3-氰基吡啶水合酶产生菌的筛选及其酶形成条件

应用富集培养和梯度底物浓度定向筛选技术,从长期被腈化物污染的土壤中筛选到一株产 3-氰基吡啶水合酶(3-cyanopyridine hydratase)活性较高的马红球菌(Rhodococcus e-qui)SHB-121.研究了该菌3-氰基吡啶水合酶的最适形成条件.在最适条件下,酶的比活力达5.3u/mg干细胞,比在初筛条件下的酶活力提高95倍,而在其细胞内共存的尼克酰胺(烟酰胺)水解酶活力很低.     

3-氰基吡啶水合酶的纯化及性质

马红球菌ＳＨＢ－１２１胞内３－氰基吡啶水合酶经硫酸铵分级沉淀、ＤＥＡＥ－ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ ＤＥ５２和羟基磷灰石柱层析并经过Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－２５处理,得到了聚丙烯酰胺凝胶电泳均一的３－氰基吡啶水合酶,纯化了３１倍。该酶由一条肽链组成,棋 分子量为３０ｋＤ,等电点４．１,３－氰基吡啶水合酶能催化３－氰基吡啶水合生成尼克酰胺。酶反应最适ＰＨ为８．０,最适温度为３０℃,Ａｇ＾＋、Ｈｇ＾２＋、Ｃｕ＾     

3-氰基吡啶水合酶的反应条件及影响因子

研究了芳腈水合酶催化水合3-氰基吡啶生成尼克酰胺的反应条件及影响因子.酶反应的最适pH为8.0,最适温度为25℃.酶在pH8.5于25℃保温4小时或在25—30℃于pH8.0保温3小时是稳定的.反应液中加入Fe~(3 )(1.5 mmol/L)可使酶活力增加 50%,而加入NH_4~ (300 mmol/L)则使酶活降低了67%.Ag~ 和 Hg(2 )”强烈地抑制酶反应活性,在浓度均为 5mmol/L时,抑制率分别为99.7%和100%.NaCN(50 mmol/L)和苯甲腈(100 mmol/L)对酶活性的抑制率分别为78%和85%.该酶作用于 3-氰基吡啶的Km为62.5 mmol/L,V_(max)为85.8 μmol·min~(-1)·mg~(-1).     

3-氰基吡啶水合酶的反应条件及影响因子

研究了芳腈水合酶催化水合3-氰基吡啶生成尼克酰胺的反应条件及影响因子.酶反应的最适pH为8.0,最适温度为25℃.酶在pH8.5于25℃保温4小时或在25—30℃于pH8.0保温3小时是稳定的.反应液中加入Fe~(3+)(1.5 mmol/L)可使酶活力增加 50%,而加入NH_4~+(300 mmol/L)则使酶活降低了67%.Ag~+和 Hg(2+)”强烈地抑制酶反应活性,在浓度均为 5mmol/L时,抑制率分别为99.7%和100%.NaCN(50 mmol/L)和苯甲腈(100 mmol/L)对酶活性的抑制率分别为78%和85%.该酶作用于 3-氰基吡啶的Km为62.5 mmol/L,V_(max)为85.8 μmol·min~(-1)·mg~(-1).     

3-氰基吡啶水合酶的纯化及性质

马红球菌(Rhodococcus equi)SHB-121胞内3-氰基吡啶水合酶经硫酸铵分级沉淀、DEAE-cellulose DE52和羟基磷灰石柱层析并经过Sephadex G-25处理,得到了聚丙烯酰胺凝胶电泳均一的3-氰基吡啶水合酶,纯化了31倍。该酶由一条肽链组成,其分子量为30kD,等电点为4.1。3-氰基吡啶水合酶能催化3-氰基吡啶水合生成尼克酰胺。酶反应最适pH为8.0,最适温度为30℃。Ag~+、Hg~(2+)、Cu~(2+)及NH_4~+对酶活力有强烈抑制作用。当以3-氰基吡啶为底物时,其K_m为0.1mol/L。NaCN为该酶反竞争性抑制剂,其K_I为5mmol/L。     

腈水合酶产生菌的培养及其酶活性的比较

从腈污染的土样中筛选获得,株腈水合酶活性较高的细菌,分属于棒状杆菌(Cerynebactertum sp.)、节杆菌(Arthrobacter sp.)和克雷伯氏菌(Klebsiella sp.)其中具有腈水合酶活性的克氏杆菌属菌为首次分离到。对这些菌株适宜培养条件及酶形成诱导特性的研究表明,棒状杆菌和节杆菌的腈水合酶为诱导酶,而克氏杆菌的酶为组成酶。前二个属的细菌完整细胞腈水合酶活性相近,均较后一属细菌高约10倍。     

腈水合酶产生菌的分离筛选及其特性研究

本研究进行了产腈水合酶菌种的分离筛选,对菌株ＳＤ—１６进行了诱变,并对ＳＤ—１６的生长、产酶条件以及腈水合酶的反应条件进行了研究。ＳＤ—１６经鉴定确定为微球菌Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓｓｐ．     

一种3-氰基吡啶水解酶产生菌的高通量筛选策略及应用

利用改进的羟肟酸铁分光光度比色法建立了一种简单、快速、高通量的腈水解酶筛选方法.应用该方法从土壤中筛选获得1株具有3-氰基吡啶水解酶活性的菌株CCZU10 -1,经16S rDNA序列分析,鉴定该菌为红球菌属Rhodococcus sp.;同时确定了最适反应温度、pH和金属离子添加剂分别为30℃、7.0和Ca2+ (0.1 mmol/L).在最适催化反应条件下,催化转化50 mmol/L烟腈36 h,烟酸的产率可达到93.5％.     

一株腈水合酶产生菌的培养及酶转化试验

诺卡氏菌KY1023能利用乙腈作为生长的碳源和氮源.最适培养条件为(g·L-1)葡萄糖10,醇母膏20,玉米浆10,诱导剂10,MgSO4·7H2O 0.5,K2HPO40.5,KH2PO40.5,pH7.0,菌株在28℃、250rpm条件下培养24h,丙烯酰胺酶活力达到1330μ/ml.休眠细胞在3h以内,可积累丙烯酰胺浓度达到250g·L-1,乙酰胺浓度达到400g·L-1.     

一类生物催化剂——氰基耐受型腈水合酶

氰基耐受型腈水合酶是一类生物催化剂。与普通腈水合酶相比,它能够耐受体系中较高浓度的氰基而不受抑制,从而为α-羟(氨)基酰胺的工业化合成开辟了崭新途径。研究腈水合酶的氰基耐受性机理及提高其耐受能力是目前需要解决的关键问题。综述了腈水合酶受氰基抑制的机制,氰基耐受型腈水合酶的发现以及其在蛋氨酸和2-羟基异丁酰胺生物合成中的应用。同时,对今后氰基耐受型腈水合酶基础、应用研究的思路进行了探讨。     

几丁质酶产生菌的筛选及产酶条件的研究*

从301株几丁质降解菌包括细菌、放线菌和真菌中,筛选出一株产几丁质酶活力较高的链霉菌A048(Streptomycessp．A048)。其产酶的适宜条件是,培养温度30℃,培养基pH7．0～7．5,碳源几丁质,氮源NH4NO3,体积溶氧系数kd值为1．56×10-6mol／(mL·min·atm),振荡培养120h,产酶可达15．1U／mL。     

菊粉酶高活力菌株的筛选及其产酶研究

利用透明圈法从３０个菊粉酶活力菌株中筛选出两个高活力菌株Ｈ_８和Ｍ_８９,两菌株均鉴定为黑曲霉。Ｈ_８和Ｍ_８９产酶的最佳碳源是菊粉,Ｈ_８最适氮源是（ＮＨ_４）_２ＳＯ_４,Ｍ_８９以草酸胺最好,（ＮＨ_４）_２ＳＯ_４仅次于草酸胺。两菌株产酶的环境条件有一定差异,Ｈ     

Biotransformation of 3-substituted methyl (R,S)-4-cyanobutanoates with nitrile- and amide-converting biocatalysts

Whole cells of Rhodococcus equi A4 chemoselectively hydrolyzed methyl (R,S)-3-benzoyloxy-4-cyanobutanoate and methyl (R,S)-3-benzyloxy-4-cyanobutanoate into monomethyl (R,S)-3-benzoyloxyglutarate and monomethyl (R,S)-3-benzyloxyglutarate, respectively. The intermediates of the biotransformations were the corresponding amides which were also obtained using the purified nitrile hydratase from the same microorganism.     

根结线虫天敌真菌及其高效菌株筛选

本文报道捕食和寄生南方根结线虫(Meloidogyne incognita)和爪哇根结线虫(M.javanica)的天敌真菌6属14种。其中Arthrobotrys candida A.cladodes var.macroides,A.musiformis,Monacrosporium cionopagum,M.doedycoides,Drechmeria coniospora,Harposporium crassum,H.lilliputanum,Myzocytium humicola和Verticillum coccospora为我国新纪录种。室内测定结果表明:GACA 1B(Arthrobotrys oligospora)、GACM 102(Monacrosporium doedycoides)菌株对南方根结线虫和爪哇根结线虫均具极高的捕食率,接种线虫7天后,捕食率达98%以上,接种20天后,捕食率均达100%。     

产羧肽酶菌株的筛选及其产酶特性的研究*

从土壤中分离到28株产蛋白酶菌株,用其粗酶液水解多肽并经氨基酸自动分析仪测定产物中游离氨基酸的含量和种类,从中筛选到一株产羧肽酶的菌株。对该菌株的菌落和菌体形态进行观察,确定其属于曲霉菌属。该菌株在发酵至第48h时,发酵液中羧肽酶活性达到最大。此时发酵液pH值为7.46,菌体已处于衰败期,说明该酶的合成方式为延迟合成型。     

乳链菌肽高产菌株的选育及其基因定位

以乳酸乳酸球菌7962为原始菌株,用紫外线、LiCl、(60)~Co及8-MOP+NUV等多种理化诱变剂对其进行诱变处理,获得一株乳链菌肽高产突变株AL2。其效价稳定在2300～2500Iu/ml。经DNA杂交证实,编码乳链菌肽的前体基因位于染色体上,其遗传性状是稳定的。毒理试验表明AL2及其产物属于实际无毒类物质。     

一株耐高温SOD产生菌的筛选及酶学特性

超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase简称SOD)是生物体防御氧化损伤的金属酶。具有治疗炎症、抗辐射损伤、防癌、抗衰老等广泛药用前景。另外在植物抗逆和生物固氮等方面也有重要作用。自1969年McCord和Fridovich发现该酶以来,人们已从多种动植物和微生物中分离了此酶。SOD的基因工程也取得了令人瞩目的成就。相对而言,动植物Cu、Zn-SOD的研究较活跃,而微生物SOD,特别是Fe-SOD的研究较薄弱。本文报道耐高温SOD产生菌的筛选、鉴定结果,并对酶的稳定性和酶学特性作了研究。     

产碱性纤维素酶菌株的选育和酶合成基本特性

芽孢杆菌x－6菌株经甲基磺酸乙酯（EMS）和紫外线（UV）复会诱变,从其万古霉素（Vm）抗性突变体中选育获得一突变株EV23,所产生的碱性核甲基纤维素酶（CMCase）酶活力由原来的0．84u／ml提高到3.53u／ml。EV23菌株所产该酶基本为组成性地合成纤维素酶,酶合成明显表现出抗降解物阻遏的特点,以葡萄糖为碳源培养,4％浓度时酶合成水平最高。酶合成效率受菌体生长速率影响较大。在高浓度易代谢基质和三羧酸循环中间物存在下,酶合成将受到一定程度的阻遏。酶合成还与能量代谢有关,探讨了外源ATP、cAMP对