一种白僵菌代谢产物中生物活性物质的研究 Ⅰ.具有清除自由基的活性物质的分离和制备

通过对白僵菌Beauveriasp.的液体培养及生物活性测定,发现该菌代谢产物具有较强的清除自由基的活性,我们用甲醇成功地提取出该活性成分,同时用色谱等方法对该活性成分进行了分离和制备,并用高压液相色谱法和DPPH薄层试验对其纯度及活性进行了检验,得到了具消除自由基活性的纯化合物P-24-3。     

一种白僵菌代谢产物中生物活性物质的研究 Ⅰ.具有清除自由基的活性物质的分离和制备

通过对白僵菌 Beauveria sp. 的液体培养及生物活性测定,发现该菌代谢产物具有较强的清除自由基的活性,我们用甲醇成功地提取出该活性成分,同时用色谱等方法对该活性成分进行了分离和制备,并用高压液相色谱法和DPPH薄层试验对其纯度及活性进行了检验,得到了具消除自由基活性的纯化合物：P-24-3。     

一种被毛孢(Hirsutella sp.)培养液中自由基清除剂的分析、分离和制备

[目的]在一次对虫生真菌代谢物进行大规模的清除自由基活性物质筛选中,发现一种被毛孢(Hirsutella sp.)菌株RCEF0881发酵液中存在有较强的清除自由基活性物质.本研究目的是初步搞清这些活性成分的具体组成,并制备出一定量的纯品用于进一步的结构鉴定.[方法]用有机溶剂法提取活性成分;用二苯基苦基苯肼自由基(DPPH)酶标仪法和薄层色谱法进行活性测定;用高分辨液质联用方法进行活性成分初步分析和鉴定;用反相制备色谱法制备活性组分.[结果]提取实验结果表明具清除自由基活性的物质能较好地被乙酸乙酯提取出来;液相色谱-质谱-活性测定分析表明提取物中活性组分的可能分子式分别为C7H6O4、C8H8O3和C12H14N2O.结合色谱特性、紫外光谱特征、质谱碎片和数据库查询可初步推断它们分别为二羟基苯甲酸、羟基甲基苯甲酸和生物碱类物质,但具体结构还有待于进一步确认.从高效液相色谱和质谱离子流的峰面积可知上述3种活性物质中C12H14N2O的含量最高.本研究成功地用反相制备色谱制备出该天然活性组分的纯品.该3种清除自由基活性物质都是首次发现存在于虫生真菌的代谢物中.     

尼日利亚螫毛果(Cnestis ferruginca)中一种具有清除自由基的活性化合物的分离鉴定

用二苯基苦基苯肼自由基薄层实验法（DPPH-TLC-ASSAY）,从尼日利亚螫毛果（Cnestis ferruginca)植物的甲醇提取物中发现了一种具有很强的清除自由基活性的物质;用柱色谱及反相制备柱色谱（RP-LPPLC）,制备出了该活性物质的纯品;用质谱（HR ESI-MS）,核磁共振氢谱（^1H0,碳谱（^13C,DEPT)。紫外光谱及化学方法对该物质进行了结构鉴定,鉴定结果为对苯酚基-6-O-反式咖啡酸基-β-D-吡喃葡萄糖甙。     

尼日利亚螫毛果(Cnestis ferruginca)中一种具有清除自由基的活性化合物的分离鉴定

用二苯基苦基苯肼自由基薄层实验法(DPPH-TLC-ASSAY),从尼日利亚螫毛果(Cnestisferruginca)植物的甲醇提取物中发现了一种具有很强的清除自由基活性的物质;用柱色谱及反相制备柱色谱(RP-LPPLC),制备出了该活性物质的纯品;用质谱(HRESI-MS)、核磁共振氢谱(¹H)、碳谱(¹³C、DEPT)、紫外光谱及化学方法对该物质进行了结构鉴定,鉴定结果为对苯酚基-6-O-反式咖啡酸基-β-D-吡喃葡萄糖甙.     

一种新型肿瘤细胞抑制蛋白的分离纯化

介绍了从健康牛骨髓中分离到一种具有抑制肿瘤活性的糖蛋白,并对该糖蛋白进行了纯化,获得了电泳纯和层纯的纯品,测得该糖蛋白Ｎ末端为丙氨酸残基,用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ法测得该糖蛋白的表观分子量为６５ｋＤ,氨基酸组成分析显示其为一种富含丝氨酸的蛋白质,生物活性测定表明,该糖蛋白纯品对小白鼠白血病Ｐ３８８细胞和人慢粒白血病ＨＬ－６９细胞株的增殖均有抑制作用,有关该糖蛋白的糖含量的定量测定及蛋白质一级结构分析正在     

怀山药醇提取物抗DPPH自由基活性研究

将怀山药乙醇提取物采用溶剂萃取的方法,分成极性不同的五个部分,并首次用DPPH(2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl)方法测定各部分的抗自由基活性,发现乙酸乙酯萃取部分活性最强,氯仿萃取部分次之,再其次是正丁醇和水溶性部分。乙酸乙酯和氯仿萃取部分较强的抗自由基活性主要归因于其中所含的多酚类成分。同时利用薄层层析(TLC)、紫外光谱(UV)、^13C核磁共振(NMR)技术及显色反应对酚性成分进行了定性检验,并用Folin-Denis法测定了各萃取部位中酚性成分含量,发现抗自由基活性与萃取物中多酚性成分含量有一定的相关性。因而在评价怀山药质量时,其中所含的酚性成分不应忽视。     

黄芪有效成分对氧自由基清除作用的ESR研究

用电子自旋共振技术研究了黄芪总黄酮(TFA)、黄芪总皂甙(TSA)和黄芪总多糖(TPA)对次黄嘌呤／黄嘌呤氧化酶体系产生的超氧阴离子自由基和H₂O₂－Fe²⁺体系产生的羟自由基的清除作用．结果表明,这3种成分均有清除氧自由基的作用;对超氧阴离子自由基的清除效能大于对羟自由基的清除作用;其作用强度依次为TFA＞TSA＞TPA．结果提示清除氧自由基可能是黄芪抗衰老的主要机理之一,TFA和TSA是黄芪抗氧化作用的主要药理活性成分．     

尾叶远志抗氧化活性研究

采自贵州兴义的尾叶远志(Polygala caudata Rehd.et Wils.)根,经乙醇提取,再用不同溶剂萃取和柱层析分离,得到了12个不同的组分.用比色法研究了各组分还原三价铁离子及清除脂性自由基DPPH能力,采用化学发光法观察各组分清除羟自由基和超氧阴离子的活性.研究发现,尾叶远志各组分均有一定的清除自由基作用,并且其活性成分可能主要集中在PC-BuOH组分.     

一种被毛孢菌丝体中抗肿瘤活性组分的分离纯化和液质联用分析

在一次多菌株的生物活性测定中,发现一株被毛孢菌株RCEF0851菌丝体提取物具有较强的抗肿瘤CHO细胞的活性。本研究用不同溶剂对活性组分进行了提取试验,发现乙酸乙酯能最大程度地提取出该活性成分。分离试验表明该提取物较适于用反相柱Synergi Hydro进行分离。活性指导下的分离得到一活性组分的纯品Hh-1。该组分在40μg/mL时对CHO细胞的抑制率达到83.61%。高分辨质谱分析表明该活性化合物的可能分子式是C30H22O10。该分子为首次从虫生真菌中发现。     

火绒草抗氧化活性成分及其结构分析

通过测定火绒草(Leontopodium leontopodioides)醇提物不同部位的总还原力,羟自由基(.OH)和亚硝酸盐清除活性,表明乙酸乙酯部位能有效浓缩抗氧化的活性物质,具有较强的还原力,以及清除羟基自由基和亚硝酸盐的活性。进一步以火绒草抗氧化活性成分为导向,对醇提物的乙酸乙酯部位进行了硅胶柱层析和制备薄层层析,得到了丰度较高的一个单体化合物,经紫外、红外、氢谱和碳谱分析,推测该化合物的结构为对羟基苯乙酮。     

非洲山毛豆的主要杀虫活性成分研究

对非洲山毛豆（Ｔｅｐｈｒｏｓｉａ ｖｏｇｅｌｉｉ）的主要杀虫活性成分进行了研究。用快速柱层析、薄层层析和液相色谱等对氯仿提取物进行分离提纯,通过红外光谱法、质谱及气－质联用系统分析、核磁共振波谱等分析手段进行分子结构鉴定。结果表明,其主要杀虫活性成分为鱼藤酮、鱼藤醇酮、鱼藤酚酮等鱼藤酮类化合物。     

桦褐孔菌活性物质的提取工艺及体外抗糖尿病活性

对桦褐孔菌活性物质的提取工艺及其体外抗糖尿病活性进行研究。桦褐孔菌子实体用乙醇浸提后,乙醇粗提物用不同有机溶剂萃取,醇提残渣再以热水浸提,用标准曲线法测定活性组分中活性成分的含量,并检测活性物质对羟基自由基(·OH)、超氧阴离子自由基(O2-·)的清除效果以及对关键糖代谢酶α-淀粉酶、α-葡萄糖苷酶的抑制作用。结果表明:4种活性组分(乙酸乙酯相、正丁醇相、水相和粗多糖)对羟基自由基(·OH)和超氧阴离子自由基(O2-·)都有较强的清除作用,其中乙酸乙酯组分的活性最高,乙醇粗提物萃取组分对α-淀粉酶有抑制活性,而粗多糖对α-葡萄糖苷酶有抑制作用;桦褐孔菌具有抗氧化和抗糖尿病活性,其活性与活性物质种类及其含量具有相关性。     

酵母类金属硫蛋白抗氧化作用的研究

酿酒酵母（Saccharomycescerevisiae）YBD101菌株的类金属硫蛋白能清除羟基自由基。含类金属硫蛋白的活性的干酵母饲喂7个半月龄昆明小鼠,可提高肝中SOD活性（p＜0．01）,降低LPO含量（p＜0．01）,对脑中MAO－B活性有一定抑制作用（p＜0．01）,对肝中MAO－B活性几乎不抑制。含类Cu－MT活性干酵母对上述衰老有关三项生化指标的作用,与免肝Zn-MT纯品效果一致。提示酵母菌类Cu－MT在预防衰老和保护人体健康方面有良好的应用前景。     

过氧化心肌线粒体产生的脂类自由基及（－）－EGCG的抑制作用

本文利用ＥＳＲ技术研究了心肌线粒体酶修饰下的脂质过氧化和脂类自由基,以及（－）－ＥＧＣＧ的抑制作用。结果表明：４－ＰＯＢＮ能捕集ｌｉｐｏｘｙｇｅｎｇｓｅ诱发心肌线粒体产生的自由基,得到６条线谱的脂类自由基和４条线谱捕集物,（－）－ＥＧＣＧ对该体系中使用的１ｉｐｏｘｙｅｎａｓｅ活性无影响,对所产生的自由基有明显的清除作用,并呈量效关系。对脂质过氧化的抑制作用,在本试验浓度范围内随浓度增加变化不大,最大抑制率约２０％。     

天竺葵花清除自由基作用的研究

用化学发光法研究了天竺葵花粗担液对超氧阴离子自由基（Ｏ２）＾＝和羟自由基（ＯＨ）的清除作用,用分光不镀法研究了它对１,１－二苯基－２－苦肼基自由基（ＤＰＰＨ０的清除作用。结果表明,天竺葵花具有很强的清除自由基活性。其粗提物清除Ｏ２＾－分别为３．５μｇ／ｍｌ（红花）,３．０μｇ／ｍｌ（粉花）,１．６μｇ／ｍｌ（浅粉花）,与茶多酚（ＩＣ５０＝１．１μｇ／ｍｌ）相近,清除ＯＨ的ＩＣ５０分别为５．７μｇ／     

桦褐孔菌发酵及其提取物清除自由基活性的研究

用1,1-diphenyl-2-picryhydrazyl(DPPH)酶标仪法,对桦褐孔菌发酵液的甲醇提取物的自由基清除率进行了测定,发现该提取物具有较强的清除自由基的活性;进一步用DPPH薄层试验,结果发现该菌的CHCL3提取物中主要含有两个具清除自由基活性的组分.在此基础上,以清除自由基活性为指标,对桦褐孔菌液体发酵条件进行优化,发现当培养条件为:葡萄糖20g/L、甘油6mL/L、蛋白胨15g/L、CuSO4 0.005g/L、酪氨酸0.05g/L;种龄为7d、装液量为50mL/250mL、转速为180r/min、接种量为10%时,桦褐孔菌发酵液提取物的清除自由基活性最强.     

过氧化心肌线粒体产生的脂类自由基及（—）—EGCG的抑制…

本文利用ＥＳＲ技术研究了心肌线粒体酶修饰下的脂过氧化和脂类自由基,以及（－）－ＥＧＣＧ的抑制作用,结果表明：４－ＰＯＢＮ能捕集ｌｉｐｏｘｙｇｅｎａｓｅ诱发心肌线粒体产生的自由基,得到６条线谱的脂类自由基和４条线谱捕集物,（－）－ＥＧＣＧ对该本系中使用的ｌｉｐｏｘｙｇｅｎａｓｅ活性无影响,对所产生有明显的消除作用,并呈量效关系,对脂质过氧化的抑制作用,在本试验浓度范围内随浓度增加变化不大,最大抑制率     

乌奴龙胆乙醇提取物不同极性部位体外抗氧化性研究

本文以BHT和VC为对照,采用分光光度法,通过四种不同体系对乌奴龙胆乙醇提取物的各个极性部位体外抗氧化活性进行比较研究。结果表明,各极性部位对DPPH自由基、羟基自由基和超氧阴离子自由基均有一定的清除作用,也具有一定的还原能力。其中氯仿部位、乙酸乙酯部位效果最佳,其总还原力和对DPPH自由基的清除作用均优于BHT,本实验结果为扩展乌奴龙胆的应用范围和进一步研究其抗氧化活性成分及新型天然抗氧化剂的开发提供了理论依据。     

苦碟子注射液抗氧化成分的分离与活性评价研究

苦碟子注射液经盐酸酸化,HPD大孔树脂柱分离,得到总酚酸部分,以抗坏血酸(Vc)做为阳性对照,利用清除二苯代苦味酰基(DPPH)自由基法和铁离子还原/抗氧化能力(FRAP)法对其进行抗氧化活性评价,研究结果表明,总酚酸部分具有较好的抗氧化能力。为此,我们利用大孔树脂柱色谱、MDS-5反相制备色谱对总酚酸进一步分离,共获得6个酚酸类成分。采用上述活性评价的方法对所获得的6个成分进行了抗氧化活性评价,发现除芹菜素-7-O-β-D葡萄糖醛酸苷外,其它5个酚酸类成分均具有很强的抗氧化活性,其清除DPPH自由基能力及总抗氧化能力好于或与阳性对照Vc相当。