CRISPR/Cas系统在病毒感染性疾病治疗中的应用进展

CRISPR/Cas(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associate)系统作为当下炙手可热的基因编辑技术,近几年在各方面取得了诸多进展,本文就CRISPR主要类型Cas蛋白的作用方式,CRISPR/Cas技术在病毒感染性疾病中的应用,作用机制,当下治疗方法进行讨论,着重对人类免疫缺陷病毒（Human immunodeficiency virus,HIV）、单纯疱疹病毒I型（Herpes simplex virus-1,HSV-1）、EB病毒（Epstein-barr virus,EBV）、乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus,HBV）、人乳头瘤病毒（Human papillomavirus,HPV）、人类嗜神经多瘤病毒JC(Polyoma JC virus,JCV)、非洲猪瘟病毒（African swine fever virus,ASFV）进行综述。     

人类巨细胞病毒、EB病毒和单纯疱疹病毒1型与慢性牙周炎的相关性研究

目的　研究人类巨细胞病毒( HCMV)、Epstein- Barr病毒( EBV)和单纯疱疹病毒1型( HSV- 1)与慢性牙周炎的相关性。方法　收集6 2例慢性牙周炎患者(男性2 7例,女性35例;平均年龄5 3岁)的牙周炎部位,轻度龈炎部位的龈下菌斑,提取DNA后使用巢式PCR检测HCMV、EBV和HSV- 1,比较分析它们在同一患者不同部位的检出率。结果　牙周炎部位的HCMV检出率为38.7% ,EBV的检出率为5 8.0 % ,HSV- 1的检出率为30 .6 % ,2种以上病毒合并感染的检出率为4 0 .3% ;轻度龈炎部位的HCMV检出率为12 .9% ,EBV为19.4 % ,HSV- 1为9.7% ,2种以上病毒合并感染的检出率为8.0 %。这3种病毒及其合并感染在牙周炎部位的检出率均高于轻度龈炎部位,差异有统计学意义( P<0 .0 5 )。结论　提示HCMV、EBV、HSV- 1与慢性牙周炎有相关性。     

EB病毒感染相关外泌体的研究进展

外泌体(exosome)是由机体多种细胞释放的一种纳米级膜性小囊泡,包含母细胞来源的蛋白质、脂质以及核酸等物质,参与细胞间的信号传递,在疾病的发生、发展中起着重要作用。EB病毒(epstein-barr virus,EBV)是一种嗜人类淋巴细胞的双链DNA疱疹病毒。研究证实EBV感染的细胞分泌外泌体,其携带有EBV编码的功能性蛋白和核酸等多种生物活性分子,且这些生物活性分子在EBV感染相关疾病的发生、诊断及治疗中具有重要意义。现就近年来EBV感染相关外泌体中蛋白和核酸等方面的研究现状作一概述。     

同时检测人多瘤病毒和巨细胞病毒PCR技术的建立及在肾移植受者中的初步应用

建立同时检测人多瘤病毒(BKV)和巨细胞病毒(CMV)载量的实时定量荧光PCR技术(FQ-PCR),并探讨其在肾移植术后感染监测中的应用。选择BKV和CMV核酸保守性序列作为靶基因,PCR扩增靶片段与质粒pcD-NA3.1(+)连接。通过测序技术对进行克隆筛选。提取质粒并采用10倍梯度稀释(5×103～107拷贝/mL)作为BKV和CMV核酸序列的标准品,并评价其灵敏度;采用对比正常人DNA、BKV阳性质控和CMV阳性质控评价其特异性;通过对标准品DNA分别进行批内和批间各20次重复实验,以其循环阈值(Ct)的变异系数(CV)评价其精密度。对480例肾移植受者外周血样本,进行FQ-PCR检测BKV和CMV DNA拷贝数,检测FK506血药浓度,并对两者进行相关性分析。重组质粒经测序检测显示含有靶BKV和CMV核酸序列。所建立的FQ-PCR方法,其最低检测下限均为5.0×103拷贝/mL的DNA标准品。正常人DNA的BKV和CMV拷贝数检测为阴性,而阳性对照能够发现荧光值显著变化,证实为针对靶DNA的特异性扩增;重复性检测显示批内差异分别为3.44%(BKV)和2.23%(CMV),批间差异分别为4.98%(BKV)和3.76%(CMV)。肾移植患者CMV感染的阳性率为27.08%(130/480),明显高于BKV的阳性率(13.33%,64/480,P<0.05),并且感染程度与免疫抑制剂FK506用量呈正相关。建立的同时检测BKV和CMV两种病毒载量的FQ-PCR方法具有快速、重复性好、灵敏的优点,可为临床监测肾移植术后病毒感染提供技术平台。     

疱疹病毒科研究进展

疱疹病毒是一类大型双链DNA病毒.至今已发现9种疱疹病毒可感染人类,分别是单纯疱疹病毒1型、2型(HSV-1、2)、带状疱疹病毒(VZV)、EB病毒(EBV)、人巨细胞病毒(HCMV),以及人疱疹病毒(HHV)-6A、HHV-6B、HHV-7、卡波济肉瘤相关病毒(HHV-8)等,它们是已知感染人类的病毒种类数最多的一个病毒科.     

26例病毒性脑(膜)炎儿童脑脊液病原学特征研究

病毒是儿童脑(膜)炎发病的重要病原体,为全面了解脑(膜)炎儿童脑脊液中的病毒感染情况,采集2019年6月-2019年9月复旦大学附属儿科医院26例病毒性脑(膜)炎(Viral encephalitis and meningitis,VEVM)儿童脑脊液标本,通过两种核酸检测方法进行病毒检测.病毒宏基因组测序检测到小RNA病毒科(Picornaviridae,82.42％)、浓病毒亚科(Densovirinae,9.07％)、指环病毒科(Anelloviridae,3.21％)、圆环病毒科(Circoviridae,0.85％)、星状病毒科(Astroviridae,0.76％)和小双节 RNA 病毒科(Picobirnaviridae,0.38％),通过聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR)检测到肠道病毒(Enterovirus,EV)、单纯疱疹病毒 1 型(Herpes simplex virus,HSV-1)、人单纯疱疹病毒4型(Epstein-Barr virus,EBV)及腮腺炎病毒(Mumps virus,MuV),检出率分别为42.31％、7.69％﹑7.69％和3.85％.本研究初步明确了26例VEVM儿童脑脊液病毒信息,为深入研究其病原学进化分析奠定了基础.     

人类疱疹病毒6型

<正>人类疱疹病毒6型(HHV-6)最先是从淋巴细胞增生性疾病患者中分离出来的一种新的疱疹病毒。其抗原性和遗传学特性与疱疹病毒1型,疱疹病毒2型,巨细胞病毒(CMV),水痘一带状疱疹病毒(VZV)及EBV均不相同。后来发现HHV-6是幼儿急疹(ES)的病原体。本文就HHV-6的血清流行病学,从ES患儿中的分离检测,与HHV— 6感染有关的疾病及其病毒学特性等综述如下。     

EB病毒致病机制研究进展

EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)是一种常见的人类4型疱疹病毒,原发感染后可终身携带病毒。EBV感染无法从宿主中清除,呈现潜伏状态,一旦激活即可成为很多疾病的相关病因,与人类多种疾病特别是恶性肿瘤相关,包括Burkitt淋巴瘤、鼻咽癌、胃癌等。EBV致病机制复杂多样,目前致病机制的具体分子遗传机制尚未明确。本文主要从EBV与宿主细胞相互作用、免疫逃逸、EBV感染周期表达的相关产物与宿主的相互作用等几个方面,综述目前EBV致病机制的研究进展。     

CAR-T免疫细胞疗法在抗病毒感染中的研究进展

目前,世界上大多数病毒感染没有针对性的特效药,尤其是具有潜伏感染能力的病毒,如乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)、巨细胞病毒(cytomegalovirus, CMV)、Epstein-Barr病毒(epstein-barr virus,EBV)、人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus, HIV)等,严重威胁人类健康。这些病毒感染宿主细胞后,与宿主蛋白互作,导致宿主细胞在其表面表达一些特异性的感染或潜伏标志蛋白,可以成为CAR-T细胞疗法(chimeric antigen receptor T-cell immunotherapy, CAR-T)的靶点,为难治性病毒性疾病的治愈提供了新的方向。     

鼠γ疱疹病毒68(MHV68):研究γ疱疹病毒感染的模型

γ疱疹病毒成员遍及自然界,可感染包括人在内的多种哺乳动物.γ疱疹病毒的生物学特性主要有:(1)能在淋巴细胞中潜伏感染;(2)可以产生淋巴增生性疾病;(3)与淋巴组织和非淋巴组织肿瘤关系密切.最开始γ疱疹病毒根据感染T或B细胞的不同而分为γ1和γ2疱疹病毒,前者主要感染B淋巴细胞,如感染人和棉顶绒猴的EBV(EpsteinBarr virus);γ2疱疹病毒则感染T淋巴细胞,以感染松鼠猴的疱疹病毒samiri(herpesvirus samiri,HVS)为代表.但后来证实γ2疱疹病毒可同时感染T、B淋巴细胞,而EBV亦可引起T淋巴细胞肿瘤.因此以后发现的γ疱疹病毒则根据其基因结构及基因组中代表性序列的特点,将其归为γ1或γ2亚类.如感染人的卡波氏肉瘤相关病毒(Kaposi's sarcomaassociated herpesvirus,KSHV)或称人疱疹病毒8(human herpesvirus-8,HHV8)就归为γ2[1].     

EB病毒感染与胃癌患者临床病理特征相关性的Meta分析

EB病毒(EPstein-Barr virus, EBV)感染与多种恶性肿瘤的发生相关. 大约10%的胃癌组织细胞中可以检测到EB病毒编码的小RNA(EBERs), 表明EBV感染与部分胃癌的发生相关. 为研究EBV感染与胃癌临床病理特征的相关性, 本研究汇总了EBV相关胃癌的研究论文, 对采用原位杂交方法检测EBV的22篇论文进行了Meta分析. 22篇入选的论文中收集的胃癌病例5475例, 检测到EBV阳性病例411例, EBV阳性率为7.5%. 在EBV阳性胃癌中, 男性检出率为11.1%, 女性检出率为3.0%, 男性检出率相当于女性检出率3倍多; EBV阳性胃癌与阴性胃癌相比具有较少的淋巴结转移; EBV阳性胃癌与癌组织发生部位相关, 并且残胃癌中EBV感染率较高. 依据组织学分型, EBV阳性胃癌弥漫型为8.1%, 肠型为8.0%. 统计分析显示, EBV感染与组织学分型无显著相关性(P＞0.05); 被检标本类型包括存档蜡块和新鲜手术切除组织标本: EBV阳性率分别为7.9%, 6.5%. 统计分析表明, EBV相关胃癌与标本类型无显著相关性(P＞0.05); 在地域分布方面, EBV阳性胃癌检出率美洲为9.4%, 亚洲为6.1%, 欧洲为9.1%, 统计分析显示, EBV相关胃癌与地域分布显著相关(P＜0.05). Meta分析表明, EBV感染仅发生在胃癌组织细胞中, 并且与患者性别、淋巴结转移、肿瘤组织发生部位及地域分布显著相关(P＜0.05), 与患者肿瘤组织学分型、标本类型无显著相关性(P＞0.05). 结果提示, EBV阳性胃癌具有独特的临床病理学特征.     

类风湿性关节炎患者EBV感染情况分析

目的:检测类风湿性关节炎患者血清EBV(Epstein-Barr virus)衣壳抗原IgA抗体(VCA-IgA),分析EBV感染与类风湿性关节炎的相关性.方法:用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测92例确诊为类风湿性关节炎患者和80例体检健康者血清VCA-IgA抗体,分析两组人群EBV VCA-IgA阳性率.结果:类风湿性关节炎患者VCA-IgA抗体阳性率为9.8％(9/92);健康对照组阳性率为2.4％ (2/85)(x2=4.038,P＜0.05).结论:类风湿性关节炎患者血清EBV VCA-IgA抗体检出率明显高于健康对照组,提示部分类风湿性关节炎患者发病与EBV感染有关.     

生物酶与致病性毒的防治

某些致命性病毒病不断威胁人类生命安全,除艾滋病病毒(HIV)和埃博拉病毒(Ebola virus)之外,还有一些病毒如人乳头瘤病毒(HPV)、侵犯脑下的肠病毒以不同方式侵染人体引发病症导致死亡。其中HPV是一种无药可救的性病病毒,继艾滋病之后又出现“世纪绝症”。在美国,该病毒曾迅速蔓延,不论男女都有可能感染HPV,女性染病后甚至可引发子宫颈癌。     

人乳头瘤病毒(HPV)及其诱发子宫颈癌的新进展

子宫颈癌是一类发病率仅次于乳腺癌并严重危害女性生殖系统健康的最常见的妇科恶性肿瘤,在发展中国家,是女性癌症死亡的第一因素。自德国科学家哈拉尔德.楚尔豪森(Harald zur Hausen)因发现人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)导致子宫颈癌而获得2008年度的诺贝尔生理学或医学奖后,全世界广泛认可人乳头瘤病毒(HPV)是引起子宫颈癌的最主要生物学因素。HPV病毒的持续感染在子宫颈癌的发生、发展过程中起了重要作用。本文就HPV病毒的生物学结构、女性生殖道HPV病毒的感染途径以及HPV病毒诱发子宫颈癌机制的最近的研究进展进行扼要综述。     

Epstein-Barr病毒相关T/NK细胞淋巴瘤与B细胞淋巴瘤的临床分析

Epstein-Barr病毒(Epstein-Barr virus,EBV)是可导致人类感染的淋巴滤泡病毒,感染非常普遍。本研究通过对2013年1月-2016年12月于复旦大学附属华东医院就诊并确诊为淋巴瘤且伴有EBV感染的49例患者的临床资料进行回顾性分析,探讨EBV相关淋巴瘤患者的临床特点及生存情况。结果显示,49例EBV相关淋巴瘤患者中,18例为B细胞淋巴瘤,31例为T/NK细胞淋巴瘤。EBV相关B细胞淋巴瘤与T/NK细胞淋巴瘤患者之间白细胞、血小板、丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、乳酸脱氢酶、铁蛋白、纤维蛋白原、红细胞沉降率、C反应蛋白的差异有统计学意义(P<0.05)。中位随访5.0个月,49例患者的1个月、6个月、1年、3年生存率分别为 84.4%、59.8%、53.2%、40.3%。结果表明,与EBV相关B细胞淋巴瘤患者相比,EBV相关T/NK细胞淋巴瘤患者的肝功能损伤严重,更易合并噬血细胞综合征,生存期更短,但生存期差异无统计学意义。     

人疱疹病毒6 型感染与药物超敏综合征

人类疱疹病毒6型(human herpesvirus 6,HHV-6)是1986年由美国癌症中心首先从淋巴增生及获得性免疫缺陷综合征(acquired immunodeficiencysyndrome,AIDS)患者外周血单个核细胞中分离得到的一组嗜人淋巴细胞的双链DNA病毒,与人类疱疹病毒7型(human herpesvirus 7,HHV-7)及人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)同属于疱疹病毒B亚科.     

原发性干燥综合征患者外周血EB病毒标志物检测及意义

目的:探讨原发性干燥综合征(primary Sjfigren's syndrome,pSS)患者外周血EB病毒(Epstein Barr virus,EBV)标志物的检测及意义.方法:应用实时荧光定量PCR技术检测29例原发性干燥综合征患者和44例正常对照组外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)EBV DNA,酶联免疫吸附法(ELISA)检测患者和正常对照血清EBV衣壳抗原(viral capsid antigen,VCA)特异性IgM、IgG抗体以及EBV早期抗原(early antigen,EA)IgG抗体.结果:pSS患者组及正常对照组EBV DNA拷贝数分别为26.76±36.00 copiesd/μg DNA和7.41±12.02 copies/μg DNA,统计学分析表明pSS患者组EBV拷贝数明显高于正常对照组(r=3.603,P＜0.01).患者组血清VCA-IgM和EA-IgG阳性率分别为20.69%(6/29)和62.07%(18/29),正常对照组则均为2.27(1/44),两两比较均明显高于正常对照组(P＜0.05,P＜0.01).患者组血清VCA-IgM水平与正常对照组比较无显著性差异,而EA-IgG抗体水平明显高于正常对组(P＜0.01).结论:原发性干燥综合征患者存在EBV的激活感染,EBV激活感染是导致患者免疫功能异常的重要原因,潜伏EBV的激活与干燥综合征的发病有关.     

LMP-1在胃癌和相应癌旁组织中的表达

目的探讨Epstein-Barr virus(EBV)感染与胃癌发生发展的关系。方法应用免疫组化SP法检测EB病毒潜伏感染膜蛋白-1(LMP-1)在97例胃癌组织及89例相应癌旁组织中表达。结果97例胃癌组织中30例LMP-1蛋白表达阳性,阳性率为30.9%,EBV阳性率与患者性别、浸润深度、淋巴结转移、组织学分型和临床分期之间无明显关系(P>0.05);89例相应癌旁组织中33例检测到EBV LMP-1的表达,胃癌组织及相应癌旁组织EBV阳性表达之间有显著相关性(P=0.000)。结论EBV感染与胃癌的发生有一定的相关性。     

HPV-16、EB病毒对细胞增殖的影响及与子宫颈癌发病的关系

目的 了解宫颈癌患者人乳头瘤病毒16（HPV 16）、EB病毒（EBV）感染情况,探讨HPV-16、EBV对细胞核增殖性抗原（PCNA）表达的影响及在子宫颈癌发病中的意义。方法 免疫组织化学SP法检测59例宫颈癌和20例非癌性子宫颈上皮细胞中HPV-16、EBV蛋白表达和PCNA表达的情况,并分析它们的表达与病理参数的关系。结果 子宫颈癌和非癌性子宫颈上皮细胞中HPV-16、EBV及PCNA的阳性表达率依次分别为69．49％、57．63％及77．97％和30％、25％及15％;子宫颈癌和非癌性子宫颈上皮细胞中HPV-16、EBV的共同阳性表达率分别为35．59％和0％,子宫颈癌中HPV-16、EBV及PCNA的阳性表达率均高于非癌性子宫颈上皮（P〈0．05）。病理Ⅰ级、Ⅱ级和Ⅲ级子宫颈癌中HPV-16、EBV、PCNA的阳性表达率分别为65．00％、55．00％、60．00％,69．57％、60．87％、82．61％和75．OO％、56．25％、93．75％。各级子宫颈癌间HPV-16、EBV的阳性表达率差异无显著性,但PCNA的表达率随病理分级的增加显著上升（P〈0．05）。不同期别子宫颈癌问HPV-16、EBV及PCNA的阳性表达率差异无显著性。HPV-16阳性与阴性组子宫颈上皮PCNA的阳性表达率分别为82．98％（39／47）与43．75％（14／32）,两者差异有显著性（P〈0．05）。EBV阳性及阴性组子宫颈上皮PCNA的阳性表达率分别为71．79％（28／39）及42．50％（17／40）,两者差异有显著性（P〈0．05）。HPV-16和EBV共同阳性表达的21例子宫颈癌PCNA阳性表达率均为100％。结论 HPV-16、EBV通过增加PCNA表达的促细胞增生作用可能是子宫颈癌的发生机制之一。     

Epstein-Barr病毒相关淋巴瘤的研究进展

Epstein-Barr病毒（Epstein-Barr virus,EBV）是第1个被发现与人类肿瘤发生相关的病毒,且越来越多的数据表明其感染与某些淋巴瘤的发生发展、治疗及预后密切相关。近年来免疫治疗手段发展迅速,但EBV阳性淋巴瘤的治疗目前主要仍以放化疗为基础,结合抗病毒药物。因此,加强EBV及其相关淋巴瘤的研究,寻找有效预防或治疗EBV感染的方法,将有望改善EBV阳性淋巴瘤患者的预后。