sORFs及其编码的微肽的发现和鉴定方法研究进展

小开放阅读框(small open reading frames,sORFs)是指含有不多于100个密码子的开放阅读框.由sORFs编码的肽被称作微肽(micropeptide)或小开放阅读框编码的肽(sORFs-encoded pep-tide,SEP).随着生物信息学、计算机科学以及高通量测序技术的发展,已在多个物...     

小开放阅读框编码微肽的研究进展

已有的研究表明,生命体中存在着大量的非编码RNA(non-codingRNA,ncRNA),先前被错误注释为ncRNA的分子序列中实际上包含小的开放阅读框(short open reading frame, sORF),部分sORF可转录并翻译成进化保守的微肽(micropeptide),这些sORF由于序列较短和研究技术手段的限制而被忽略。迄今为止,已在生命体中发现一些sORF编码的功能各异的微肽,它们对生命活动的调控起着重要作用。本文对近年来发现的功能性微肽进行综述,介绍了本课题组发现新型微肽MIAC (micropeptide inhibiting actin cytoskeleton)的过程,同时总结了研究潜在微肽的相关技术,以期为研究人员利用相关技术发现新微肽提供借鉴和参考。     

长非编码RNA编码微肽的研究进展

长非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是长度超过200 nt的非编码RNA,具有一个或多个短开放阅读框,可编码功能性微肽。这些功能性微肽在各种生物过程中扮演着重要角色,例如Ca2+转运、线粒体代谢、肌细胞融合和细胞衰老等过程。同时,这些生物过程又在机体稳态调控、疾病和癌症的发生与发展、胚胎发育等重要生理过程中起关键作用。因此,研究由lncRNA编码的微肽在生物体的潜在的调控机制,将有助于进一步解析生物体潜在调控过程,并为后续疾病的靶向治疗及动物生长性能的提高提供新的理论依据。本文综述了现阶段lncRNA编码微肽领域的最新研究进展,并对当前微肽在肌肉生理、炎症与免疫、人类常见癌症、胚胎发育等领域的研究进展进行描述与总结,最后简单阐述了lncRNA编码微肽现阶段面临的问题和存在的挑战,以期为后续微肽的深入研究提供科学参考及新思路。     

灵芝悬浮培养中添加微颗粒Talc对灵芝酸产生的影响

灵芝酸是灵芝中重要的药理活性物质,其低产量限制了它的广泛应用和深入研究,高效提高液体发酵中灵芝酸的含量十分必要。以CGMCC 5.65为材料,在悬浮培养条件下,研究添加微颗粒Talc对灵芝酸产生的影响。结果表明,微颗粒Talc添加显著减小了灵芝细胞粒径,对照组为(3.33±0.16)mm,15g/L微颗粒Talc添加组为(2.04±0.12)mm。灵芝细胞中单体灵芝酸和总灵芝酸的含量在微颗粒Talc添加条件下也显著提高。15g/L微颗粒Talc添加组的总灵芝酸含量达到(1.51±0.02)mg/100mg细胞干重,GA-Mk、GA-T和GA-Me的含量最高为(6.02±0.29)、(5.08±0.14)和(1.71±0.09)μg/100mg细胞干重,分别是对照的1.6、4、1.9和1.4倍。另外,15g/L微颗粒Talc添加条件下鲨烯和羊毛甾醇的最大积累量分别为(3.69±0.23)和(34.86±6.41)μg/100mg细胞干重,是对照的2.6和4.2倍;灵芝酸生物合成途径关键基因fps和cyp-5150l8的表达量最高为对照的2.35和1.53倍。     

基于磁性纳米微球的Gamma干扰素酶联免疫检测方法建立

目的：建立及评价使用磁性纳米微球作为固相载体的人酌干扰素（Interferon-gamma,IFN-gamma）双抗体夹心酶联免疫吸附实验 （Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）检测方法。方法：以杂化细乳液合成法制备磁性纳米微球,将其作为免疫检测的固相 载体。将磁性微球与IFN-酌抗体进行偶联,建立基于磁性微球的ELISA 检测方法,检测人IFN-gamma,绘制IFN-gamma标准曲线并进行方法 学评价。结果：获得包被有人IFN-gamma抗体的免疫微球, 抗体偶联率为54.5 %。用它建立IFN-gamma的双抗体夹心的ELISA 检测方法,检 测范围为0-1000 pg/mL,相关系数为0.9996,灵敏度23.2 pg/mL,功能灵敏度0 pg/mL,批内和批间变异系数（Coefficients of Variance,CVs）＜8 %,检测总共需要2 小时。结论：成功制备了IFN-酌免疫微球并建立了定量检测人IFN-gamma的双抗体夹心磁珠 酶联免疫方法。     

长链非编码RNA的微RNA海绵作用与呼吸系统疾病

长链非编码RNA（long non-coding RNAs, lncRNAs）是一类由长度大于200个核苷酸组成的长链非编码序列。lncRNAs具有较长的序列,使得lncRNAs具有复杂的二级及三级结构,这也是lncRNAs结合DNA、RNA和蛋白质及其行使复杂功能的结构基础。MicroRNA（miRNAs)是长度在19到25个核苷酸之间的非编码单链RNA分子,是目前研究最多的小分子非编码RNA。而lncRNAs通过结合或者螯合miRNA来调节miRNA丰度,发挥lncRNA的“海绵”作用,从而调控一系列的病理生理过程。lncRNAs及miRNA在呼吸系统疾病的发生、发展、治疗和预后起重要作用。本文就lncRNAs及其“海绵”作用对呼吸系统疾病的影响及可能的机制进行综述。     

基于硒化镉量子点磁微球的微悬臂梁式免疫传感器片上磁分离

应用了以硒化镉量子点为荧光探针,具有磁性和抗体双重靶向功能的聚苯乙烯磁微球.设计了基于此种磁微球的新型微悬臂梁式免疫传感器,满足在液相环境中,借助嵌入到聚苯乙烯磁微球的荧光探针及微球表面的特异性抗体探针,达到生物分子的定性检测,借助具有纳米机械响应的微悬臂梁及微平面电感线圈,达到生物分子的定量检测及传感器的复用性,解决传统微悬臂梁式免疫传感器的不足.着重对三种粒径尺寸的硒化镉量子点进行了表征,同时针对片上磁分离的机理,梁上微电感线圈的结构,微磁场对磁微球的吸引进行了研究,设计并优化出满足新型微悬臂梁式免疫传感器所需的蛇形微平面电感线圈.通过生物磁分离实验,验证了设计及优化的结果,实现了用于生物分子分离的片上磁分离技术.     

Multianalyte immunoassay with self-assembled addressable microparticle array on a chip

This paper describes the random fluidic self-assembly of metallic particles into addressable two-dimensional microarrays and the use of these arrays as a platform for constructing a biochip useful for bioassays. The basic units in the assembly were the microfabricated particles carrying a straightforward visible code and the corresponding array template patterned on a glass substrate. The particles consisted of a hydrophobic and magnetic Ni-polytetrafluoroethylene (PTFE) composite layer on one face, and on the other face a gold layer that was modified for biomolecular attachment. An array template was photoresist-patterned with spatially discrete microwells in which an electrodeposited Ni-PTFE hydrophobic composite layer and a hydrophobic photo-adhesive coating were deposited. The particles, after biomaterial attachment and binding processes in bulk, were self-assembled randomly onto the lubricated bonding sites on the chip substrate, driven by a combination of magnetic, hydrophobic, and capillary interactions. The encoding symbol carried by the particles was used as the signature for the identification of each target/assay attached to the particle surface. We demonstrate here the utility of microfabricated-encoded particle arrays for conducting multianalyte immunoassays in a parallel fashion with the use of imaging detection.     

以溶解性可调节高分子为载体的酶免疫分析

将单克隆抗体与溶解性受酸度或温度调节的高分子共价连接.研究了共聚物的溶解性可调节特征,建立了以溶解性可调节高分子为载体酶免疫分析方法,对血清样品中HBsAg进行了检测,灵敏度0.5 μg/L,对43例样品检验的结果与ELISA方法相符.     

共价连接的多肽酶联免疫测定法的研究

采用紫外线照射及戊二醛活化处理聚苯乙烯酶标板后再包被八肽胆囊收缩素（CCK-8）,以此为基础进行酶联免疫吸附试验（ELISA）,通过不同的洗涤过程对CCK-8与酶标板相互作用的性质进行研究.结果表明,该包被方法可使CCK-8通过共价交联的方式稳定地结合于固相载体上,该方法适用于不同来源的酶标板,处理后的酶标板性质稳定,可储存使用,测定的批内及批间变异系数分别为4.75%和7.80%,方法稳定可靠,重复性好,便于推广应用.     

微粒和血细胞在脓毒症高凝状态中的作用

目的:探讨血小板和红细胞磷脂酰丝氨酸(PS)暴露和循环微粒(MPs)在脓毒症高凝状态中的作用。方法:集10例诊断为脓毒症的患者及10例健康体检者的新鲜血;离心分离出红细胞、富血小板血浆及MPs;应用Alexa-Fluro 488-乳粘素/CD 41a/CD14、Alexa-Fluro 647-CD 235a/CD 31/CD 45标定红细胞、血小板、内皮细胞、白细胞及单核细胞来源的MPs;流式细胞仪测定红细胞和血小板的PS外翻、MPs的数量;血凝仪测定相应凝血时间。结果:相对于健康人,脓毒症患者PS外翻红细胞(3.53%vs0.53%,P0.05)和血小板(3.00%vs 0.45%,P0.05)、MPs总数(4830/μL vs 2861/μL,P0.05)及各亚型MPs均明显升高;红细胞(238.4s vs 346.8s,P0.05)、血小板(209.1s vs 335.9s,P0.05)及MPs(207.1s vs 318.2s,P0.05)的凝血时间缩短。MP数、PS+红细胞/血小板比例分别与各自凝血时间成负相关(MP:r=-0.592,P=0.006;红细胞:r=-0.565,P=0.009;血小板:r=-0.641,P=0.002)。结论:红细胞、血小板的PS暴露及循环MPs和脓毒症高凝状态的发生相关,可能对患者凝血功能检测和抗凝治疗有一定的意义。     

时间分辨荧光免疫分析仪的临床实验方法和评价方案

时间分辨荧光免疫分析技术是一种利用稀土离子及其螯合物作为示踪剂的灵敏度高、线性范围宽、应用范围广的非放射性标记免疫分析技术。研制了一种性能稳定的时间分辨荧光免疫分析仪,为了进一步将这一先进超微量物质检验技术推广于临床应用,根据美国国家临床实验室标准化委员会（NCCLS）制订的临床评价方案,选择放射免疫分析法、化学发光免疫分析法以及Perkin Eimer Life Sciences公司的Auto DFLFIA-1235全自动时间分辨荧光免疫分析仪作为比较方法,提出了三套检验时间分辨荧光免疫分析仪性能的临床实验方法和评价方案。并利用其中的一套方案进行了实验,结果表明这些方案可操作性强,结果可信,经济适用,可作为同类医疗检验仪器进行临床实验的参考。     

Improvement of the Lectin-Antibody Enzyme Immunoassay of the Alphafetoprotein Carbohydrate Chain for Automation with the Enzyme Immunoassay Robot

The lectin-antibody enzyme immunoassay of the alphafetoprotein-L3 carbohydrate chain, a tumor marker of liver cancer, has not been automated. We improved the technique of the assay for automation. Consequently, alphafetoprotein-L3 and total alphafetoprotein were detected with two lectins using an automatic paramagnetic bead handling robot. This indicates that the improved method is potentially applicable to the automated enzyme immunoassay robot.     

时间分辨荧光免疫分析及其在临床检测中的应用

本文介绍了时间分辨荧光免疫分析法的检测原理、检测方法,分析了时间分辨荧光免疫分析仪的结构并介绍了其在临床检测方面的应用。     

氯霉素酶联免疫检测方法的研究

通过活化琥珀氯霉素的羧基使其与蛋白联结合成了免疫抗原 ,并制备了氯霉素的多克隆抗体 ,建立了氯霉素直接竞争酶联免疫检测方法 ,检测时间在 1h之内。抗体的ELISA效价达 3.2× 10 5以上 ,I50 为 12 .9ng ml,检测范围为 0 .2 4ng ml- 6 78.8ng ml。抗体与琥珀氯霉素的交叉反应率为 174 .5 4 % ,与其它抗生素的交叉反应率均小于 0 .0 1%。牛奶样品中平均添加回收率为10 6 .5 6 %。所建立的氯霉素酶联免疫检测方法达到了我国牛奶氯霉素残留限量 0 .2 5ng ml的要求 ,为国产的商品化氯霉素酶免疫检测试剂盒的研制奠定了基础     

Effects of Methanol and Temperature on Enzyme Immunoassay with Monoclonal Antibodies Specific to the Insecticide Etofenprox

We examined the effects of methanol and temperature on the reactivity of monoclonal antibodies specific to the insecticide etofenprox. When the antigen-antibody reaction was done at 4°C in 10% methanol, the sensitivity in the enzyme immunoassay with each antibody was more than 10-fold higher than that measured at 37°C. Although in 10% methanol one of the antibodies reacted equally with both etofenprox and the carbonate-derivative of etofenprox, in 50% methanol the antibody reacted with etofenprox, but not with the derivative.     

蛋白质点阵/芯片技术的新进展

蛋白质点阵/芯片技术是分子生物学技术的重要进展,在功能蛋白质组研究方面具有广阔的潜在应用价值.目前发展起来的印迹蛋白微阵列、分子扫描技术和传感器生物芯片质谱,将应用于药靶检测、疾病诊断、蛋白质结构鉴定和/或蛋白质之间的相互作用分析等方面,具有分析速度快、效率高、样品消耗少等特点,将成为生命科学与医学领域新的研究工具.