are discussed.     

产菊粉酶酵母菌株的筛选及菌种鉴定

经过初筛、复筛,得到2株菊粉酶活力较高的酵母菌Y9和Y27,其发酵液酶活分别达到19.4 U/mL和14.1 U/mL,两者胞外菊粉酶分泌较少,主要分布在酵母菌菌体上。通过细胞形态、生理生化特征及Biolog微生物鉴定系统鉴定,将Y9确立为Cryptococcus albidus(浅白隐球酵母),Y27确立为Pichia guilliermondiiA(季也蒙毕赤氏酵母A)。     

淀粉基高吸水树脂降解菌的筛选及初步鉴定*

以淀粉接枝丙烯酸高吸水树脂为唯一碳源,从土壤中筛选出4个菌株,纯化后进行菌种鉴定。经过表面观察和理化实验,初步鉴定出它们分别为两类放线菌(放线菌科,Actinomycetaceaes和固氮菌科,Azotobacteraceae)、酵母菌(隐球酵母科,红酵母属,Rhodotonda)和霉菌(毛霉科,根霉属,Rhizopus sp．),为深入研究高吸水树脂的降解性能提供参考。     

asr基因酵母双杂交系统的构建及筛选鉴定

为研究asr作用的分子机制,分析该基因表达产物在体内相互作用的靶蛋白,分别构建诱饵质粒载体和转基因拟南芥cDNA文库,通过转入酵母细胞中,初步的鉴定分析证实成功构建了诱饵质拉载体和拟南芥cDNA文库.构建的酵母双杂交系统为发现asr基因表达产物在体内相互作用的靶蛋白奠定了基础.     

云南5个地区戟叶酸模花中酵母菌和类酵母的多样性

[目的]研究云南5个地区(晋宁、祥云、程海、泸沽湖、洱海)的戟叶酸模(Rumex hastatus)花中的酵母菌和类酵母.[方法]采用涂布平板法对5个地区的戟叶酸模花中酵母菌和类酵母进行分离,通过26S rDNA Dl/D2区域序列分析并结合形态观察对分离获得的酵母菌和类酵母进行鉴定;采用胞外酶定性筛选培养基进行产酶筛选;用苏丹黑B染色法筛选产油脂菌株.[结果]从戟叶酸模花中分离得到82株酵母菌和99株类酵母;82株酵母菌鉴定为6个属16个种和1个潜在新种,99株类酵母鉴定为短梗霉属(Aureobasidium)的普鲁兰类酵母(A.pullulans)及3个变种;戟叶酸模花中的优势属是类酵母短梗霉属,其次为红酵母属(Rhodotorula)和隐球酵母属(Cryptococcus);筛选到134株具有产胞外酶活性和83株产油脂的酵母菌和类酵母.[结论]研究结果显示5个地区的戟叶酸模花中酵母菌和类酵母种类多样性较为丰富,并具有产淀粉酶、蛋白酶、纤维素酶、脂肪酶和油脂的特点,有潜在的应用前景.     

豆豉纤溶酶产生菌分离和鉴定

从全国各地收集豆豉样品,采用不同的培养基进行富集培养,并利用纤维蛋白平板法高效获得了13株形态差异较大的产纤溶酶菌株。通过传统方法、化学方法以及16S rRNA序列分析对这13株菌进行分类鉴定,它们分属于芽孢杆菌属、链霉菌属、假单胞菌属以及节杆菌属,包括9种细菌,丰富了豆豉纤溶酶产生菌菌种资源。     

快速LacZ检测法提高酵母双杂交试验的敏感度

目的：建立快速简单敏感准确的LacZ检测法。方法：将在SD/-Trp-Leu培养液中过培养的待检测酵母菌直接点样在滤纸上进行LacZ检测,筛选出LacZ阳性克隆。结果：将小鼠3T3文加转化含有WWP1的酵母菌,选出10个较大的SD/-Trp-Leu-His培养阳性的克隆,利用快速LacZ检测法检测这10个酵母克隆,结果在5h内不同程度地变蓝,呈阳性结果;而作为对照的传统检测方法在8h内的检测结果均显示为阴性。结论：采用快速LacZ检测法检测蛋白质之间的相互作用可以大大缩短筛选的时间,简化筛选的步骤,增加检测的敏感度和准确性。     

1，6－二磷酸果糖产生菌的筛选及最佳培养条件的研究

１,６－二磷酸果糖（ＦＤＰ）广泛应用于治疗心血管疾病．本文进行了１,６－二磷酸果糖产生菌的筛选和最佳条件的研究。筛选出菌株ＨＹ２具有较高的产１,６－二磷酸果糖酶活力,高达１６０ｍｇＦＤＰ／ｇｗｅｔｃｅｌｌｓ,菌体生长的最适培养条件为：麦芽汁培养基糖度为１２柏林,培养温度为２８℃,ｐＨ６．０～６．５,菌体收率达７．０％左右。