高生物量草分枝杆菌突变株诱变选育的研究

目的:为了获得具有提高人体免疫力的草分支杆菌菌株的生长量。方法:采用紫外线和硫酸二乙酯两种方法,对其原始菌株进行复合诱变,筛选生长能力强的突变菌株。结果:实验结果表明紫外线诱变最佳处理时间为90 s,硫酸二乙酯诱变最佳处理时间为50 min,筛选出生长能力强的3株突变株(50min-1、50min-4和50min-7),其生长能力较原菌株分别提高了62%、57%和59%。通过方差分析来检测这3株突变菌株的遗传稳定性,结果显示传代次数对突变株50min-1和50min-4的生长量影响不显著,而对50min-7的生长量的影响显著,因此50min-1和50min-4具有遗传稳定性。结论:研究结果为草分支杆菌的发酵研究提供了优良菌株。     

ɑ-乙酰乳酸脱羧酶产生菌的微波诱变

为获得ɑ-乙酰乳酸脱羧酶的高产突变株,以产ɑ-ALDC的枯草芽孢杆菌3226-5为出发菌株进行了诱变处理。经过微波(小火)物理诱变得到3株高产正突变株W181、W184、W195,经过多次传代实验,表明W181、W195是稳定的突变株。突变株W195的ɑ-ALDC相对酶活(OD522)由出发菌株的0.35提高到0.617,提高了76%,突变株W181提高了66.9%。     

脱落酸高产菌的激光诱变筛选

对脱落酸产生菌分别进行了紫外诱变和紫外 -激光复合诱变筛选 ,结果表明紫外 -激光复合诱变正变率较高 ,正变幅度较大。从紫外 -激光复合诱变得到的突变株中筛选到一株遗传性状稳定的高产菌株 ,将其传代 5代 ,各子代发酵脱落酸的平均产量均在 2 .1mg·g-1 以上 ,比原始出发菌株产量提高了 32 %。     

激光诱变筛选高产植酸酶黑曲霉菌株的研究

用1.06um,15KHz高重复率声光调QNd：YAG激光以20W和15W的辐照功率分别照射产植酸酶的黑曲霉孢子液和原生质体液不同时间,检定再生菌落数并经透明圈初筛和摇瓶复筛,测定诱变菌株所产植酸酶酶活。结果表明：20W的功率辐照黑曲霉孢子1′以上,致死率近乎100…,15W功率辐照原生质体液20″-4′,存活率在8.571％-117.14％之间,正变率在27.45％-100％之间,正变辐度60.69％-124.96％,说明原生质体比孢子耐受激光诱变的能力强,并且诱变效果好。筛选到了一株酶活提高达3.75倍的单个变异菌株。     

枯草芽孢杆菌B-903菌株的诱变选育*

枯草芽孢杆菌B-903菌株是由河南省农业科学院植物保护研究所从郑州果园中分离得到,其代谢产生的抗菌物质对多种植物病原真菌具有较强抑制作用。以此菌株为出发菌株,进行亚硝基胍(NTG)和微波诱变处理,确定了二者诱变处理的最佳处理剂量:NTG最佳处理浓度为200μg/mL,微波诱变为HI微波挡(850W、脉冲频率2450MHz)处理100s,筛选出13个高效突变株。经传代实验,2株高效突变株N₁和W₂抑菌圈直径分别稳定在26mm和24mm以上,比出发菌株提高21·8%     

枯草芽孢杆菌B-903菌株的诱变选育

枯草芽孢杆菌B-903菌株是由河南省农业科学院植物保护研究所从郑州果园中分离得到,其代谢产生的抗菌物质对多种植物病原真菌具有较强抑制作用。以此菌株为出发菌株,进行亚硝基胍（NTG）和微波诱变处理,确定了,二者诱变处理的最佳处理剂量：NTG最佳处理浓度为200μg／mL,微波诱变为HI微波挡（850W、脉冲频率2450MHz）处理100s,筛选出13个高效突变株。经传代实验,2株高效突变株N1和W2抑菌圈直径分别稳定在26mm和24mm以上,比出发菌株提高21．8％和14．8％．     

α-乙酰乳酸脱羧酶产生菌的微波诱变

为获得α-乙酰乳酸脱羧酶的高产突变株,以产α-ALDC的枯草芽孢杆菌3226—5为出发菌株进行了诱变处理。经过微波（小火）物理诱变得到3株高产正突变株W181、W184、W195,经过多次传代实验,表明W181、W195是稳定的突变株。突变株W195的α-ALDC相对酶活（OD522）由出发菌株的0．35提高到0．617,提高了76％,突变株W181提高了66．9％。     

高产虾青素红法夫酵母的紫外线诱变

虾青素(3,3'-二羟基-β,β'-胡萝卜素-4,4'-二酮)是一种类胡萝卜、素类物质,具有巨大的开发价值。本文通过单一紫外线、紫外线-氯化锂复合处理,结合选择性平板的筛选作用,对菌株G26进行诱变育种。实验结果表明:紫外线照射3～9min,法夫酵母的死亡率在70%～95%之间;当死亡率为78.57%时,正变率达到最大值71.43%。经多次单独紫外线处理,以及紫外线-氯化锂复合诱变,获得稳定高产突变株G49,虾青素产量达到10 321μg/L,含量为713.8μg/g DCW,较出发菌株G26分别提高31.48%和20.47%。     

尼日利亚菌素高产菌株的选育

通过对致死率和正负突变率的测定,确定了紫外线、亚硝酸、紫外线加吖啶橙3种诱变方式对吸水链霉菌NND-52的29号菌株进行诱变处理的合适剂量,并采用复合诱变得到了一株脱葡萄糖阻遏的高产菌株A19,其尼日利亚菌素的摇瓶产量比出发菌株提高了128％。传代结果表明,在传代的同时结合自然分离,可以保持稳定的产抗特性。     

微波结合紫外诱变选育辅酶Q_(10)高产菌株

以根瘤土壤杆菌LNUB335为出发菌株,以维生素K3和NaN3双抗性为筛选标记,在根瘤土壤杆菌中首次利用紫外线及微波联合诱变处理,获得1株生产性能比LNUB335显著提高的突变株ARN007,其CoQ10产量为12.01mg/L,较出发菌株提高68.67%,每克干细胞含CoQ102.46mg,较出发菌株提高38.20%。通过传代实验证明该突变株的遗传性稳定,可作为进一步研究的实验菌株。