生物肽SP对NK细胞NKG2D/NKG2A受体表达的影响

选择NK92-MI细胞为研究体系,研究SP对NK细胞的杀伤活性及功能性受体NKG2D/NKG2A表达的影响,以探讨SP对NK细胞功能的调节作用机制。采用MTT法测定NK92-MI细胞对K562细胞的杀伤活性;采用Real-Time PCR和流式细胞术检测NK92-MI细胞活化性受体NKG2D和抑制性受体NKG2A的基因表达和膜表达。10-14～10-8 mol/L的SP在体外可明显增强NK92-MI细胞的杀伤活性。该浓度范围的SP均可上调NKG2D/NKG2A的mRNA水平;10-14～10-8 mol/L的SP均上调NKG2D/NKG2A的膜表达,较低浓度（10-14 mol/L）的SP仅使NKG2D表达上调,而NKG2A表达无明显变化;SP刺激NKG2D膜表达增加的程度高于NKG2A。生物肽SP调节NK细胞功能性受体NKG2D/NKG2A的表达,可能是SP增强NK细胞杀伤活性的一种原因。     

双歧杆菌脂磷壁酸对B16荷瘤小鼠NK细胞受体NKG2D及其配体的影响

目的探讨双歧杆菌脂磷壁酸（LTA）对黑色素瘤B16荷瘤小鼠NK细胞受体NKG2D及其配体的影响。方法将黑色素瘤B16细胞接种于C57BL／6小鼠皮下,待触及肿块后于荷瘤小鼠皮下注射双歧杆菌LTA。采用MTT、流式细胞术（FCM）、RT-PCR方法分别检测经双歧杆菌LTA处理后B16荷瘤小鼠NK细胞杀伤活性、NK细胞NKG2D受体蛋白表达以及肿瘤组织内Rae-1、H60 mRNA表达的变化。结果与对照组相比,经双歧杆菌LTA处理后,B16荷瘤小鼠的NK细胞杀伤活性增强（P〈0．05）,NK细胞受体NKG2D表达明显增加（P〈0．05）,肿瘤组织Rae-1、H60 mRNA表达上升（P〈0．05）,并具有浓度依赖性。结论双歧杆菌LTA能够增强B16荷瘤小鼠NK细胞的杀伤活性,其机制可能与上调NK细胞受体NKG2D的蛋白表达和肿瘤组织Rae-1、H60 mRNA的表达有关。     

国外研究信息

丙型肝炎病毒通过NS5A介导的炎性细胞因子产生紊乱逃避NKG2D依赖的自然杀伤细胞反应了解丙型肝炎病毒(HCV)如何诱导和逃避宿主自然杀伤(NK)细胞介导的免疫反应对设计有效的治疗方案具有重要意义。该研究报道了HCV逃避NK细胞介导反应的一种新策略,即通过降低NKG2D活化受体的表达。该研究表明,慢性HCV感染与肝细胞上NKG2D的配体     

5-氟尿嘧啶增强HeLa细胞对自然杀伤细胞敏感性研究

目的用5-氟尿嘧啶（5-fluorouracil,5-FU）处理HeLa细胞,检测其NKG2D配体MICA的表达及其对NK92细胞杀伤敏感性的变化。方法不同浓度的5-Fu处理HeLa细胞,在不同时间点用半定量PCR及流式细胞术检测HeLa细胞表面的NKG2D配体MICA在RNA及蛋白水平的表达变化情况,用MTT法检测NKG2D抗体封闭NK92细胞的NKG2D受体前后,NK92细胞对HeLa细胞的杀伤作用。结果不同浓度的5．Fu作用于HeLa细胞后,半定量RT—PCR结果显示MICA表达随5-Fu作用浓度增加逐渐增高。而且40μg／ml5．Fu作用于HeLa细胞后随着作用时间的延长（0、8、16、24h）MICA表达增加,流式细胞术检测结果表明,MICA表达的增加主要依赖于未凋亡细胞的MICA表达。在40μg／ml5-FU作用24h,效靶比为2．5：1,5：1,10：1,20：1时都检测到NK92细胞对HeLa细胞的杀伤增强,杀伤作用可部分被NKG2D抗体抑制。结论5-FU能够上调HeLa细胞表面NKG2D配体MICA的表达,增强HeLa细胞对NK92细胞的敏感性,提示化疗联合NK细胞免疫治疗宫颈癌可产生协同作用,提高治疗效果。     

自然杀伤细胞受体及其配体表达的转录和表观遗传调控

自然杀伤(natural killer cell,NK)细胞受体及其配体在NK细胞发挥抗病毒、抗肿瘤和免疫调节作用中起重要作用.NK细胞功能的发挥取决于NK细胞受体及其配体的表达水平和其所传递信号的综合.病毒、肿瘤和热休克等刺激可以通过激活相应的转录调节因子,提高启动子活性而上调NKG2家族受体及其配体的表达,而启动子区DNA的甲基化状态、组蛋白的乙酰化和甲基化等表观遗传调控,在NK细胞受体及其配体的表达方面亦起重要作用,并决定NK细胞受体的克隆性分布.深入探讨NK细胞受体及其配体的表达调控机制,将为提高NK.细胞抗肿瘤和抗感染疗效提供新的策略.     

肾综合征出血热患者NK细胞及其表面标志物的动态观察

通过动态观察肾综合征出血热患者不同临床阶段NK细胞及CD8+T细胞表面活化性/抑制性受体等分子的变化,探讨患者抗汉坦病毒感染的免疫机制,为本病的抗感染免疫治疗提供科学依据。收集肾综合征出血热患者血液样本57份,以健康人血做对照,用流式细胞仪检测各组样本NK细胞数及NK细胞亚群、NK细胞活化及抑制受体、CD8+T细胞数及其表面NK受体的表达水平。分析患者的发热期、少尿期、多尿期和恢复期上述观察指标的动态变化。结果显示,肾综合征出血热患者的NK细胞水平明显高于正常对照组(P0.001)。患者的发热期、少尿期、多尿期和恢复期4个不同临床过程中NK细胞水平都处于升高状态,其中少尿期高于其他各期(P0.01)。患者NK细胞抑制受体NKG2A表达总水平有下降趋势,在少尿期下降的比较明显(P0.01),NK细胞活化受体NKG2D表达呈上升的趋势,不同病程中表达总体水平基本一致。患者的NK细胞亚群CD56~-CD16~+和CD56~(bri)CD16~(-/+)数量显著高于正常对照组(P0.01),而CD56~(dim)CD16~+细胞NK亚群变化无统计学差异(P0.05)。患者CD8~+T细胞总数及病程各期均显著高于对照组(P0.01);病例组和对照组CD8~+T细胞表达NK活化受体NKG2D和抑制受体NKG2A无显著差异(P0.05)。结果表明,肾综合征出血热患者的急性期NK细胞处于活化状态;其中CD56~(bri)CD16~(-/+)NK细胞亚群及CD56-CD16~+NK细胞在免疫调节方面发挥了重要的作用。     

肿瘤对自然杀伤细胞的杀伤敏感性研究

自然杀伤细胞（NK细胞）是机体抗肿瘤的第一道防线,是机体天然免疫的主要承担者,也是获得性细胞免疫的核心调节细胞。NK细胞对肿瘤的杀伤活性与其细胞表面受体和肿瘤细胞表面的配体密切相关,由于肿瘤细胞表面配体表达不同致使对NK细胞杀伤的敏感性有很大差异,临床疗效不一。我们简要介绍了影响肿瘤细胞对NK细胞杀伤敏感性的机制,对目前提高肿瘤细胞敏感性的策略和方法进行了总结。     

乙酰胆碱对自然杀伤细胞活性的影响

目的:观察乙酰胆碱(ACh)对自然杀伤(NK)细胞活性的影响,并初步探讨其作用的受体机制.方法:根据不同的实验目的,选择ACh、胆碱能受体激动剂和拮抗剂分别作用于NK细胞,以乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)自然释放法检测不同实验条件下NK细胞杀伤肿瘤靶细胞(Yac)的活性.结果:ACh、M受体激动剂毛果芸香碱和N受体激动剂烟碱在10-10～10-6mol/L浓度范围内都能显著抑制NK细胞杀伤肿瘤细胞的活性.M受体拮抗剂阿托品(10-8和10-7mol/L)能完全阻断同浓度ACh抑制NK细胞活性的作用;但N受体拮抗剂筒箭毒碱(10-8和10-7mol/L)不能阻断同浓度ACh抑制NK细胞活性的作用.结论:ACh可抑制NK细胞对肿瘤细胞的杀伤作用,此作用主要由淋巴细胞上的M受体和N1受体介导.     

人类NK细胞活化受体的研究进展

近年来,因为一大批活化和抑制性受体在功能和分子水平上得到阐明,使我们对NK细胞尤其是其表面表达的分子有了较为深入的了解。一方面,NK细胞表达HLA-I类分子特异的抑制性受体,由于宿主自身组织细胞表面HLA-I类分子表达正常而使杀伤抑制性受体介导产生的作用占主导地位,因此能使正常细胞免受NK细胞的杀伤;而另一方面,不同的活化受体参与NK细胞介导的细胞毒作用,他们参与人类NK细胞杀伤HLA-I类分子表达减少或缺失的靶细胞。本文主要就NK细胞的活化受体和协同活化受体以及它们的配体作一综述。     

躯体性应激和心理性应激对鼠脾NK细胞受体表达的影响

阐明躯体性应激和心理性应激降低NK细胞杀伤活性的机制及异同。应用Communication box系统分别使小鼠连续负荷躯体性应激和心理性应激后,以~(51)Cr释放法检测鼠脾NK、LAK细胞的杀伤活性;以流式细胞术检测鼠脾细胞、LAK细胞中NK细胞受体的表达水平。结果表明,躯体性应激和心理性应激均可降低鼠脾NK、LAK细胞的杀伤活性,但对脾细胞、LAK细胞中NK细胞受体表达的影响却不同,提示躯体性应激和心理性应激影响NK细胞功能的机制不同。     

生物肽SP对NK细胞活化性受体NCRs表达的影响

研究SP对NK92-MI细胞杀伤活性以及活化性受体NCRs(NKp46、NKp44和NKp30分子)的表达的影响,揭示SP对NK细胞杀伤功能的调节作用及其内在作用机制.MTT法测定NK92-MI细胞对K562细胞的杀伤活性;Real-Time PCR检测NCRs的mRNA表达;流式细胞术检测NCRs的膜表达.在10-14～10-8 mol/L浓度范围的SP作用24h,对NK92-MI细胞的杀伤活性有明显增强作用;10-14～10-8 mol/L的SP,均可增加NK92-MI细胞活化性受体NKp44、NKp46及NKp30的mRNA表达;该浓度范围的SP均可增加NKp46的膜表达水平,仅较低浓度( 10-14moL/L)的SP对NKp44的膜表达水平有增加作用,各浓度的SP对NKp30的膜表达水平均无明显影响.SP可通过上调活化性受体NCRs的表达水平来调节NK细胞的活性.     

NKG2D及其配体研究进展

NKG2D在NK细胞以及T细胞参与的免疫过程中占有重要的地位。本文介绍了NKG2D受体复合体的组成、结构、功能及表达调控;同时介绍了NKG2D配体的分类,病原体感染对其表达的诱导作用以及异常NKG2D配体的表型及功能,最后简要分析了NKG2D免疫途径在肿瘤免疫和治疗方面的应用前景。     

MICA/B分子研究进展

MICA/B基因具有高度多态性,所编码的蛋白是NKG2D的主要配体,MICA/B蛋白结合NKG2D后介导NK和T细胞等的活化及细胞杀伤效应.应激条件下,MICA/B蛋白高表达于细胞表面,并以游离的sMICA/B蛋白分子形式进入细胞外液.越来越多的研究证实MICA/B分子与肿瘤、感染、移植排斥、自身免疫病等多种炎性疾病相关,因此对其表达调控的研究是当前的热点.主要从MICA/B分子与疾病相关性、表达调控及其临床应用等方面近年来的研究进展进行综述.     

杀伤细胞免疫球蛋白样受体及其配体与疾病关系的研究

杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)主要表达在NK细胞和部分T细胞膜表面,通过识别细胞表达的MHC-Ⅰ类分子来调节NK细胞的活性,在病原体感染、自身免疫性疾病、妊娠、移植排斥、肿瘤等疾患中起重要作用,本文就近年来KIR及其配体HLA与相关疾病关系的研究作一综述。     

黄芪含药血清对NK细胞活性及KLRK1 表达的影响

目的：探讨黄芪含药血清对自然杀伤（NK）细胞活性及杀伤细胞凝集素样受体K1（KLRK1）表达的影响。方法：SD大鼠灌胃 不同剂量的黄芪水煎剂制备黄芪含药血清。NK92MI细胞与不同剂量黄芪含药血清及对照血清孵育12 h后,采用乳酸脱氢酶释 放测定法检测NK 细胞对靶细胞YAC-1 的杀伤活性,采用qPCR和western blot 检测KLRK1 mRNA 和蛋白表达。结果：不同浓度 黄芪含药血清刺激12 h后NK 细胞杀伤活性明显增强,KLRK1 表达显著升高。结论：黄芪含药血清能活化NK 细胞,其机制可能 与其激活KLRK1 有关。     

黄芪含药血清对NK细胞活性及KLRK1表达的影响

目的：探讨黄芪含药血清对自然杀伤（NK）细胞活性及杀伤细胞凝集素样受体K1（KLRK1）表达的影响。方法：SD大鼠灌胃不同剂量的黄芪水煎剂制备黄芪含药血清。NK92MI细胞与不同剂量黄芪含药血清及对照血清孵育12h后,采用乳酸脱氢酶释放测定法检测NK细胞对靶细胞YAC-1的杀伤活性,采用qPCR和western blot检测KLRK1 mRNA和蛋白表达。结果：不同浓度黄芪含药血清刺激12h后NK细胞杀伤活性明显增强,KLRK1表达显著升高。结论：黄芪含药血清能活化NK细胞,其机制可能与其激活KLRK1有关。     

流感病毒利用其神经氨酸酶蛋白逃避NK细胞激活受体的识别

<正>自然杀伤(NK)细胞在抗病毒感染和消灭转化细胞的过程中发挥核心作用。通过抑制和激活受体控制病原体感染细胞和肿瘤细胞的识别。曾表明NK细胞激活(杀伤)受体中的天然细胞毒性受体NKp44和NKP46,可与流感病毒感染的细胞表面表达的病毒血凝素(HA)蛋白相互作用。我们进一步发现,NKp44/NKP46和病毒的HA之间的相互作用     

肿瘤免疫治疗中NK细胞的激活策略及研究进展

NK细胞(natural killer cell)是机体固有免疫系统中一类重要的淋巴样细胞,在免疫调节中发挥重要作用.NK细胞MHC Ⅰ非限制性杀伤肿瘤细胞的特性受到人们广泛关注.然而肿瘤组织浸润难、杀伤活性弱、免疫监视功能低的缺陷极大限制了NK细胞的活性.因此,本文总结了肿瘤免疫治疗中NK细胞激活的机制,探讨了NK细...     

紫杉醇对NK-92MI细胞杀伤功能及凋亡的影响

探讨紫杉醇对人自然杀伤细胞系NK-92MI细胞株杀伤活性及凋亡的影响。用不同浓度的紫杉醇处理NK.92MI细胞后,测定NK-92MI细胞的增殖率和对靶细胞的杀伤作用;同时检测NK·92MI细胞凋亡率及凋亡相关基因Bcl-2、Ba】【的表达。结果表明,紫杉醇可以抑制NK-92MI细胞增殖并且降低其杀伤活性,机制可能是通过诱导NK.92MI细胞的凋亡,而后者与Bcll2/Ba】【基因表达增高有关。     

重度子痫前期患者外周血NK 细胞功能的研究*

目的:探讨重度子痫前期患者外周血中NK细胞数量、杀伤功能以及相关细胞因子的变化。方法:选择重度子痫前期患者25例(研究组)以及正常妊娠妇女25例(对照组),流式细胞术测定外周血中NK细胞数量,细胞毒实验测定NK细胞的杀伤活性,ELISA法测定血清IFN-γ及IL-2的浓度。结果:研究组患者外周血中NK细胞的数量以及杀伤活性显著高于对照组;研究组外周血中IFN-γ、IL-2的浓度也显著高于对照组。结论:重度子痫前期患者外周血NK细胞数量增多,杀伤活性增强,血清中NK细胞相关细胞因子也增加。这些改变可能参与重度子痫前期的发病机制。