新城疫疫苗研究进展

新城疫（Newcastle disease,ND）是禽类的病毒性疾病之一,能引发禽类神经系统、消化系统和呼吸系统损伤,死亡率高达30%,对家禽养殖形成了严重制约,因此,研究ND具有重要的经济意义。合理使用疫苗是防控新城疫疫情的主要方法。自1950年以来,新城疫减毒活疫苗和灭活疫苗已被广泛使用,之后载体疫苗也进入商业化应用阶段。此外,疫苗佐剂的选择以及递送途径的优化也进入研究人员的视野。基于此,分析了新城疫传统疫苗、载体疫苗、病毒样颗粒疫苗的研发现状及前景,介绍了纳米粒子和新型免疫佐剂在新城疫疫苗研发过程中的应用进展,并总结了目前国内外常见的新城疫商业化疫苗,旨在为研制更高效、廉价的新城疫疫苗提供参考,从而进一步控制当前新城疫疫情的蔓延。     

鸽新城疫病毒BJ-C分离株基因组测序及系统发育分析

【背景】鸽新城疫是由鸽Ⅰ型副黏病毒(pigeon paramyxovirus type Ⅰ,PPMV-1)感染引起的危害最严重的疫病之一,至今尚无有效的防控制剂。【目的】分析鸽新城疫病毒BJ-C株的基因组信息及系统发育关系,为鸽新城疫的防控提供科学依据。【方法】设计首尾重叠的6对特异性引物,利用分段扩增的方法,以鸽新城疫病毒BJ-C株基因组cDNA为模板,分别扩增、测序后进行全基因组序列拼接。以NCBI数据库中发布的新城疫病毒序列为参考,针对鸽新城疫病毒BJ-C株的基因组、F基因建立系统发育树。【结果】鸽新城疫病毒BJ-C株的基因组全长为15192nt。基于全基因组的系统发育分析发现其与PPMV-1/BJ-01/CH株的系统发育关系最近,核苷酸相似性为99.96%,氨基酸相似性高达100%,属于同一个分支,而与LaSota疫苗株等其他新城疫毒株的亲缘关系相对较远。基于F基因序列的系统发育树分析发现BJ-C株F基因与我国的BJP2013株同属一个分支。ClassⅡ类Ⅵ亚型F基因高变区序列(47-420nt)比对结果显示,安徽株Pigeon/Anhui/2369/2012、广东株Pigeon/Guangdong/GZ288/2013、北京株BJP13、浙江株Pigeon/Zhejiang/2036/2012及比利时株PPMV-1/Belgium/11-09620/2011等与BJ-C毒株处于同一个分支,同属Ⅵb亚型。【结论】本研究获得了鸽新城疫病毒BJ-C株全基因组序列,分析了其系统发育关系,确定其属于ClassⅡ类Ⅵb型,为后续防控产品的开发提供了理论依据。     

新城疫壳聚糖微球疫苗免疫效果的研究

鸡新城疫是由新城疫病毒引起的鸡的一种急性、烈性、高度接触性传染病,是危害养禽业的最严重疫病之一。控制新城疫最根本的措施是进行有效的疫苗接种,目前常用的疫苗是弱毒活疫苗和灭活疫苗,但二者在实际应用中均存在一定的局限性。口服微球疫苗可以诱导较强的粘膜免疫;同时还能够诱导产生系统的体液免疫和细胞免疫,已成为ND疫苗研究的热点。以壳聚糖为囊材,新城疫La Sota抗原液为芯材,戊二醛为交联剂,制备出新城疫壳聚糖微球疫苗,通过了实验室安全检验和效力检验。将新城疫壳聚糖微球疫苗与LaSota活疫苗和新城疫油乳剂灭活苗分别免疫SPF鸡,利用MTT、血凝抑制法(HI)和ELISA等分别检测不同疫苗免疫后的细胞免疫、体液免疫和粘膜免疫抗体IgA,并在当免疫鸡HI抗体降到23的情况下进行了攻毒试验。结果表明,新城疫壳聚糖微球疫苗安全性好,免疫后可刺激机体产生较强的细胞免疫、体液免疫和局粘膜免疫,具有较好的保护作用。     

宠物鸟·疫病·公共卫生

宠物鸟种类多,来源地广,检验检疫预防措施缺乏,致使宠物鸟疫病不断传播,并造成人类的感染,已经威胁到公共卫生。宠物鸟疫病中以新城疫、禽流感、鹦鹉热最为常见,而且与人类关系密切,具有重要的公共卫生学意义。本文从宠物鸟在疫病流行传播中的意义、疫病的宿主感染谱、疫病的流行特征以及疫病的公共卫生学意义对新城疫、禽流感、鹦鹉热三种疫病进行了综述。表明宠物鸟疫病的感染率比较高,且严重危害人类健康。加强对宠物鸟疫病的检验检疫及预防,很好的防控宠物鸟类疫病具有非常重要的意义。     

基因10型Ⅰ类新城疫病毒的生物学与基因组学特征

2013年在新城疫病毒(NDV)的流行病学调查中,从白鹭泄殖腔棉拭子分离到1株Ⅰ类新城疫病毒,命名为SD18/13。为了进一步了解该毒株的生物学特性与基因组学特性,进行了全基因测序、交叉血凝中和试验及动物实验。结果发现分离株SD18/13基因组全长为15 198bp,F蛋白裂解位点的氨基酸组成为112-ERQER/L-117,具有典型的低致病性新城疫病毒的分子特征。F基因的系统进化显示该毒株与法国分离株teal/France/100011/2010同源性最高,属于基因10型Ⅰ类新城疫病毒。交叉HI试验结果显示该毒株与疫苗株Lasota的抗原同源性为61%,与基因3型Ⅰ类新城疫病毒的抗原同源性为77%～86%。致病性实验发现,该病毒可以在SPF鸡体内较好地复制,在肝脏、腺胃、肠道、脾脏等器官均检出病毒,攻毒后48h各器官的病毒含量达到高峰,以肠道的病毒载量最高,但致病性较弱,在14d观察期内攻毒鸡无明显的临床症状;病理组织学检查发现脾脏淋巴细胞轻微坏死,肾脏充血淤血,肠道粘膜上皮细胞脱落,固有层淋巴细胞浸润增生,气管粘膜固有层轻微出血。SD18/13是我国首次检出的基因10型Ⅰ类新城疫病毒,关于其来源和分布有待于进一步监测和研究。     

半胱胺对鸡血液中IgA含量的影响研究

在灌喂两种剂量半胱胺的基础上应用新城疫弱毒疫苗对鸡进行消化道粘膜免疫,采用ELISA双夹心法测定了鸡血液中IgA的含量,结果表明:首次免疫后第三周和第四周两种剂量半胱胺组的血液中IgA含量与新城疫免疫组的相比分别呈极显著增加(P＜0.01)和显著增加(P＜0.05);提示血液中IgA含量受SS影响较大,饲喂半胱胺降低SS水平后,应用新城疫弱毒疫苗进行消化道粘膜免疫,可以提高血液中IgA的含量,增强机体的系统免疫力.     

鹅源新城疫病毒NP、P和L基因的克隆与P基因的表达鉴定

将鹅源新城疫病毒的NP、P和L基因通过RT-PCR方法从尿囊液中扩增后分别克隆进pGEM—T easy载体,再分别亚克隆到真核表达载体pCI—neo上,通过酶切、PCR和测序验证克隆正确。利用P基因开放性阅读框(ORF)上靠近终止密码上游的AgeI位点,将报告基因绿色荧光蛋白(GFP)基因克隆进P基因真核表达重组质粒,分别转染COS-1细胞和CEF细胞,在倒置荧光显微镜下可见到绿色荧光,表明GFP基因已得到表达,由此证明P基因也已得到表达。鹅源新城疫病毒NP、P和L基因的克隆成功,为即将进行的鹅源新城疫病毒的反向遗传操作以及功能基因组研究打下基础。     

香菇C91-3菌株发酵液对副流感病毒和新城疫病毒血细胞吸附的抑制作用

目的探讨香菇C91-3菌株发酵液的抗病毒作用。方法应用香菇C91-3菌株发酵液不同稀释度分别作用于副流感病毒和新城疫病毒,观察其对血细胞吸附作用的影响。结果香菇C91-3菌株发酵液原液组和1:2稀释组对副流感病毒和新城疫病毒的血细胞吸附均有抑制作用。结论香菇C91-3菌株发酵液有明显的抗病毒作用。     

普通鸬鹚鸟卵溶菌酶与巢密度及卵顺序和新城疫病毒母源抗体关系

亲鸟可通过母体作用向鸟卵传递不同的免疫物质,用于免疫防御,对提高子代生存率至关重要。本研究在青海湖鸬鹚岛共采集60枚普通鸬鹚(Palacrocorax carbo)鸟卵,并同时记录巢密度和卵顺序,通过血凝抑制试验和溶解实验分别测定鸟卵溶菌酶浓度和新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)母源抗体效价。对鸟卵溶菌酶浓度与巢密度进行Pearson相关分析,利用单因素方差(One way ANOVA)分析鸟卵溶菌酶浓度与卵顺序关系,利用t检验分析新城疫病毒阳性鸟卵与阴性鸟卵溶菌酶浓度差异性,对新城疫病毒阳性鸟卵抗体效价与溶菌酶浓度进行Spearman相关分析。(1)不同窝的鸟卵溶菌酶浓度与巢密度呈正相关性(r=0.886,P0.000 1);(2)同一窝内鸟卵溶菌酶浓度随着卵顺序的增加而增加(F=3.95,P0.05),且新城疫病毒阳性鸟卵的溶菌酶量高于阴性鸟卵(t=4.08,df=58,P0.001);(3)在新城疫病毒阳性鸟卵中,其新城疫病毒抗体效价与溶菌酶含量呈负相关关系(r=﹣0.840,P0.001)。上述结果表明,亲鸟会根据繁殖密度和卵顺序来调节向鸟卵分配的溶菌酶,同时会调节向鸟卵中传递抗新城疫病毒母源抗体和溶菌酶浓度,从而使免疫防御作用最大化。     

高效薄层层析-病毒覆盖结合法比较细胞表面神经节苷脂与不同动物源性新城疫病毒结合特性

【目的】神经节苷脂是新城疫病毒入侵宿主细胞的受体,但不同动物源性的新城疫病毒利用受体的特性是否存在差异尚不明确。以鹅源新城疫病毒NA-1株和鸡源新城疫病毒F48E9株为研究对象,比较两株病毒受体结合特性的差异。【方法】提取鸡胚和鹅胚成纤维细胞新城疫病毒受体成分——神经节苷脂,用高效薄层层析法比较两种细胞所含神经节苷脂的类型和含量;通过高效薄层层析-病毒覆盖结合法比较两种病毒与不同细胞神经节苷脂的结合特性,最后通过病毒红细胞吸附抑制试验进一步验证神经节苷脂与病毒之间的相互作用关系。【结果】鸡胚和鹅胚成纤维细胞所含的神经节苷脂成分存在明显差异;高效薄层层析-病毒覆盖结合实验结果显示NA-1和F48E9与神经节苷脂的结合模式不同,NA-1主要与神经节苷脂GD1a结合,即包含双SAα2,3Gal末端的神经节苷脂,而F48E9可与更多类型的神经节苷脂结合,从单唾液酸到三唾液酸形式的神经节苷脂如GM1、GD1a、GD1b、GT1b等。【结论】鹅源新城疫病毒NA-1株和鸡源新城疫病毒F48E9株在入侵靶细胞时优先选择利用的受体不同。     

鹅源新城疫病毒拯救体系的建立

参照GenBank上公布的鹅源新城疫病毒ZJI株全序列,设计8对引物,经RT-PCR法从尿囊液中扩增目的片段后,分别克隆进pCR2.1载体,将Ⅰ～Ⅶ7对引物的扩增片段依次亚克隆到TVT7R转录载体中,构建了含NDV全基因组cDNA的转录载体(pNDVZJI),将Ⅴ、Ⅵ和Ⅷ3对引物的扩增片段分别克隆进pCR2.1载体,并亚克隆到表达质粒pCI-neo上,构建了L基因的真核表达载体(pCI-L),pNDVZJI、pCI-L与另外两个辅助表达质粒(pCI-NP和pCI-P)共转染BSR-T7/5细胞,成功拯救出了具有血凝性的鹅源新城疫病毒,ZJI株鹅源新城疫病毒的成功拯救为后续相关研究工作的开展打下了基础。     

火鸡新城疫病毒的分离与鉴定

1988年北京某火鸡场暴发新城疫,从病鸡脾、脑组织分离到新城疫病毒(NDV)强毒株。现简要报告如下。 将病火鸡的脾和脑研磨,用生理盐水1:5稀释,接种9日龄非免疫鸡胚3只,收集24小时后死亡的鸡胚尿囊液,即为待测病毒。低温冰箱保存备用,红细胞为非免疫鸡红细胞,生理盐水洗4次,配成0.5％浓度,4℃冰箱保存。     

表达H5亚型AIV血凝素的重组NDV构建及免疫原性

利用反向遗传技术获得表达H5亚型禽流感病毒(AIV)血凝素(HA)的新城疫病毒(NDV)。克隆NDV clone 30的全长基因,通过在NDV的融合蛋白基因和血凝素-神经氨酸酶(HN)基因之间插入编码高致病性AIV分离株A/chicken/italy/8/98(H5N2)的血凝素基因开放阅读框从而获得两株重组新城疫病毒NDVH5和NDVH5m。NDVH5感染的细胞可以检测到两种HA转录产物。对于重组病毒NDVH5m,NDV位于HA ORF的转录终止信号序列被沉默突变消除,产生2.7个全长HA转录产物的折叠,从而使修饰过的HA得到稳定地高表达。1日龄小鸡的脑内接种证实了两种重组病毒均无致病性。鸡群在NDVH5m诱导产生的NDV和H5亚型AIV HA特异性抗体的免疫力下能够免于致死剂量的NDV与高致病性AIV的感染。血清学研究结果表明NDVH5m免疫鸡群产生的抗体可结合NP蛋白抗体的检测从而用于区分免疫和感染AIV的动物。因此,NDVH5m重组病毒可作为抗NDV和AIV的"二联疫苗",也可成为控制AJ的标记疫苗。     

新城疫病毒HN蛋白在水稻中的表达及半定量快速检测抗体方法的建立北大核心CSCD

本研究旨在利用水稻胚乳生物反应器表达新城疫病毒(Newcastle disease virus, NDV) HN蛋白,建立一种NDV抗体半定量、快速免疫层析检测方法。通过MlyⅠ和XhoⅠ双酶切重组质粒pUC57-HN,NaeⅠ和XhoⅠ双酶切包含有启动子、信号肽和终止子的pMP3中间载体,分别回收HN和pMP3片段并进行连接,构成重组质粒pMP3-HN1。然后利用Eco RⅠ和HindⅢ双酶切pMP3-HN1和植物载体pCAMBIA1300,将HN1基因成功连接到pCAMBIA1300上,采用电转化方法将重组质粒pCAMBIA1300-HN1导入根癌农杆菌EHA105。通过农杆菌介导法将pCAMBIA1300-HN1转入水稻愈伤组织。经过暗培养、愈伤筛选、分化、生根和移栽,4个月后获得转基因水稻种子。经PCR鉴定,HN基因已插入到水稻基因组中。SDS-PAGE和Western blotting鉴定结果表明,水稻胚乳成功表达了HN蛋白,且该蛋白通过SP阳离子层析和凝胶过滤层析,其纯度达到90%以上。根据国家制定的新城疫血凝抑制(hemagglutination inhibition, HI)试验诊断技术标准(HI≥4log2,检测的抗体为阳性),利用胶体金标记HN蛋白,通过双抗夹心法制备NDV抗体半定量快速检测试纸。结果显示:试纸与其他病毒的阳性血清无交叉反应,且试纸对新城疫标准阳性血清的敏感性可达到1︰102 400。根据308份临床血清的检测结果,NDV抗体试纸与和HI试验的符合率为97.08%,Kappa值为0.942。综上所述,获得了高纯度水稻胚乳表达的重组HN蛋白,并研制了一种简单、快速、灵敏度高、特异性强的半定量免疫层析试纸。该试纸能够初步应用于新城疫疫苗的免疫评价。     

陕西凤县林麝家庭养殖:历史、现状与繁殖特性

通过访问调查,对陕西凤县林麝家庭养殖历史和现状进行了分析。结果表明,1986~2001年是凤县林麝养殖的发展缓慢期,2002~2005年是快速发展期。2005年底,该县有林麝养殖户40家,存栏数为447头。大多数家庭林麝养殖规模小,近一半(47.5%)养殖户的存栏数不超过5头,大多数养殖户(65%)的存栏数低于10头。圈养林麝具偏雄性死亡特征,主要在5月繁殖,每胎产仔1.6±0.5只,双胎率为62.2%,雌雄比为0.946∶1。目前,所有养殖户养殖林麝的主要目的是销售种源,绝大多数养殖户对林麝养殖前景看好,并将扩大养殖规模。对林麝家庭养殖中出现的一些问题进行分析,并提出了相应的解决方案。     

生物技术在新城疫疫苗研究上的应用

新城疫病毒(NDV)是副粘病毒科、副粘病毒属的原型病毒,亦称副粘病毒1型(APMV-1),属于不分节段的负极性单股基因组RNA病毒。它所引起的传染病——人兽共患新城疫(ND)至今仍是对世界养禽业危害和威胁最严重的病毒病之一。NDV是一种高度接触传染性病原,在小鸡、火鸡、鸽、鹤、鹌鹑和数种鸟群中能引起100％发病死亡。为此,国内外学者一直对ND防治研究给予高度重视。现代生物     

重组新城疫病毒疫苗研制现状

新城疫病毒引起的新城疫是一种常见的禽类传染病。新城疫病毒可诱导感染的宿主产生细胞、体液和黏膜免疫应答,是一种理想的疫苗载体,可表达病毒和细菌的多种蛋白。这些病原体包括禽流感病毒、人副流感病毒3型、犬瘟热病毒、禽巨肺病毒、呼吸道合胞病毒、Nipah病毒、水疱性口炎病毒、狂犬病毒、牛短崭热病毒、传染性支气管炎病毒、重症急性呼吸综合征冠状病毒、埃博拉病毒、马尔堡病毒、肠病毒71型、脊灰病毒、Ⅰ型人类免疫缺陷病毒、传染性法氏囊病毒、诺如病毒、非洲猪瘟病毒、牛疱疹病毒1型、西尼罗病毒、鹅细小病毒、猪圆环病毒Ⅱ型、传染性喉气管炎病毒、鸡毒支原体和博氏疏螺旋体等。本文简要综述重组新城疫病毒的构建及其免疫机制的研制现状。     

仔猪的饲养管理与疾病防治研究

仔猪的成活率关系到生猪养殖户的成本和收入问题,因此,对于养殖户来讲仔猪的饲养管理与疾病防治至关重要。本文结合笔者自身的实际工作过程中的一些情况,对仔猪的饲养管理和疾病防治进行探讨。     

北京市花鸟市场常见留鸟流感病毒携带情况调查

目的阐明H7N9爆发季节北京市禽流感的流行现状,为流感防控提供依据。方法对北京市花鸟市场开展流感监测,使用SPF鸡胚进行病毒分离。结果病毒分离显示从鸽子中分到1株高致病性新城疫病毒,从麻雀中分到1株禽副黏病毒2型,并未分离到H7N9流感病毒。结论初步掌握了北京花鸟市场留鸟的病毒流行情况,H7N9流感病毒在此尚未流行,为流感防控提供第一手的材料。     

掺假饲料酵母中尿素含量的测定

掺假饲料酵母中尿素含量的测定张庆华，罗辉芬，王艳华（辽宁省微生物研究所，朝阳１２２０００）随着养队业的迅猛发展，蛋白质饲料越来越缺乏，饲料酵母以其蛋白质含量高，氨基酸齐全等优势逐渐占领市场，也深受广大养殖户的欢迎。但是由于国家尚未制定饲料酵母的国家标...