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相似文献
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1.
从 He La 细胞中提取总 R N A,采用反转录 P C R 技术,从该总 R N A 中扩增了约 530 bp 的sh T N F R55 基因的 c D N A,并克隆至质粒 p U C m el中酪蛋白酶 m el Cl 分泌信号肽编码序列的下游,构建成含融合基因 m el/ T N F R 的重组质粒 p U C m el/ T N F R.把融合基因 m el/ T N F R 插入链霉菌表达质粒 p I J459 的多克隆位点,使之位于 erm 强启动子的下游,得到重组表达质粒 p I J459 m el/s T N F R.经 Southern 杂交证明重组质粒 p I J459 m el/s T N F R 插入了 s T N F R55 基因片段.对重组菌株 Streptom yces lividans(p I J459 m el/s T N F R)的发酵液进行 S D S P A G E、受体配基杂交( Ligand blot)分析、对 T N F 敏感的 L929 细胞的细胞毒性中和试验表明,可溶性肿瘤坏死因子受体 s T N F R55 在链霉菌中得到了分泌表达,表达产物具有生物学活性.表达产物的分子量约在 26~28 k D 之间.  相似文献   

2.
以E.coli和耐辐射微球菌(Deinococcusradiodurans)为试材,研究了N+离子注入对其SOD、CAT和POD活性的影响及其对自由基的清除。结果表明:D.radiodurans经N+离子注入后SOD和CAT酶活高于E.coli的,而POD酶活不仅很低也低于E.coli的;随剂量的增大,两者SOD和CAT酶活均为先增后减,只是其SOD酶活的变化峰值对应剂量分别为6×1015N+/cm2和2×1015N+/cm2,而CAT的则均为4×1015N+/cm2;它们的POD酶活变化则不同,各处理耐辐射微球菌POD酶活保持低而恒定的水平,而大肠杆菌的则是中低剂量较恒定,较高剂量逐渐增大;对1016N+/cm2注入的细胞培养到后对数期,再测其自由基ESR波谱信号强度,发现比同剂量注入、未进行培养的要弱的多。  相似文献   

3.
杨树新品种叶肉原生质体培养和植株再生   总被引:4,自引:1,他引:3  
从1 个月龄的NL-80106 杨(Populusdeltoides×P. sim onii)无菌苗叶片分离得到大量原生质体,纯化后其原生质体产量为4×107/g fr.w t. 纯化的原生质体在含2,4-D 2 m g/L、NAA 0.5 m g/L和KT 0.5 m g/L的KM8p 和MS培养基中进行高密度液体浅层培养,渗透势为0.40 m ol/L的KM8p 培养基中原生质体分裂频率最高. 培养第5 天观察到第一次细胞分裂,培养10 d 的分裂频率为4.5% ,12 周内可形成大量的细胞团和小愈伤组织. NL-80106杨叶肉原生质体在富含有机氮并以葡萄糖为碳源的培养基中具有较高的分裂频率和植板率.小愈伤组织在gelrite 固化的NLZ1 培养基上增殖生长,3 周后形成4—6 m m 结构紧密的鲜红色愈伤组织,转至NLF分化培养基,分化成苗率为100% . 待芽伸长到3 cm 时,从基部切下转至1/2 MS培养基上诱导生根,形成完整植株  相似文献   

4.
应用鼠-鼠杂交瘤细胞技术建立了三系稳定分泌抗重组人α2a型干扰素(rHu-IFN-α2a)单克隆抗体细胞系1A5、1B5和27A7。细胞连续传代和在液氮中冻存后复苏,分泌抗体能力不变,并且维持在较高水平,细胞培养上清效价1∶256~1∶4096,腹水1∶26×105~1∶27×108。Ig亚类测定,1A5和1B5McAb为IgG1,27A7为IgG2a。三系McAb均识别rHu-IFN-α2a和-α2b,与rHu-IFN-α1和正常大肠菌体裂解液无反应。竞争ELISA试验,三系McAb分别针对rHu-IFN-α2a上三个不同表位。同McAb建立双抗体夹心ELISA对rHu-IFN-α2a和-α2b均可检测到150pg/ml,约10IU/ml的敏感度。用提纯的单抗制备亲和层析柱,单抗偶联率95%以上。三系单抗亲和层析柱均可将粗制rHu-IFN-α2a提纯到97%以上纯度。平均回收率为:1A5单抗柱902%,1B5单抗柱953%,27A7单抗柱947%。比活性平均值依次为194×108IU/mg,197×108IU/mg和164×108IU/mg,残余鼠IgG量均符合规程要求。纯化rHu-IFN?  相似文献   

5.
剪切应力对毛细血管内皮细胞代谢的影响   总被引:3,自引:0,他引:3  
建立的平行平板流动腔装置适用于研究血管内皮细胞代谢对剪切流场的响应。将培养的人胚肾小球血管单层内皮细胞置于剪应力分别为5×10-5N/cm2,1×10-4N/cm2和1.5×10-4N/cm2的定常层流中剪切25小时,样品中的内皮素分泌量用放射免疫法测定。结果表明,剪应力水平对内皮细胞内皮素的代谢活动有显著影响。与静态培养对照,低水平的剪应力(5×10-5N/cm2、1×10-4N/cm2)促进内皮素的分泌,而较高水平的剪应力(1.5×10-4N/cm2)抑制内皮素的分泌;剪应力对内皮素累积含量的影响比之分泌速率更大  相似文献   

6.
三种类型辐射对质粒超螺旋DNA损伤的研究   总被引:7,自引:0,他引:7  
用agarose电泳和图象处理技术比较了60Coγ射线、UV及低能N+离子处理pUC19DNA超螺旋结构的损伤效应及若干自由基清除剂的保护效应。结果表明:(1)γ射线和UV照射干燥DNA的损伤显著低于水溶液样品;(2)N+离子注入后超螺旋DNA的减少(SC%)与剂量呈良好线性关系,而γ射线和UV组的SC%随剂量升高呈指数下降;(3)干燥DNAγ辐照组的D37值为820Gy,SC完全消失的剂量LD为3814Gy,LD/D37=4.65;UV照射组的相应值分别为:1.65J/cm2,7.65J/cm2,4.64;N+离子组的相应值为:3.2×1015N+/cm2,5.0×1015N+/cm2和1.56。虽然上述三种辐射的剂量单位不同,不能直接比较其相对生物学效应,但从LD与D37的比值可反映DNASC破坏的程度和终点剂量(SC%=0)的大小。从而看出,N+离子(高LET辐射)比γ射线(低LET辐射)UV(非电离辐射)对DNA损伤作用更强;(4)乙醇、甘露醇等自由基清除剂对电离辐射损伤有很强的保护作用,但对UV损伤未见明显的保护效应  相似文献   

7.
以 Cytopore 多孔微球固定产重组组织型纤溶酶原激活剂(rt P A) C H O 工程细胞株4 B3 ,在2 L 搅拌式生物反应器用无血清培养基 D F5 S 连续灌流培养。4 B3 细胞的最大活细胞密度和rt P A 生产水平分别达到883 ×106/ m L 和12473 I U/ m L。含rt P A 的4 B3 细胞培养上清经 M P G 吸附层析和 Lysinesepharose 4 B 亲和层析两步纯化,rt P A 的纯度达到98 % 。  相似文献   

8.
抗真菌蛋白Rs—AFPs基因在大肠杆菌中的表达   总被引:3,自引:0,他引:3  
将抗真菌蛋白Rs-AFP1和Rs-AFP2全长cDNA插入表达质粒pET-22b/NcoI+SacI位点,构建成融合蛋白表达载体pRAF1和pRAF2.将不含信号肽编码序列的Rs-AFP1和Rs-AFP2cDNA分别插入pET-22b/Ncol+Sacl和pET-22b/Ndel+SacI位点,构建成不含信号肽序列的融合蛋白表达载体pRAF3、pRAF4和非融合蛋白表达载体pRAF5和pRAF6.将构建的上述各种表达载体转化E.coliBL21,挑菌落培养,IPTG诱导,使Rs-AFPs基因得到表达,并用体外抑菌试验检测表达产物的活性,结果表明,各种表达载体的表达产物均具有不同程度的抑菌活性,其中,pRAF3和pRAF4表达产物的抑菌活性较明显.  相似文献   

9.
INSTRUCTIONSTOCONTRIBUTORSOFZOOLOGICALRESEARCH¥//1.ZoologicalResearch,iseditedbytheKunminginstituteofZoology,theChineseAcadem...  相似文献   

10.
研究了氮离子注入对耐辐射异常球菌(Deinococcusradiodurans)细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性的影响及其对MnSOD的诱导。结果表明,当20keV氮离子的注入剂量低于8×1014ions/cm2时,D.radiodurans中SOD活性变化不大,当剂量在8×1014~60×1014ions/cm2范围内时,SOD的活性随着注入剂量的增大逐渐提高,但大于60×1014ions/cm2时,则逐渐下降;加入对不同金属辅基的SOD同工酶活性抑制剂H2O2和氯仿乙醇的研究表明,中高剂量下氮离子注入诱导的是D.radiodurans中MnSOD活性的提高,在正常生理条件及小于8×1014ions/cm2的剂量下,D.radiodurans中SOD总活性主要由FeSOD构成  相似文献   

11.
菜心下胚轴原生质体培养和植株再生   总被引:6,自引:0,他引:6  
以萌发3—4 天(长约4 cm )的菜心(Brassica campestris var.parachinesis)无菌苗苍白下胚轴为材料,酶解分离原生质体。经纯化的原生质体,在含0.5 m g/LZT、0.5 m g/L2,4-D、1.0 m g/LNAA 和0.4 m ol/L葡萄糖的K8p 培养基中,进行微滴培养。在起始培养14—18小时,原生质体再生新的细胞壁。36 小时再生细胞开始第一次分裂。第三天分裂细胞频率可达35% 。培养第8—9 天,可见含8—16个细胞的小细胞团,植板率为15% —18% 。3 周后将发育成直径为2 m m 的白色小愈伤组织,转到含0.3 m g/L 2,4-D并用gelrite半固化的培养基上,增殖成4—5 m m 直径的愈伤组织。在MS+ 3.2(或1.6) m g/L BA+ 1.6(或0.8) m g/LZT+ 0.01 m g/L NAA+ 0.1 m g/LGA3 和0.2% 蔗糖的分化培养基上,获得芽的分化。切下约2 cm 长的芽苗,转移到含0.2 m g/LIAA 和2% 蔗糖的培养基上,生根形成完整植株  相似文献   

12.
唐巍  欧阳藩  郭仲琛   《广西植物》1998,18(1):65-69
马铃薯3个品种虎头,克4和Favorita的茎叶外植体在MS+1mg/LNAA+1mg/LBA培养基上形成愈伤组织。在MS+02mg/LNAA+1mg/LBA培养基上,愈伤组织分化产生不定芽。在MS+005mg/LNAA培养基上,不定芽生根形成再生完整植株。02~03cm大小的不定芽反复继代可持续增殖。有3个以上叶片的不定芽在MS+5mg/LBA+005mg/LIBA培养基上和黑暗条件下,在侧芽或顶芽部位形成微型薯。用4%海藻酸钠和2%氯化钙溶液包裹02~03cm大小的不定芽或直径为02~03cm的微型薯制成微芽人工种子和微薯人工种子。在4℃下贮存2个月后,微芽人工种子和微薯人工种子在有菌腐殖土壤中播种21d的萌发率分别是157%和962%。  相似文献   

13.
1,6-二磷酸果糖(FDP)广泛应用于治疗心血管疾病.本文进行了1,6-二磷酸果糖产生菌的筛选和最佳条件的研究。筛选出菌株HY2具有较高的产1,6-二磷酸果糖酶活力,高达160mgFDP/gwetcells,菌体生长的最适培养条件为:麦芽汁培养基糖度为12柏林,培养温度为28℃,pH6.0~6.5,菌体收率达7.0%左右。  相似文献   

14.
人工饲养条件下子午沙鼠的繁殖特征   总被引:5,自引:0,他引:5  
蒋卫  郑强 《兽类学报》1995,15(1):75-76,72
人工饲养条件下子午沙鼠的繁殖特征THEBREEDINGFEATUREOFMERIONESMERIDIANUSUNDERTHEARTIFlCIALCONDITIONSKeywordsMerionesmeridianus;Keeping;Reproduc...  相似文献   

15.
采用高压电穿孔法将穿梭质粒导入了嗜热脂肪芽胞杆菌(Bacillus stearothermophilus)K1041和T521菌株。以对数生长后期的菌体制备K1041转化细胞,以LB平板上于50℃培养的过夜菌制备T521转化细胞,细胞密度为5~7×10细胞/mL。电击条件如下:电容25μF,电场强度10.0KV/cm,脉冲控制器设定200。 K1041和 T521最高转化效率分别达2.01×104和1.19 ×102转化子/  相似文献   

16.
 以人肺癌细胞 P G 和人胃癌细胞 B G C 823 作为研究对象,利用 M T T 测定、3 H Td R 参入、流式细胞术、软琼脂培养、 Northern blot、 W stern blot 等实验方法,观察了稀土化合物氯化亚鈰( Ce Cl3)抑癌作用.结果表明, Ce Cl3 浓度为 005 m m ol/ L,01 m m ol/ L,05 m m ol/ L和 1 m m ol/ L可抑制 P G 细胞的增殖;浓度为 05 m m ol/ L和 1 m m ol/ L可抑制 P G 细胞 D N A 的合成,其 G1 期细胞比例增加而 S期细胞比例减少,在软琼脂中的生长能力降低,原癌基因 c m yc 和 c ras 表达降低,p16 蛋白质表达降低.而同样浓度的 Ce Cl3 对 B G C 823 细胞和正常细胞 2 B S未见影响.提示:稀土化合物抑制肺癌细胞 P G 的增殖以及降低其恶性度的作用机制可能与一些增殖相关的原癌基因的表达和细胞周期的调控有关,其确切的机理还需进一步的研究.  相似文献   

17.
通过超滤膜过滤法,在大连市黑石礁海域2500米以内,分离到白色与铁红圆酵母两类海洋酵母。铁红圆酵母分属于Torulopsispulcerrima类群和Torulopsiscandida类群。葡萄糖——蛋白胨——酵母膏液体培养基静止培养条件下,T.pulcerrima类群培养五天半,活酵母数量达到第一次高峰,为1.2×10 ̄8/ml,大约在八天半之后,达到最高数量,为2.0×108/ml。T.candida类群,培养大约二天半后,酵母数量达到第一次高峰,为1.8×10 ̄7/ml,培养大约十天半,活细胞数达到最高峰,为1.2×10 ̄(-8)/ml。由于铁红园酵母具有易培性,耐不良环境能力强的优点,作为未来水产养殖业幼体饵料微生物具有广泛地应用前景。  相似文献   

18.
重组人肿瘤坏死因子α(hTNFα)衍生物发酵条件的研究   总被引:2,自引:0,他引:2  
本文对一种新型重组人肿瘤坏死因子衍生物(命名为hTNFD)的发酵条件进行了初步研究。通过实验优化选择了适宜该衍生物表达的培养基、IPTG使用浓度、诱导时期以及诱导时间的长短等,并在50L发酵罐进行了中试规模的放大培养,菌体的收获量湿重可达1643g/L,hTNFD表达量占总蛋白的60%,纯化的衍生物比活为101×1010U/mg,比原型hTNFα提高了465倍,具有潜在的临床应用价值。  相似文献   

19.
利用逆转录病毒载体LXSN构建了含有完整编码TNFcDNA的重组逆转录病毒质粒pLXSN-tnf,用Lipofectamine将重组质粒导入病毒包装细胞pA317,经G418筛选培养获得抗性克隆,用NIH3T3细胞测定病毒滴度,获得滴度为5×105CFU/ml的细胞克隆。利用病毒上清液感染大鼠胶质瘤细胞系C6,得到G418抗性克隆细胞C6pLXSN-tnf,经PCR检测,TNFcDNA完整地整合在细胞基因组中。测定C6pLXSN-tnf细胞上清中TNF的生物活性,结果显示TNF有相对稳定的表达(48~180U/ml106cells/24h)。实验还显示经TNF基因转导的C6pLXSN-tnf细胞生长速度较之亲本肿瘤细胞C6明显下降,基因修饰后的肿瘤细胞在Wistar大鼠体内形成肿瘤的能力明显受到抑制。进一步用超离心法浓缩病毒对胶质瘤移植模型进行了体内治疗研究。  相似文献   

20.
分离到Aspergilusoryzae13个菌株,其曲酸产量变化幅度166—486mg/ml,从中选出4个高产菌株。在1%酵母提取物和15%蔗糖培养液中30℃发酵培养,8—10天菌体生长量和曲酸产量达到最大值,随后曲酸产量迅速下降。蔗糖浓度对菌体生长和曲酸产量影响甚大,最适蔗糖浓度为15%。天冬氨酸、甘氨酸、赖氨酸、谷氨酸、吡哆醇、叶酸和抗坏血酸有利于菌体生长并显著提高曲酸产量。将在YES培养液中培养10天的菌体重新悬浮于含15%蔗糖的YES培养液或02M磷酸缓冲液(pH65)中8—10天曲酸产量仍可达到45mg/ml以上。低温条件下制备的培养8—10天的Aoryzae菌体匀浆反应系统仅有痕量曲酸形成。  相似文献   

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