纳米复合佐剂的抗肿瘤免疫调控作用及效果研究

目的:探究纳米复合佐剂在肿瘤内的免疫调控作用及抗肿瘤效果。方法:制备包载CpG的β葡聚糖纳米颗粒(CNP),体外培养小鼠骨髓来源的树突细胞(BMDC),分5组进行体外免疫处理,分别为PBS对照组、β葡聚糖组、β葡聚糖纳米载体(NP)组、CpG组和CNP组,利用流式仪分析BMDC成熟情况。将体外培养的黑色素瘤B16F10细胞接种于C57BL/6N小鼠右后肢皮下,建立肿瘤模型,第6 d挑选肿瘤大小相对一致的24只小鼠均分为4组,即PBS组、NP组、CpG组、CNP组进行治疗,后颈部皮下注射给药,共给药4次,每次间隔3 d,期间隔天测量肿瘤体积,最后一次给药后第3 d眼眶取血,测定血浆中γ干扰素(IFN-γ)浓度,处死小鼠后分离肿瘤及脾脏,流式细胞术检测瘤内浸润性T淋巴细胞比例及脾脏内T细胞比例。结果:CNP佐剂处理后BMDC成熟比例约为CpG佐剂组的2.8倍。在小鼠体内接种肿瘤15 d后,CNP治疗组肿瘤体积较其他组均减小,血浆中IFN-γ含量显著高于其他实验组,约为CpG组的1.5倍,肿瘤浸润性T淋巴细胞与其他组相比也有明显升高。结论:构建的葡聚糖-CpG纳米复合佐剂能够有效激活BMDC,改善肿瘤微环境,具有良好的体内抗肿瘤效果。     

连翘酯苷对小鼠脾脏淋巴细胞体外增殖与分泌功能的影响

目的分析连翘酯苷（FS）对小鼠脾脏T和B淋巴细胞增殖、分泌NO和TNF-α的影响,初步探讨其免疫调节作用机制。方法无菌操作分离小鼠脾脏,制备脾脏细胞并用含10%胎牛血清的RPMI 1640培养,在培养液中分别加入刺激剂刀豆蛋白（ConA）和脂多糖（LPS）以及不同浓度40、80、160μg/mL的FS共培养不同时间,采用MTT法检测T和B淋巴细胞的吸光度变化,ELISA和Griess法分别检测细胞分泌TNF-α和NO的水平。结果低浓度和中浓度FS对ConA诱导T淋巴细胞24 h和48 h后细胞增殖和存活率明显提高,诱导时间延长至72 h后FS明显抑制细胞转化;低浓度FS对LPS诱导脾脏B淋巴细胞24 h后细胞增殖和生存率显著提高;FS促进小鼠脾脏T和B淋巴细胞分泌NO;FS促进B淋巴细胞分泌TNF-α,中浓度FS促进T淋巴细胞分泌TNF-α而高浓度反而抑制其分泌。此外,FS对环磷酰胺（CY）处理小鼠的脾脏淋巴细胞体外增殖有明显影响,对细胞NO分泌影响不显著。结论结果提示FS可能通过影响小淋巴细胞增殖和细胞因子分泌而调节免疫细胞功能。     

白细胞介素22对T细胞介导的小鼠肝损伤的治疗作用及初步机制探讨

目的研究人白介素22（IL-22）对T细胞介导的肝损伤小鼠的治疗作用。方法利用刀豆蛋白A（ConA）建立T细胞介导的肝损伤小鼠模型,检测静脉注射IL-22对肝损伤小鼠血清丙氨酸转氨酶（ALT）、天门冬氨酸转氨酶（AST）活性的影响,同时取小鼠肝组织进行病理学检查。并采用半定量RT-PCR方法检测IL-22刺激HepG2和LO2细胞后,对c-myc及Bcl-2基因转录表达水平的影响。结果IL-22明显降低ConA致小鼠急性肝损伤血清ALT、AST值的升高,减轻ConA对肝组织的病理损伤。体外检测IL-22对HepG2和LO2细胞表达c-myc及Bcl-2基因转录水平有促进作用。结论IL-22对T细胞介导的肝损伤小鼠模型具有治疗作用,该作用可能是通过IL-22促进肝细胞的抗凋亡因子的表达实现的。     

“716”中药复方对BALB/c小鼠NK细胞活性影响的研究

临床观察表明,“716”中药复方对儿童易患的多种病毒性疾病具有较好的疗效。本文研究了“716”中药复方对BALB/c小鼠NK细胞活性的影响,以探讨其作用机制。结果显示:1)体外,当药物浓度≥1.25mg/ml时,NK细胞对L929细胞的溶活解性有较大的提高;2)体内,实验组动物NK细胞对L929细胞溶解性活显著增加(P<0.01)。提示,“716”中药复方对NK细胞活性的促进作用可能是其重要的作用机制之一。     

海胆黄多糖SEP对S180的体内抑制作用

研究海胆黄多糖SEP对S180肉瘤的抑制作用及初步机制。MTT法检测SEP对体外培养的S180细胞生长的抑制作用;建立小鼠S180肉瘤模型观察SEP抗肿瘤活性;检测SEP协同ConA/LPS刺激小鼠脾淋巴细胞增殖作用;同时,考察SEP对NK细胞和杀伤性T淋巴细胞(cytotoxic T lym-phocyte,CTL)活性的影响;碳粒廓清检测SEP对小鼠单核巨噬细胞吞噬功能的影响。研究表明,海胆黄多糖SEP高中低剂量(16、8、4 mg/kg)显著抑制小鼠180实体瘤生长,增加小鼠脾指数和胸腺指数,协同ConA/LPS刺激小鼠脾淋巴细胞增殖,提高小鼠NK细胞和CTL活性,增强小鼠单核巨噬细胞的吞噬功能,通过免疫调节提高小鼠免疫功能达到抑制S180作用。     

白花蛇舌草半枝莲配伍抗肿瘤作用研究

本研究旨在观察白花蛇舌草和半枝莲配伍对人源乳腺癌细胞的生长抑制作用及其联合环磷酰胺(CTX)对4T1移植瘤的影响。通过制备大鼠含药血清,将人源乳腺癌细胞传代培养后,分别加入药物血清常规培养,采用CCK-8试剂盒检测其细胞存活率;同时建立雌性小鼠移植性乳腺癌细胞(4T1)模型,计算肿瘤抑制率,检测血清TNF-α、INF-γ、IL-2含量(ELISA法)。结果表明CCK-8实验中,给药组含药血清均能显著降低人源乳腺癌细胞的OD值;小鼠移植性乳腺癌实验中,各给药组均可显著提高肿瘤抑制率、血清INF-γ、IL-2含量,下调血清TNF-α水平。配伍组作用明显优于单味药应用。说明白花蛇舌草半枝莲可有效抑制乳腺癌细胞增殖,其中以二药配伍应用效果更佳。     

RGD修饰包载超顺磁性氧化铁纳米粒用于脑胶质瘤的靶向研究

目的：采用PLGA-PEG为聚合材料,制备RGD修饰包载超顺磁性四氧化三铁纳米粒子（RGD-NP—Fe3O4）,用于脑胶质瘤细胞靶向核磁共振成像纳米探针。方法：采用沉淀法制备RGD修饰的栽超顺磁性纳米粒,考察纳米粒的粒径,电位等理化指标以及细胞毒性。通过细胞以及肿瘤球摄取实验,考察RGD．NP—Fe304的脑胶质瘤细胞靶向性。结果：制备得到的RGD-NP-Fe3O4粒径在85±7．5nm,电位为18＋1．15mV。纳米粒浓度在300μg/mL范围内,对脑胶质瘤细胞均无显著毒性。经过RGD修饰后脑胶质瘤细胞U87对纳米粒的摄取效率大大提高,纳米粒穿透肿瘤球能力显著增强。结论：RGD修饰包载超顺磁性氧化铁纳米粒是一种潜在的高效的脑胶质瘤细胞靶向诊断纳米探针和靶向给药系统。     

砂生槐水提取物对免疫抑制小鼠细胞免疫功能的影响

探讨藏药砂生槐水提取物对免疫抑制小鼠免疫功能的影响.通过小鼠腹腔注射环磷酰胺建立免疫抑制动物模型,应用砂生槐水提取物对免疫抑制小鼠进行治疗,采用MTT比色法检测免疫抑制小鼠T淋巴细胞增殖和放免法测定其血清IL-2和TNF-α水平.结果表明:与模型对照组比较,砂生槐水提取物三个剂量组均可协同ConA促进免疫抑制小鼠T淋巴细胞的增殖(P＜0.01),同时提高免疫抑制小鼠血清IL-2、,INF-α的水平,尤其2.4 g/kg·d剂量组的IL-2、TNF-α水平升高较为明显(P＜0.05).提示砂生槐水提取物可以增强免疫抑制小鼠的T细胞免疫功能.     

脂连素对小鼠急性肝损伤的保护作用

目的观察脂连素对刀豆蛋白A（ConA）所致小鼠急性肝损伤的干预作用,并对其机制进行初步探讨。方法雄性BALB／C小鼠17只,随机分为3组：ConA组6只：尾静脉注射ConA。脂连素组5只：在静脉注射ConA前腹腔内注射脂连素。对照组6只：尾静脉注射生理盐水。注射ConA后8小时留取血清检测各组ALT和TNF-α水平,肝组织进行HE染色,并检测NF-κB活性及肝细胞凋亡率。结果HE染色可见ConA组肝细胞水肿、变性,肝组织内淋巴细胞浸润、淤血等,脂连素组上述病理变化减轻（P〈0．01）。脂连素组ALT和TNF-α水平、NF-κB活性、肝细胞凋亡率均低于ConA组（P〈0．01或P〈0．05）。结论脂连素具有抗炎作用,其机制可能与减少TNF-α的产生、抑制肝组织NF-κB活性及抗肝细胞凋亡有关。     

GFE-1多肽与重组人肿瘤坏死因子α融合蛋白的构建及其体外活性和体内分布研究

目的:构建 GFE-1多肽与重组人肿瘤坏死子α(rmhTNF-α)融合蛋白(GFE-1-rmhTNF),研究该融合蛋白的体外活性和体内分布.方法:利用基工程方法,将人工合成的编码 GFE-1的寡核苷酸片段连接在 rmhTNF-α序列的3'端,转入大肠杆菌中诱导表达,采用 Q-Sepharose FF 离子层析柱和 SP-Sepharose FF 阳离子层析柱纯化蛋白,SDS-PAGE 和 Western 印迹鉴定,测定该融合蛋白的体外活性,观察其在小鼠体内的分布情况.结果:构建了融合蛋白 GFE-1-rmhTNF,并在大肠杆菌中获得高效表达.体外活性实验显示,GFE-1-rmhTNF 对 L929细胞有明显的杀伤活性;体内分布实验证实,GFE-1-rmhTNF 在小鼠肺组织的富集高肝肾组织.结论:构建了融合蛋白 GFE-1-rmhTNF,可显著杀伤 L929细胞并特异性富集小鼠肺组织.     

香菇C91-3菌丝发酵蛋白对S180小鼠细胞免疫功能和IFN-γ及TNF-α的作用

目的观察香菇C91-3菌丝发酵蛋白对荷瘤小鼠免疫系统的作用。方法昆明小鼠24只,S180瘤细胞荷瘤建立动物模型,随机平均分为3组：香菇C91-3菌丝发酵蛋白治疗组、环磷酰胺治疗组、生理盐水对照组。观察香菇C91-3菌丝发酵蛋白对荷瘤小鼠NK细胞活性、淋巴细胞转化率、IFN-γ和TNF-α等免疫指标的影响。结果香菇C91-3菌丝发酵蛋白能够显著提高治疗组小鼠的NK细胞活性、淋巴细胞转化率和血清中IFN-γ和TNF-α的含量。结论香菇C91-3菌丝发酵蛋白能够显著提高荷瘤小鼠免疫系统的活性。     

RIP1介导肿瘤坏死因子α诱导的L929细胞凋亡与程序性坏死

肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor alpha,TNFα)诱导的L929细胞死亡是研究细胞程序性坏死的重要模型,但也有报道称,TNFα处理后的L929细胞发生了凋亡。该研究以所在实验室保存的L929细胞(L929-A)和从商业化细胞库购买的L929细胞(L929-N)为模型,进一步鉴定了TNFα诱导的L929细胞死亡类型与调控机制。结果发现,TNFα处理后的L929-A细胞中出现了凋亡特征,且阻断胱冬肽酶(caspase)信号通路可显著抑制TNFα诱导的L929-A细胞死亡,但却促进TNFα诱导的L929-N细胞死亡。此外,受体相互作用蛋白1(receptor-interacting protein 1,RIP1)在TNFα诱导的两种L929细胞死亡过程中都具有关键性的调控作用,表明TNFα处理后的L929-A细胞发生了RIP1依赖的细胞凋亡,而L929-N细胞发生了程序性坏死(necroptosis)。同时,启动细胞程序性坏死的关键蛋白RIP3(receptor-interacting protein 3)在L929-N细胞中表达水平显著高于L929-A细胞,因此,RIP3的这种差异表达可能是决定两种L929细胞在TNFα处理后发生不同类型细胞程序性死亡的重要原因。     

乳铁蛋白修饰纳米粒包载的α-倒捻子素对AD模型动物脑内特征性病理改变的影响

目的:采用乳铁蛋白修饰的PEG-PLA纳米粒为递药工具包载α-M,探讨其对快速老化SAMP8小鼠AD相关脑内病理特征的改善作用。方法:用乳化/溶剂蒸发法制备载α-M的PEG-PLA纳米粒NP(α-M),将巯基化的乳铁蛋白连接于纳米粒表面,得到Lf-NP(α-M)。7月龄SAMP8系小鼠尾静脉给予注射生理盐水、Lf-NP(α-M)或空白纳米粒溶液,每日一次,连续两周。正常老化小鼠SAMR为模型对照组,通过对脑组织进行免疫组化分析,观察Lf-NP(α-M)对SAMP8小鼠脑内炎症、Aβ沉积等AD特征性病理变化的影响。结果:0.5、2 mg/kgα-M对SAMP8小鼠脑内小胶质细胞激活、星形胶质细胞增生以及Aβ沉积均无显著影响;0.5mg/kg Lf-NP(α-M)可抑制小胶质细胞的激活(P0.001),2 mg/m L Lf-NP(α-M)显著抑制星形胶质细胞增生以及Aβ沉积(P0.05)。结论:乳铁蛋白修饰的包载α-M的可降解纳米粒脑靶向递药系统成功有效,显著提高α-M的成药性并改善AD模型小鼠脑内特征性病理改变。     

Fe3O4-PEG-CD56/Avastin@Ce6纳米探针的合成及细胞MR成像初步研究

目的:探讨Fe_3O_4-PEG-CD56/Avastin@Ce6靶向探针与NK92细胞的结合能力并进行细胞体外MRI成像。方法:制备Fe_3O_4-PEG-CD56/Avastin@Ce6纳米探针,对合成的材料进行表征。应用凋亡试剂盒测定不同浓度的材料对NK92的细胞毒性,通过流式细胞术分析纳米材料与NK92细胞的结合能力和应用MRI对细胞进行体外成像并分析其T2信号强度的改变。结果:合成的纳米探针具有较好的生物相容性,且对NK92细胞的影响较小,不同浓度下细胞凋亡水平基本一致,与NK92细胞结合的材料随浓度的增加而逐渐增加。MRI检查提示不同浓度探针孵育的NK92细胞T2加权像(T2WI)的信号均降低。结论:Fe_3O_4-PEG-CD56/Avastin@Ce6探针对NK92细胞具有靶向性,3.0 T MR扫描仪可对其进行体外监测。     

刹毒草合剂对免疫抑制小鼠免疫功能的影响

目的:研究刹毒草合剂对免疫抑制小鼠免疫功能的影响。方法:BALB/C小鼠50只随机分为5组(n=10):空白组、模型组、刹毒草合剂低、中、高剂量组。除空白对照组外,其余各组小鼠腹腔注射环磷酰胺40 mg/kg建立免疫抑制模型。空白组和模型组灌胃生理盐水,刹毒草合剂低、中、高剂量组每天分别用刹毒草合剂10、20、40ml/kg灌胃,连续给药15 d后,检测小鼠外周血白细胞数和白介素-2(IL-2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(IFN-γ)含量;检测小鼠脾脏指数、NK细胞活性。结果:与模型组比较,刹毒草合剂能显著增加外周血白细胞数和IL-2、TNF-α、IFN-γ含量、提高脾脏指数和NK细胞活性,差异均有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论:刹毒草合剂可明显增强环磷酰胺诱导的免疫抑制小鼠的免疫功能。     

橙盖鹅膏多糖(AC-1)体外免疫调节活性、细胞毒性和抗肿瘤活性的研究

为研究橙盖鹅膏多糖的体外免疫调节活性、细胞毒性和抗肿瘤活性,本研究运用细胞学技术探究AC-1对T细胞、B细胞和RAW264.7三种免疫细胞的体外免疫调节活性;研究AC-1对小鼠成纤维细胞(L929)的细胞毒性以及对小鼠胃癌细胞(MFC)、小鼠肉瘤细胞(S180)的体外抗肿瘤活性。结果表明,AC-1能在体外显著刺激三种免疫细胞的增殖及RAW264.7细胞的吞噬,表明AC-1在增强机体免疫方面具有重要作用,进一步研究发现AC-1主要通过显著促进IgE和IgG的分泌来增强体液免疫。在浓度为5~20μg/mL时AC-1对L929细胞无显著的促进及抑制作用,说明AC-1对正常细胞无毒性;在浓度为10~20μg/mL时AC-1能显著抑制小鼠胃癌细胞(MFC)的生长,但对小鼠肉瘤细胞(S180)的抑制效果较弱,说明AC-1在体外能够直接抑制肿瘤细胞的生长,但对不同的肿瘤细胞具有不同的抑制效果。综上所述,橙盖鹅膏多糖(AC-1)在体外具有良好的免疫调节活性、抗肿瘤活性,但对不同的肿瘤细胞具有不同的抑制效果并且对正常细胞无毒性。     

真菌竹黄双向调节TNF-α诱导的L929细胞凋亡过程

真菌竹黄是我国特有的菌类药物,应用前景广阔,具有抗肿瘤和抗炎功效,但作用机理仍不十分清楚。我们以TNF-α诱导小鼠成纤维细胞(L929细胞株)为模型,深入探讨竹黄发挥药效的作用机理。研究发现,竹黄可以双向调节TNF-α诱导的L929细胞凋亡过程,高浓度竹黄可以促TNF-α诱导的细胞凋亡,低浓度竹黄具有抗TNF-α诱导的细胞凋亡作用。在竹黄抗凋亡过程中,信号网络中所涉及的关键蛋白COX-2表达下降,BCL-2表达上升,而NF-κB基本无明显变化。我们推测竹黄中含有药理作用相反的物质,通过调节信号网络中关键蛋白COX-2和BCL-2等的变化,进而改变信号网络平衡,发挥抗肿瘤与抗炎功效。相关研究有利于深入理解竹黄抗肿瘤与抗炎的药效作用,为运用生物活性导向和天然药物提取分离技术,进行相关新药的研发提供理论依据。     

小鼠骨髓源性树突状细胞的体外扩增、鉴定及生物学特性研究

目的:对树突状细胞体外大量扩增及树突状细胞的临床应用提供理论基础.方法:以重组小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)、重组小鼠白介素-4(rmIL-4)和重组小鼠肿瘤坏死因子-α(rm TNF-α)体外诱导小鼠骨髓细胞分化为DC,倒置显微镜动态观察细胞形态学变化,流式细胞术分析细胞表面分子,并应用混合淋巴细胞反应检测其刺激T淋巴细胞的增殖能力.结果:经体外诱导培养第2天即可见大量细胞集落形成;培养至第9天,DC成熟,具有典型的形态,同时DC可以显著刺激同种异体混合淋巴细胞增殖.结论:体外诱导培养可以获得大量小鼠骨髓来源的DC,可广泛应用于临床实验及实验研究.     

板蓝根多糖体内抗肿瘤作用与免疫功能调节实验研究

本研究主要探讨板蓝根多糖(RIP)对荷瘤小鼠的抗肿瘤作用及其对免疫功能的影响。通过建立S180小鼠移植瘤和腹水瘤模型,以环磷酰胺(CTX)为阳性对照药,观察RIP对其的影响。连续给药12 d后,测定移植瘤小鼠的瘤重,计算肿瘤生长抑制率和胸腺、脾脏指数;检测脾淋巴细胞的转化功能和NK细胞杀伤活性以及血清中的TNF-α、INF-γ、IL-2水平;并对肿瘤组织进行HE染色和细胞周期分析;对进行相同给药周期的腹水瘤小鼠继续正常饲养,记录各组小鼠自然死亡的时间。结果显示,不同剂量的RIP均可明显抑制小鼠肿瘤的生长,其100 mg/kg和50 mg/kg剂量组的抑瘤率分别为35.4%,38.5%;各剂量组移植瘤小鼠胸腺指数和脾指数与对照组比较有所提高,还能刺激脾淋巴细胞的转化及增强NK细胞的杀伤活性,升高血清中TNF-α、INF-γ和IL-2的含量,其50 mg/kg组与模型对照组相比有统计学差异(P0.01)。此外,移植瘤组织HE染色观察可见各给药组肿瘤组织坏死面积呈不同比例增大,流式细胞仪检测出给药后G_0/G_1期细胞比例增加,S期细胞比例降低,G_2/M期细胞周期未见明显变化。由此提示,RIP能够增强荷瘤小鼠的免疫功能,对荷瘤小鼠具有抗肿瘤作用,能延长荷瘤小鼠的生存时间。     

胸腺激素对淋巴细胞免疫功能调节的研究:Ⅰ胸腺素F5对有丝分裂原诱导下小鼠胸腺细胞增殖反应的影响

本文介绍了用氚胸腺嘧啶核苷(~3H-TdR)掺入微量法测定小鼠胸腺细胞增殖反应的方法与影响因素;并应用此方法研究胸腺素F_5在体外对小鼠胸腺细胞在有丝分裂原诱导下增殖反应的影响。实验结果表明:小鼠胸腺细胞对ConA刺激反应远较对PHA刺激反应明显。在ConA作用下~3H-TdR掺入强度与胸腺细胞数量,ConA浓度及作用时间有关。同位素浓度与标记时间也直接影响。~3H-TdR掺入。胸腺素F_5在体外与小鼠胸腺细胞预育20小时左右(16—24小时)可增强胸腺细胞对ConA刺激的反应,但对PHA刺激无此作用。胸腺素F_5对小鼠胸腺细胞作用的有效剂量为50—200微克/1×10~7细胞/毫升。胸腺素F_5的这种增强作用,对各年龄组小鼠胸腺细胞都有所表现,但年龄较老的8月龄小鼠胸腺细胞对胸腺素F_5作用反应微弱。胸腺素F_5能增强胸腺细胞对ConA刺激的反应是否由于它能通过某种机制加速T细胞功能分化成熟有关,有待今后进一步研究确定。