蝎毒中枢镇痛机制的初步探讨

目的：研究BmK蝎毒是能过何种受体实现其中枢镇痛作用的;外侧隔核是否是BmK蝎毒产生中枢镇痛作用的重要部位之一。方法：用辐射热一甩尾法测定痛阈,用玻璃微电极记录束旁核的单位放电;通过不锈钢套管向侧脑室和外侧隔核内微量注射0.01％BmK蝎毒。结果：向大鼠侧脑室2μl0.01%蝎毒可明显升高痛阂。该效应可被侧脑室注射2μl0.25%纳洛酮完全翻转,向隔核内注射0.5μl0.01%BmK蝎毒,分别对束帝核中的71％（15／21）痛兴奋单位和83％（5／6）痛抑制单位对痛刺激的反应减北,而对痛无关单位的电活动夫明显影响。结论：BmK蝎毒的中枢镇痛作用可能主要是通过吗啡受体实现的;隔核是BmK蝎毒产生中枢镇痛作用的重要部位之一。     

蝎毒抗癫痫作用与微生态调节剂的关系

:一次颈部皮下给予海人酸 (Kainic acid,KA ,10 m g/ kg)诱发 SD大鼠出现急性癫痫发作后 ,将实验组动物随机分为 3组 ,每天灌胃分别给予生理盐水、微生态调节剂 [活菌数 4× 10 9个 (0 .4ml)只 ]和蝎毒粗提液 (SV,10 0 mg/ kg)。 10天后再次给予同样剂量的 KA检测癫痫敏感性 ,行为结果经统计学处理后表明 ,两者均可明显抑制动物癫痫敏感性的形成。免疫组化结果表明 ,两者均可防止海马硬化的形成。本工作进一步探讨了微生态调节剂与蝎毒抗癫痫作用的关系     

蝎毒抗癌组分SVⅡ分离法的优化研究

目的比较三种柱径的分子筛G-50凝胶层析柱分离东亚钳蝎蝎毒的柱效;并对分离所得组分作MTT（酶反应比色法）抗肿瘤活性作用研究,为从中研制和开发出高效、低毒的新型抗癌特效药筛选出目标组分。方法（1）采用三种规格的分子筛层析柱分离蝎毒;（2）HPLC色谱分析比较各组分的指纹图谱;（3）MTT法观察不同浓度（1、10、100mg／L）的蝎毒及其组分对四种肿瘤细胞（HL-60、A549、K562／ADR、K562／S等）的毒性作用。结果经过分子筛柱层析,可从蝎毒（Scorpion venom,SV）获取三个组分SVⅠ、SVⅡ、SVⅢ;经HPLC色谱分析,各组分明显含有四种以上单体成分;MTT法研究表明,SVⅡ对四种肿瘤细胞的细胞毒性较原毒强,剂量-效应关系较好,而SVⅠ、SVⅢ对四种肿瘤细胞抑制作用不明显。结论（1）利用大柱径的层析柱分离蝎毒的柱效较高;（2）组分SVⅡ是蝎毒抗癌的目标组分,且其对耐药细胞株（K562／ADR）的抑制作用比阳性对照组强,有待进一步的分离纯化,筛选出色谱纯的抗癌活性成分（多肽单体）。     

几种新的蝎毒神经毒素的纯化及它们某些性质和结构的初步研究

经Sephadex G-50和Sp-Sephadex C-25两次柱层析,从山东马氏钳蝎(Buthus martensi Karsch)粗毒中分离纯化得到8种哺乳动物神经毒(BmK Ⅰ-Ⅷ)和一种甲壳动物神经毒(CT)。纯度鉴定表明它们在聚丙烯酰胺凝胶电泳和等电聚焦电泳时均呈现一条主带。除BmK Ⅳ外,其等电点在7.9—9.1之间,但BmK Ⅳ呈酸性,其等电点为5.3。SDS-PAGE测得它们的分子量为6000—8000。哺乳动物神经毒的氨基酸组成中Asp的含量较多,而不含Met,CT的氨基酸组成中Gly的含量高于Asp,且含Met,但缺乏Ile和Val。 Bmk Ⅲ和Bmk Ⅳ的N端部分序列比较,发现N端序列具有较强的保守性,15个残基中相同的残基占60％,各组份的CD谱显示它们的主链构象很相似,主要二级结构是β折迭,不含或含较少α-螺旋。     

基于基因芯片蝎毒多肽提取物对H22肝癌抑制作用的研究

目的:通过表达谱基因芯片研究蝎毒多肽提取物PESV对H22肝癌基因表达的影响,探讨其可能的药物作用机理.方法:建立H22肝癌皮下荷瘤模型,将60只昆明小鼠随机分为模型组、PESV组、Gemcitabine和TNP-40组,每组15只;无菌摘取皮下肿瘤组织,提取总RNA,通过反转录方法制备cDNA荧光探针,进行芯片杂交,然后对芯片进行图像扫描,最后用Imagene4.0软件包对荧光信号进行分析.结果:蝎毒多肽提取物PESV作用于荷瘤小鼠后,有127个基因表达下调,433个基因表达明显上调,其中35个基因与抗肿瘤血管生成药物TNP-470处理组下调基因一致,有40个与化疗药物Gemcitabine处理组下调基因一致.结论:蝎毒多肽提取物PESV可能同时具有细胞毒作用和抗血管生成作用双重作用,有望成为一种极具前景的肿瘤治疗药物.     

蝎毒抗癫痫反复发作的GFAP基因调控机制

已有的资料证实红藻氨酸 (Ｋａｉｎｉｃａｃｉｄ ,ＫＡ)癫痫模型具有癫痫发作敏感性长期增强的特征 ,伴有海马结构胶质原纤维酸性蛋白 (ｇｌｉａｌｆｉｂｒｉｌｌａｒｙａｃｉｄｐｒｏｔｅｉｎ ,ＧＦＡＰ)的大量表达 ,其为海马结构反应性胶质化的神经病理学基础 ;用反义ＧＦＡＰｍＲＮＡ转染的星形胶质细胞的细胞株内不再表达ＧＦＡＰ。新近 ,我们从ＫＡ癫痫大鼠海马结构中发现调控ＧＦＡＰ基因表达的序列特异的ＤＮＡ结合蛋白。我们从前的工作已证实蝎毒具有明显的抗癫痫反复发作的作用 ,抑制癫痫大鼠海马结构ＧＦＡＰ的过量表达 ,但蝎毒阻…     

蝎毒多肽提取物抑制DU- 145 细胞 COX- 2 和MMP- 9 表达的研究

目的：研究蝎毒多肽提取物（peptide extract from scorpion venom,PESV）对雄激素非依赖性人前列腺癌细胞株DU-145COX-2和MMP-9表达的影响,进一步探讨其抗血管生成的分子机制,为抗前列腺癌骨转移提供有效的治疗手段。方法：采用免疫组只化学方法检测PESV对COX-2、MMP-9蛋白表达的影响,应用RT-PCR检测PESV对MMP-9在mRNA水平表达的影响。结果：蝎毒多肽提取物（40μg／mL）作用于前列腺癌细胞后,COX-2、MMP-9蛋白表达水平明显下调（P〈0．05）,进一步检测发现MMP-9在mRNA水平亦明显下降（P〈0．05）。结论：蝎毒多肽提取物（PESV）通过抑制前列腺癌细胞血管生成因子COX-2的表达而发挥其抗血管生成作用,具有临床应用价值。     

蝎毒对癫痫敏感性和海马GFAP释放的影响

目的和方法 :本工作用海人酸癫痫模型 ,通过对癫痫大鼠蝎毒治疗后行为变化及脑内胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)免疫反应活性的检测 ,对蝎毒抗癫痫反复发作的相关脑区及其机制做以初步探讨。结果 :癫痫大鼠蝎毒治疗三周后 ,能明显减少癫痫发作的例数 ,减轻癫痫发作的程度 ,使发作的潜伏期延长 (P <0 .0 5 )。免疫细胞化学的实验显示 ,蝎毒抗癫痫反复发作的相关脑区是海马。 8例蝎毒治疗的大鼠与实验对照组相比 ,有 6例背侧海马GFAP免疫染色明显减轻 ,未见星形胶质细胞增生 ;CA1区无明显神经元缺失 ;而且与空白对照组相比无显著差异。结论 :癫痫大鼠蝎毒治疗三周后 ,能明显减轻癫痫发作的行为 ,抑制海马星形胶质细胞的增生肥大 ,减轻海马神经元受损的程度。蝎毒抑制海马星形胶质细胞增生很可能是蝎毒抗癫痫反复发作的重要机制之一。     

蝎毒对癫痫大鼠海马内强啡肽原mRNA表达的影响

目的和方法：本工作用红藻氨酸癫痫模型,通过对癫痫大鼠蝎毒处理后民内哟啡肽原ｍＲＮＡ（ＫＰＵＹＮｍＲＮＡ）表达的原位杂交观察,对国产蝎粗毒抗癫痫反复发作的细胞分子机制进行初步探讨。结果：原位杂交的实验显示,三周ＫＡ后,实验对照组与空白对照组相比,腹侧海马尤其是海马门区ＰＤＹＮｍＲＮＡ阳性数目明显减少（Ｐ〈０．０１）。实验给药组大鼠８例,其中有６例腹侧海马门区ＰＤＹＮｍＲＮＡ阳性神经元数目未见减少且有     

蝎毒多肽提取物对卵巢癌SKOV3 细胞HPA 与VEGF 抑制作用 的实验研究

目的:研究蝎毒多肽提取物(polypeptide extract from scorpion venom,PESV)对卵巢癌SKOV3细胞HPA与VEGF表达的影响,进一步探讨其抗血管生成的分子机制.方法:卵巢癌SKOV3细胞分为对照组、PESV组,免疫组织化学方法检测各组HPA、VEGF的表达,western-blot方法检测各组HPA在蛋白水平的表达.结果:与对照组相比,PESV组HPA、VEGF表达明显降低(P＜0.05),进一步检测发现PESV组HPA在蛋白水平表达亦明显下调(P＜0.05).结论:PESV能够抑制卵巢癌SKOV3细胞的生长,其机制可能与抑制HPA、VEGF的表达有关.     

东亚钳蝎蝎毒成分BmK—9及其次级提取物对心肌细胞电活动的影响

培养小鼠的心肌细胞,用微电极胞内引导快反应心肌细胞动作电位。以五项除极化参数ＡＰＡ,ＯＳ,ＭＤＰ,ＴＰ,Ｖｍａｘ和波宽参数ＡＰＤ５０为指标,发现东亚钳蝎蝎毒三级提取物ＢｍＫ－９－（３）、ＢｍＫ－９－（４）、ＢｍＫ－９－（５）３μｇ／ｍｌ使除极有关参数全部减小,而不影响动作电位波宽。表明它们可能是蝎毒中单纯阻滞钠通道的活性成分。     

蝎毒多肽提取物的抗血管生成作用

用不同浓度的东亚钳蝎素的多肽提取物PESV(4～20μg／ml)作用于人脐静脉内皮细胞(HUVEC),观察HUVEC增殖活性和凋亡变化,增殖活性检测采用BrdU掺入的ELISA法,凋亡水平和凋亡相关基因Bcl-2和Bax表达的检测采用流式细胞术检测;用鸡胚尿囊膜(CAM)显示PESV对血管生成的抑制作用。结果显示,PESV抑制HUVEC的增殖,而对乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖无明显影响;PESV作用72h后,HUVEC凋亡相关基因Bcl-2表达降低,Bax表达增加,凋亡细胞比例增至10．5％,明显高于对照组;0．5mgPESV能明显抑制CAM新生血管的形成。因此,PESV具有良好的体外抗肿瘤血管生成活性,PESV作为一种肿瘤血管抑制剂的天然药物来源,其有效成分和药理作用有待进一步研究。     

我国东亚钳蝎的研究概况

东亚钳蝎又称马氏钳蝎(Buthus martensi),是我国分布最广,数量最多的蝎种。中药全蝎为名贵药材之一。全蝎的养殖和综合利用已列入国家星火计划。蝎子养殖专业户,正从综合利用方面谋求新路。本文作者根据文献资料和实验研究报告,简单介绍我国东亚钳蝎的研究概况。 (一)全蝎的加工与蝎毒的提取 中药全蝎是活蝎制成干品,以干蝎配伍人药,因此,全蝎的质量很大程度取决于加工方法和技术。要使干品得到符合《药典》的要求,首先除去蝎体上的泥沙,以每0.5公斤活蝎用盐量75克为宜,     

蝎毒多肽Ctry2459抗白色念珠菌机制研究

【目的】探究蝎毒多肽Ctry2459抗白色念珠菌的作用机制。【方法】采用肉汤稀释法并结合平板计数法测定蝎毒多肽Ctry2459对白色念珠菌的最小抑菌浓度和最小杀真菌浓度;通过平板计数法绘制蝎毒多肽Ctry2459对白色念珠菌的时间-杀菌动力学曲线;通过PI吸收实验检测蝎毒多肽Ctry2459对白色念珠菌细胞膜完整性的影响;通过核酸阻滞实验检测蝎毒多肽Ctry2459与核酸间是否具有结合作用;通过流式细胞技术检测蝎毒多肽Ctry2459对白色念珠菌活性氧、线粒体膜电位以及凋亡/坏死的影响。【结果】蝎毒多肽Ctry2459对白色念珠菌的最小抑菌浓度和最小杀真菌浓度分别为25μg/mL和50μg/mL。蝎毒多肽Ctry2459对白色念珠菌的杀菌作用具有时间和浓度依赖性,并可通过直接破坏细胞膜的完整性以及通过ROS介导的线粒体失能导致细胞坏死的方式杀灭白色念珠菌细胞。【结论】蝎毒多肽Ctry2459可以作为抗白色念珠菌药物研发的候选分子或者分子模板。     

蝎毒诱导红藻氨酸癫痫大鼠海马内胆囊收缩素原mRNA的表达

目的和方法：本工作用红藻氨酸（ＫＡ）癫痫模型,对用蝎毒处理住房第马内胆囊收缩素原ｍＲＮＡ（ＰＣＣＫ ｍＲＮＡ）表达进行原位杂交观察,并对国产东亚钳蝎粗毒抗癫痫反复发作的机制做了初步探讨。结果：原位杂交的实验显示,三周ＫＡ后,实验对照组与空白对照组相比,腹侧海马是海马门区ＰＣＣＫ ｍＲＮＡ阳性神经元数目明显减少（Ｐ〈０．０５）;实验给药组大鼠８例,其中有６例腹侧海马门区ＰＣＣＫ ｍＲＮＡ阳性神经元数     

常见蜘蛛的采集方法

蜘蛛是教学和科研上常用的实验材料,又是害虫的重要天敌。掌握蜘蛛的采集,有助于教学和科研工作。蜘蛛的采集因种类及生态类型不同而异。笔者在长期的蜘蛛采集过程中,积累了一些经验现分别介绍如下:一、采集工具常用的采集管以口径2.5cm,管长10cm,管壁厚2mm为好。也可用试管、广口瓶、三角烧瓶、罐头瓶等代用。管(瓶)口内壁事先涂一些石灰水,以防扣捕时,蜘蛛从管(瓶)内脱出。瓶内则放些草或折曲纸条等。这样一个采集瓶可放几头蜘蛛,节省用具,瓶口用纱布封扎。采蛛网(可用捕虫网代替),75—80%酒精,毛笔。此外还有镊子、放大镜、记录本、铁锹…     

蝎毒耐热蛋白对大鼠海马神经元钠通道的抑制作用

应用全细胞膜片钳技术观察蝎毒耐热蛋白（scorpion venom heat resistant protein,SVHRP）对急性分离大鼠海马神经元电压依赖性钠通道的影响。结果表明,急性分离大鼠海马神经元产生的河豚毒素（tetrodotoxin,TTX）敏感的电压依赖性钠电流被SVHRP浓度依赖性地抑制,半数抑制浓度为（0．0034±0．0004）μg／mL,Hill常数为0．4361±0．0318;SVHRP可使钠通道稳态激活曲线向电压的正方向移动,正常TTX敏感的钠通道的半数激活电压（V1/2）为（-34．38±0．62）mV（n=16）,给予0．1μg／mL的SVHRP后V1/2为（-23．96±0．41）mV（n=8,P〈0．05）,斜坡因子（κ）由正常的4．52±0．52变为3．73±0．08（n=8,P〈0．05）。SVHRP亦能改变电压依赖性钠通道的稳态失活曲线,使其向电位的负方向移动,SVHRP处理前钠通道半数失活电压（V1/2）为（-32．60±1．52）mV,κ为6．73±0．51（n=16）;0．1μg／mL的SVHRP处理后V1/2变为（-50．69±2．55）mV（n=8,P〈0．01）,κ为5．49±0．72（n=8,P〈0．05）。结果提示,SVHRP能抑制电压依赖性钠电流,改变钠通道的动力学特性,抑制其激活,促进其失活,从而影响神经元的兴奋性,这可能是其抗癫痫的机制之一。