抗癌胚抗原单链抗体基因在家蚕细胞和幼虫中的表达

将抗癌胚抗原（ＣＥＡ）单链抗体基因插入家蚕杆状病毒转移载体ｐＢａｃＰＡＫＨｉｓ, 与修饰的家蚕核型多角体病毒ＢｍＢａｃＰＡＫＤＮＡ共转染家蚕细胞, 经同源重组得到含有在多角体蛋白基因启动子控制下的抗ＣＥＡＳｃＦｖ 基因的重组病毒ＢｍＢａｃＳｃＦｖ。用重组病毒分别感染家蚕细胞和幼虫, 在两者中均得到了高效表达, 产物分子量为２８ｋＤ, 前者占细胞总蛋白的６ ％ , 后者为０ ．３ ｍｇ／ 蚕。目的基因在家蚕细胞和幼虫中表达产物经Ｎｉ２＋ＩＤＡＳｅｐｈａｒｏｓｅ６Ｂ亲和柱纯化, 前者纯度可达９０％ 以上, 后者纯度较低; 纯化后的融合蛋白具有ＣＥＡ 结合活力, 其亲和常数分别为５ ．４×１０８／ｍｏｌ·Ｌ－ １ 和２．３ ×１０８／ｍｏｌ·Ｌ－１ , 略低于其亲本单抗Ｅ７Ｂ１０ ２．７ ×１０９／ｍｏｌ·Ｌ－ １ 。     

木毒蛾核型多角体病毒形态结构及理化性质的研究

木毒蛾核型多角体病毒属昆虫杆状病毒科,核型多角体病毒属,多粒包埋型。在扫描电镜下,多角体呈不规则多面体,大小下一,平均直径为１．４μｍ,病毒粒子杆状,大小约为３９４×５６ｎｍ,经ＳＤＭ－ＰＡＧＥ分析,病毒多角体蛋白分子量为３０．５ｋＤ,病毒粒子结构蛋白由１９条多肽组成,分子量范围在８８－１７ｋＤ之间。多角体富含Ｇｌｕ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、而Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、和Ｈｉｓ含量较少。其酸碱氨基酸之比为１．２６。病毒核酸为一环状ＤＮＡ,长度约为３８μｍ,经ＨｉｎｄⅢ、ＰｓｔⅠ、ＥｃｏＲⅠ和ＢｇｌⅠ单酶切以及ＢａｍＨⅠ＋ＨｉｎｄⅢ、ＢａｍＨⅠ＋ＰｓｔⅠ、ＢａｍＨⅠ＋ＢｇＩⅠ和Ｘｈｏｌ＋ＥｃｏＲⅠ双酶切分析,ＤＮＡ总分子量约为７１．６×１０￣６Ｄａｌｔｏｎｓ。     

系统感染TMV的番茄叶胞外β-1,3-葡聚糖酶

系统感染ＴＭＶ （ｔｏｂａｃｃｏ ｍ ｏｓａｉｃ ｖｉｒｕｓ）的番茄（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ Ｍｉｌｌ．）叶胞外蛋白提取液经冰冻干燥浓缩、－ ２０℃丙酮沉淀、ＣＭ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｃ－２５离子交换层析、ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ａ－２５离子交换层析和Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－７５凝胶层析纯化,获得ＰＡＧＥ均一的β－１,３－葡聚糖酶．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ证明,它包含分子量为３６ ｋＤ 和２７ ｋＤ的两个同工酶．以昆布多糖为底物,酶的最适ｐＨ 在４．８—５．２之间,在ｐＨ ４—８稳定;酶的最适温度在３０—４０℃之间,在４０℃保温１ｈ 后酶活性不变;Ｋｍ 值为９．２ ｍ ｇ／ｍ Ｌ．在系统感染ＴＭＶ 的番茄叶胞外蛋白提取液中,有分子量为２２ ｋＤ、２７ ｋＤ和３６ ｋＤ的３个β－１,３－葡聚糖酶同工酶     

抗品胚抗原单链抗休基因在家蚕细胞和幼虫中的表达

将抗癌胚抗原（ＣＥＡ）单链抗体基因插入家蚕杆状病毒转移载体ｐＢａｃＰＡＫ－Ｈｉｓ,与修饰的家蚕核型多角体病毒Ｂｍ－ＢａｃＰＡＫ ＤＮＡ共转染家蚕细胞,经同源重组得到含有在多角体蛋白基因启动子控制下的抗ＣＥＡ ＳｃＦｖ基因的重组病毒Ｂｍ－ＢａｃＳｃＦｖ。用重组病毒分别感染家蚕细胞和幼虫,在两者中均得到了高效表达,产物分子量为２８ｋＤ,前者占细胞总蛋白的６％,后者为０．３ｍｇ／蚕。目的基因在家蚕细胞和     

抗癌胚抗原单链抗体基因与核心链霉亲和素基因融 …

将抗癌胚抗原单链抗体基因与核心链霉亲和素基因融合插入昆虫杆状病毒供体质粒ｐＦａｓｔＢａｃＨＴａ中,在粉纹夜蛾Ｔｎ－５Ｂ１－４细胞中进行表达。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析结果表明,表达产物分子量为４１ｋＤ左右,Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹分析结果表明,以ＨＲＰ标记的生物素进行蛋白质印迹在４１ｋＤ处可见表达条带,表明融合蛋白能特异性的与生物素结合,放射免疫分析表明重组杆状病毒表达产生的ＳｃＦｖ－ＣＳ蛋白能特异性结合癌胚     

蜀柏毒蛾核型多角体病毒结构多肽及基因组酶切分析

对蜀伯毒蛾核型多角体病毒（Ｐａｒｏｃｎｅｒｉａ ｏｒｉｅｎｔａ Ｎｕｃｌｅａｒ ｐｏｌｙｈｅｄｒｏｖｉｒｕｓ,简称ＰａｏｒＮＰＶ）形态结构、结构多肽、限制内切酶图谱等特性进行了研究。采用不连续系统垂直板ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析了ＰａｏｒＮＰＶ的多角体蛋白、病毒粒子结构多肽。应用５种限制性内切酶对ＰａｏｒＮＰＶ基因组ＤＮＡ进行了酶切分析。结果表明：经热处理的多角体蛋白仅有一条带,分子量为３１．５ｋＤ,不     

黄地老虎颗粒体病毒DNA片段的克隆与颗粒体蛋白基因的定位

用ｐＵＣ１９质粒作载体,克隆了黄地老虎颗粒体病毒（Ａｇｒｏｌｉｓｓｅｇｅｔｕｍｇｒａｎｕｌｏｓｉｓｖｉｒｕｓ,简称ＡｓＧＶ）ＤＮＡＰｓｔＩ－Ｄ．Ｅ．Ｆ．Ｇ．Ｈ．Ｊ．Ｋ．等７个片段。以［￣（３２）Ｐ］－ｄＣＴＰ标记的油桐尺蠖核型多角体病毒（Ｂｕｚｕｒａｓｕｐｐｒｅｓｓａｒｉａｎｕｃｌｃａｒｐｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓｖｉｒｕｓ简称ＢｓＮＰＶ）多角体蛋白基因为探针,在３７℃条件下对ＡｓＧＶ）颗粒体蛋白基因进行了定位,将其分别定位于ＢｓｌⅡ－Ｓ或ＴＰｓＴＩ－Ａ或Ｂ和ＥｃｉＲＩ－Ａ片段上。     

粘虫核型多角体病毒包涵体蛋白的性质及其对几种肿瘤细胞生长的抑…

ＳＤＳ－ＰＡＧ电泳分析表明粘虫核型多角体病毒的包涵体蛋白由几种多肽组成,其中分子量为３２ｋＤ的主带为多角体的主要结构多钛,经Ｓｅｐｈａｃｅｙｌ Ｓ－２０柱层析纯化后分析了其氨基酸组成,证明此包涵全蛋白是一种疏水氨基酸为主要组成的特异性蛋白。我们发现３２ｋＤ蛋白对Ｈｅｌａ,ＨＬＡＭＰ、ＨＩＣＡＭ等三种肿瘤细胞的生长有不同程序的抑制,用＾３Ｈ－ＴｄＲ标记核酸合成代谢的Ｈｅｌａ细胞的放射活性证实了这种观     

金鱼生长激素II基因在杆状病毒中的表达

以ｐＳＸＩＶＶＩ＾＋Ｘ３为转移载体,将编码金鱼生长激素Ⅱ的ｃＤＮＡ插入粉纹夜蛾核型多角体病毒（ＴｎＮＰＶ）基因组中,构建了重组病毒株ＴｎＮＰＶ－ＳＸ＾＋ｇｆＧＨⅡ４６。该毒株能在草地贪夜蛾离体培养细胞及银纹夜蛾幼虫中表达金鱼生长激素基因。蛋白免疫印迹表明,表达的生长激素蛋白分子量为２２．５ｋＤａ,与理论计算值相符,且表达的生长激素可分泌到感染细胞的培养基及虫体血淋巴中。ＲＩＡ结果表明,表达产物与天     

枯草芽孢杆菌中性内切β-甘露聚糖酶的纯化及性质

三草芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＢＭ９６０２产生的中性内切β－甘露聚糖酶（ｅｎｄｏ－β－１,４－Ｄ－ｍａｎｎａｎ ｍａｎｎａｎｏｈｙｄｒｏｌａｅｓ,ＥＣ,３．２．１．７８）经硫酸铵分级沉淀、ＤＥＡＥ－纤维素（ＤＥ２２）离子交换柱层析,得到电泳纯的样品,提纯了４５．５倍,收率为５．９％。用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得该酶的分子量为３５ｋＤ。用ＰＡＧＥＩＥＦ测得其等电点ｐⅠ为４．５。酶反应的     

苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白与DNA分子的相互作用

苏云金芽孢杆菌 (Ｂａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ,简称Ｂｔ)在形成芽孢的同时能够产生伴孢晶体 ,其中含有一种或几种杀虫晶体蛋白 (ＩＣＰｓ,ＩｎｓｅｃｔｉｃｉｄａｌＣｒｙｓｔａｌＰｒｏｔｅｉｎｓ) ,即δ 内毒素[1] 。伴孢晶体进入敏感昆虫的消化道后发生溶解并释放出 2 7～ 1 40ｋＤ的原毒素。在中肠蛋白酶的作用下 ,原毒素被激活为 2 3～ 70ｋＤ的毒性多肽[2～ 4 ] 。随后毒素与中肠刷状缘膜泡 (ＢＢＭＶ ,ＢｒｕｓｈＢｏｒｄｅｒＭｅｍｂｒａｎｅＶｅｓｉｃｌｅ)上的特异受体发生结合并且在细胞膜上形成孔道 ,破坏细胞…     

地衣芽孢杆菌β—甘露聚糖酶的纯化及酶学性质

地衣芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）ＮＫ－２７菌株发酵产生的β－甘露聚糖酶（β－ｍａｎｎａｎａｓｅ）经硫酸铵盐析沉淀,两次ＤＥＡＥ纤维素和Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００离子交换柱层析以及制备ＰＡＧＥ等步骤,获得了凝胶电泳均一的样品。用ＳＤＳ－凝胶电泳测得纯化后的β－甘露聚糖酶分子量为２６ｋＤ,用凝胶聚焦电泳测得等电点Ｐ１为５．０。酶反应的最适ｐＨ为９．０,最适温度为６０℃,稳     

重组人骨形态形成蛋白2在家蚕幼虫中表达及产物纯化

将编码人ＢＭＰ２ｃＤＮＡ基因插入昆虫杆状病毒转移载体ｐＢａｃＰＡＫ１,与修饰的家蚕核形多角体病毒Ｂｍ－ＢａｃＰＡＫＤＮＡ共转染家蚕细胞,通过同源重组得到含有在多角体蛋白基因启动子控制下的ＢＭＰ２ｃＤＮＡ基因的重组病毒Ｂｍ－ＢａｃＰＡＫ－ＢＭＰ２。用重组病毒感染家蚕幼虫,第五天ＢＭＰ２表达率最高,每毫升蚕血淋巴中约１０μｇ表达产物;表达产物在在体内被加工成Ｃ－端１６ｋＤ片段,以二硫键连结成分子量为３０ｋＤ的同源二聚体;经纯化获得９０％以上纯度的成熟ＢＭＰ２,与骨基质胶原结合后植入大鼠皮下,７天后在局部诱导生成软骨组织。     

甲基单胞菌Methylomonas sp.GYJ3中甲烷单加氧酶羟基化酶组分…

从Ｍｅｔｈ ｙｌｏｍｏｎａｓ ｓｐ．ＧＹＪ３菌株中经ＤＮＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣｌ－６Ｂ阴离子交换层析和ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ３００凝胶层析分离出纯化出甲烷加氧酶羟基酶组分,经ＨＰＬＣ分析,纯度大于９０％,分子量为２４０ｋＤ,纯化们数为３．９,比活为２２５ｎｍｏｌ环氧丙烷每分钟毫克蛋白,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ表明,羟基化酶由三个亚基组成,亚基分子量为５６、４３、２７ｋＤ．ＩＣＰＡＥＳ测定羟基化酶的Ｆｅ     

苏云金芽孢杆菌δ—内毒素的杀虫机理及其增效途径

苏云金芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ,Ｂｔ）制剂是当前应用最广、最有效的微生物杀虫剂。Ｂｔ属于革兰氏阳性细菌,在形成芽孢的同时,产生伴孢晶体。伴孢晶体是Ｂｔ杀虫活性的主要来源,它可能由几种晶体蛋白即δ－内毒素组成。δ－内毒素的专一...     

鸡传染性支气管炎病毒S1基因在昆虫细胞中表达水平初探

将含有鸡传染性支气管炎病毒 Ｓ１ 基因ｃ Ｄ Ｎ Ａ 的重组转移质粒ｐ Ｓ Ｘ Ｉ Ｖ Ｖ Ｉ＋ Ｘ３ Ｓ１ ． Ｈｏｌｔｅ 和ｐ Ｓ Ｘ Ｉ Ｖ Ｖ Ｉ＋ Ｘ３／４ Ｓ１ ． Ｈｏｌｔｅ 分别与粉纹夜蛾核型多角体病毒 Ｔｎ Ｎ Ｐ Ｖ Ｓ Ｖ Ｉ－ Ｇ Ｄ Ｎ Ａ（ Ｏ Ｃ Ｃ－ ,ｇａｌ＋ ） 共转染草地夜蛾（ Ｓｆ９） 细胞,经空斑纯化得到重组病毒 Ｔｎ Ｎ Ｐ Ｖ（ Ｘ３） Ｓ１ ． Ｈｏｌｔｅ Ｏ Ｃ Ｃ＋ 和 Ｔｎ Ｎ Ｐ Ｖ（ Ｘ３／４） Ｓ１ ． Ｈｏｌｔｅ Ｏ Ｃ Ｃ＋ 。将重组毒株分别感染 Ｔｎ５ Ｂ１ 细胞,并进行 Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ 与 Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ 检测。结果表明, Ｔｎ Ｎ Ｐ Ｖ（ Ｘ３／４） Ｓ１ ． Ｈｏｌｔｅ Ｏ Ｃ Ｃ＋ 在感染的细胞中高效表达了 Ｓ１ 蛋白, Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ 凝胶薄层色谱分析结果显示,感染病毒后７２ ｈ Ｓ１ 蛋白的表达量占细胞内总蛋白量的３５ ．８ ％ ,而 Ｔｎ Ｎ Ｐ Ｖ（ Ｘ３） Ｓ１ ． Ｈｏｌｔｅ Ｏ Ｃ Ｃ＋ 感染的细胞内检测不出 Ｓ１ 蛋白。经分析认为这一差异主要来自 Ｓ１ 基因翻译起始位点及其附近的周围环境。     

家蚕核型多角体病毒中国株和日本株vp39基因的比较研究

以苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒的核衣壳蛋白基因ｖｐ３９设计引物,用ＰＣＲ技术扩增了家蚕核型多角体病毒中国株（ＢｍＮＰＶ－Ｃｈ）－１．３ｋｂ片段并测定了其全序列长１２３０ｂｐ。推导的氨基酸３５１个,其与ＢｍＮＰＶ日本株（ＢｍＮＰＶ－Ｊａ）ｖｐ３９基因核苷酸序列同源性达９７．５％,氨基酸同源性达９７．１％。该片段在Ｅ．ｃｏｌｉＢＬ２１中诱导表达能产生分子量约为３８ｋＤ的特征性蛋白带,证明所扩增片段为Ｂｍ     

草鱼出血病病毒多肽的基因定位

用聚丙烯酰胺凝胶电泳分离纯化的草鱼出血病病毒ＧＣＨＶ８７３的基因组ｄｓ－ＲＮＡ的１１个片段,分别在麦胚无细胞翻译体系中进行翻译。其翻译产物经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ系统分析。结果表明,基因组片段１、２、３、４、５、和１０分别编码病毒核心衣壳的结构多肽ＶＰ１、ＶＰ２、ＶＰ３、ＶＰ４、ＶＰ５和ＶＰ１０,片段６和７分别编码病毒外层衣壳的结构多肽ＶＰ６和ＶＰ７。片段８和９分别编码５２ｋＤ和４１ｋＤ的多肽,片段１１编码两种多肽,分子量分别为２９ｋＤ和１９．５ｋＤ,它们与病毒结构多肽无明显对应关系。病毒基因组与多肽大体是一一对应的关系。     

中国对虾一种球状病毒的分离提纯及其核酸蛋白特性的研究

从感染致病的中国对虾（Ｐｅｎａｅｕｓｃｈｉｎｅｓｉｓ）中分离到一种球状病毒,其育径约为２０±４ｎｍ。进行人工感染实验,对虾死亡率为６６％;用脱氧核糖核酸酶（ＤＮａｓｅ）,核糖核酸酶（ＲＮａｓｅ）及二苯胺染色法对病毒核酸进行处理,证明该病毒核酸为脱氧核糖核酸,用Ｓｌ核酸酶（Ｓｌｎｕｃｌｅａｓｃ）对该核酸进一步消化处理,进一步证实该病毒含单链ＤＮＡ。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ结果显示,该病毒含４条结构多肽,其分子量分别为８６ｋＤ,７９ｋＤ,７０ｋＤ及２５．５ｋＤ。根据上述特性分析,该病毒可能属于细小病毒科（ｐａｒ－ｖｏｖｉｒｉｄａｅ）,故暂定名为中国对虾细小病毒（ＰｅｎａｅｕｓｃｈｉｎｅｓｉｓＰａｒｖｏｖｉｒｕｓ简称ＰｃＰＶ）。     

油桐尺蠖核型多角体病毒多角体蛋白的理化性质及二级结构预测

由ＳＤＳ及梯度胶电泳测得测得油桐尺蠖核型多型多角体病毒多角体蛋白天然状态及亚基分子量分别为３６３ｋＤ与３１．５ｋＤ从而推断此蛋白为十二聚体,亚基间无二硫键作用,ＢｓＮＰＶ多角体蛋白的远紫外圆二色谱显示,它的二级结构含有３１．７％的α螺旋,２３．８％的β折叠及４４．５％的无规卷曲,与二级结构预测结果相符,通过荧光光谱实验推知,ＢｓＮＰＶ多角体蛋白的表面疏水性弱;其色氨酸残基位于蛋白疏水核内部。