糖基转移酶的研究进展

糖基转移酶参与了聚糖、糖苷和复合糖类中糖部分的生物合成,具有高度的底物专一性.已知序列的糖基转移酶没有明显的同源性,但有相似的域结构.有些糖基转移酶的基因可因几个碱基的替换而改变酶的专一性;也因单个碱基的缺失而成为无酶活性的产物.糖基转移酶和某些疾病密切相关.     

紫云英根瘤菌糖基转移酶基因exoL的定位突变及序列分析

利用转座子Ｔｎ５对质粒ｐＪＢ－Ｂ６定位诱变,经同源变换,筛选获得一株Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍｈｕａｋｕｉｉ１０７胞外多糖合成缺陷变种ＲＨ９８３。三亲本杂交实验显示,ｐＪＢ－Ｂ６及其亚克隆ｐＪＢ－Ｂ６０均可纠正变种ＲＨ９８３的胞多多糖合成缺陷。     

紫云英根瘤菌糖基转移酶基因exoA的克隆及序列分析

从可互补紫云奶瘤菌胞外多糖合成缺陷变种ＮＡ０３和ＮＡ１０的ｅｘｏＲ‘－１１上亚克隆获得２．０ｋｂ的ＢｇｌＩ酶切片段,命名为ｐＪＢ－Ｈ７０１,ｐＪＢ－Ｈ７０１不仅可纠正变种ＮＡ０３和ＮＡ１０Ｒ的胞外多糖缺陷表型,而且使两变种诱导宿主植物结瘤固氮能力恢复到野生型水平。     

梭梭糖基转移酶基因克隆及序列分析

以梭梭叶片为材料,根据其他植物糖基转移酶基因的保守序列设计引物,采用同源基因克隆及RACE-PCR方法克隆到2个同源的序列,分别命名为 HaUGT1和 HaUGT2。基因测序结果显示, HaUGT1基因编码区长1 485 bp,编码495个氨基酸; HaUGT2基因编码区长1 185 bp,编码394个氨基酸。HaUGT1和HaUGT2蛋白具有保守的PSPG 基序、UDP-葡萄糖基转移酶结构域,与其他植物中的糖基转移酶蛋白同源性较高。     

糖基转移酶与肿瘤标志

糖基转移酶与肿瘤标志张迺哲（河北省医学科学院生化研究室,石家庄０５００２１）关键词糖基转移酶,肿瘤标志已知细胞癌变时,构成癌细胞膜的糖脂质和糖蛋白首先发生改变,肿瘤细胞膜糖蛋白糖链的改变使细胞间的识别和联系发生障碍。肿瘤细胞具有比正常细胞强的侵入和破...     

紫云英根瘤菌糖基转移酶基因exoL的定位突变及序列分析

利用转座子Tn5对质粒pJB-B6既定位诱变,经同源交换,筛选获得一株Rhizobiumhuakuii107胞外糖合成缺陷（Exo－）变种RH983。三亲本杂交实验显示,pJB-B6及其亚克隆pJB-B601均可纠正变种RH983的胞外多糖合成缺陷。pJB-B601的2．3kbDNA片段的核苷酸顺序表明,该片段内存在一个完整的开放阅读框架（ORF）。ORF全长1170bp,编码390个氨基酸的蛋白,该蛋白与Rhi－zobiummeliloti的糖基转移酶ExoL有56．7％．的同源性,称为RhexoL。利用启动子探测质粒,构建了RhexoL-lacZ转录融合子,发现RhexoL基因5’上游有较强的启动子活性。     

苦荞糖基转移酶基因的克隆及活性鉴定

糖基化修饰在调控各种小分子的溶解度、稳定性及生物活性中具有重要的作用。该研究基于苦荞转录组数据,克隆获得2条糖基转移酶基因（FtUFGT4和FtUFGT5）,并对其在大肠杆菌中的表达产物进行酶催活性鉴定。结果表明：（1）获得的苦荞糖基转移酶基因cDNA分别为1 434和1 470 bp,其编码蛋白同属于拟南芥糖基转移酶E类群,可能参与黄酮类化合物的糖基化。（2）多重序列比对表明,FtUFGT4和FtUFGT5蛋白C端都具有PSPG框,其催化活性位点分别是H17和H16;FtUFGT4和FtUFGT5都是典型的植物糖基转移酶GT B结构,二者的蛋白模型能与矢车菊素和UDP进行分子对接。（3）FtUFGT4和FtUFGT5在大肠杆菌中获得了可溶性表达,薄层层析实验表明二者均具有催化矢车菊素糖基化为矢车菊素 3 O 葡萄糖苷的活性。     

蛋白-O-岩藻糖基转移酶1在结直肠癌中的表达及临床意义

目的观察蛋白-O-岩藻糖基转移酶1(protein O-fucosyltransferase 1,POFUT1)在结直肠癌中的表达情况,研究其在结直肠癌早期诊断中的意义。方法通过Oncomine与UALCAN数据库获取TCGA及非TCGA库中POFUT1的基因表达量数据,分析POFUT1在癌症中的表达情况;通过免疫组织化学技术(IHC)检测结直肠癌组织及其对应的癌旁组织与远癌组织中POFUT1的表达情况。结果数据库资料分析结果表明,POFUT1在多种癌症组织尤其是结直肠癌组织中高表达;IHC结果显示,结直肠癌组织中POFUT1的阳性表达率明显高于其对应的癌旁组织与远癌组织。结论 POFUT1可能成为结直肠癌早期诊断的新型分子标志物之一。     

植物小分子化合物的糖基化与糖基转移酶

文章介绍近年来植物体内亲脂性小分子化合物的糖基化和与其相关的糖基转移酶研究进展.     

O-GlcNAc糖基转移酶(OGT)基因表达的抑制对 tau蛋白磷酸化作用的影响

研究HEK293T细胞中O?鄄GlcNAc糖基转移酶(OGT)基因表达抑制对与AD密切相关的tau蛋白磷酸化与糖基化修饰的影响．以OGT基因为靶点设计三段siRNA(OGT-siRNA_1～3),用脂质体的方法转染OGT-siRNA_1～3进入HEK293T细胞,通过RT-PCR检测OGT-siRNA_1～3对OGT mRNA的抑制．将pEGFP/OGT与OGT-siRNA_1～3共转染HEK293T细胞,24 h后在倒置荧光显微镜下观察各组GFP/OGT的表达,根据GFP/OGT的表达量来评价OGT-siRNA_1～3对OGT基因表达的抑制率．将筛选出的具有最佳沉默效果的OGT-siRNA与质粒pCI/ tau₄₄₁共转染HEK293T细胞,48 h后Western blot检测tau蛋白糖基化与磷酸化修饰的变化．OGT-siRNA₃在100 nmol/L的终浓度时对OGT基因的抑制效率最高．与Mock组相比,对OGT基因mRNA及蛋白质水平的抑制率分别可达80.0%与51.3%左右．OGT基因表达的下调使tau蛋白糖基化水平下降,而磷酸化水平增高,证实tau蛋白的糖基化负调节其磷酸化,葡萄糖摄入减少或代谢降低可能在AD的发生发展中起关键作用．     

野葛的组织培养和植株再生

野葛〔Ｐｕｅｒａｒｉａｌｏｂａｔａ（Ｗｉｌｄ．）Ｏｈｗｉ〕为豆科多年生缠绕藤本植物,分布遍及全国,主产南方［１］,可药食两用,其块根肥厚,富含淀粉、蛋白质、钙、磷、铁及脂肪酸等,还含有多种异黄酮类化合物,对治疗心绞痛、高血压、冠心病,抑制肿瘤等效果显...     

山西省野葛种质资源分布与植物学性状研究

了解山西省野葛种质资源的分布状况、群落组成以及植物学特性,为晋产野葛资源的挖掘、保护和可持续利用提供参考依据。对山西境内12个产地野葛的植物学性状及生长环境进行实地调查。结果表明,山西省野葛种质资源主要分布于晋南的中条山区域和晋北的太行山区域。从水平分布看,山西野葛主要分布于34°47'04.77″~39°31'05.23″N,110°30'17.80″~114°33'18.24″E;垂直分布介于730~1240 m之间,以海拔730~950 m最为常见。山西野葛生长的区域年均降水量介于400~800 mm之间,年均温度为6.8~14℃。山西野葛的群落组成较为单一,大部分伴随其生长的是较矮的灌木丛,少部分伴随有杨树、刺槐等。根据生态环境的不同,可将山西野葛大致分为疏林灌木型、河道草地型和砂质土壤型3种类型。     

葛藤与葛根中异黄酮类成分的比较

分析比较了野葛〔Ｐｕｅｒａｒｉａｌｏｂａｔａ（Ｗｉｌｄ．）Ｏｈｗｉ〕的藤（葛藤）和根（葛根）的主要异黄酮类活性成分。从葛藤中首次分离得到３个化合物,经化学方法和光谱鉴定,证实为大豆甙元（Ａ）、大豆甙（Ｂ）和葛根素（Ｃ）。采用双波长薄层扫描法测定葛藤与葛根中上述３种异黄酮化合物的含量,葛藤中大豆甙元、大豆甙和葛根素的含量分别为０．１９５％,３．９３３％和２．４８１％;葛根中则分别为０．０５９％,０．７１４％和４．３１５％。研究结果为葛藤新药源的开发利用提供了科学依据     

野葛内生真菌的分离、鉴定及体外细胞毒活性

目的:药用植物内生真菌是一类重要的微生物资源,其代谢产物有着广泛的生物学活性。该研究拟从野葛(Pueraria lobata(Willd.)Ohwi)中分离有细胞毒活性的内生真菌。方法:组织块改良法分离内生真菌;细胞毒活性测定采用Alamar blue法;结合形态学和分子生物学方法进行菌种鉴定。结果:获得的34株内生真菌中菌株KLBMP f0027对HepG2、HO-8910、NCI-H460、SGC-7901等细胞株均有显著活性,ID50分别为437.4、460.0、542.5、771.2。而且活性产物相对稳定,对温度、pH变化及蛋白酶不敏感。代谢过程研究显示菌株KLBMP f0027的活性产物合成与细胞生长属于部分耦联关系类型。形态学和ITS-rDNA序列分析鉴定菌株为Aspergillus ostianus strain KLBMP f0027。结论:野葛内生真菌A.ostianus strain KLBMP f0027可作为细胞毒活性候选菌株进行深入研究。     

野葛糖基转移酶PIUGT2蛋白原核表达及其适宜条件探讨

通过单因素试验分别研究温度和IPTG浓度对重组大肠杆菌BL21(DE3)/pProEXHTa-PIUGT2诱导表达野葛糖基转移酶PlUGT2蛋白量的影响。利用150 ml LB液体培养基培养重组大肠杆菌BL21(DE3),并优化发酵条件。结果表明,在温度20℃和IPTG浓度为0.75 mmol/L条件下,PIUGT2蛋白表达量最高。     

Mechanism of acid tolerance in a rhizobium strain isolated from Pueraria lobata (Willd.) Ohwi

The Rhizobium sp. strain PR389 was isolated from the root nodules of Pueraria lobata (Willd.) Ohwi, which grows in acidic (pH 4.6) yellow soil of the Jinyun Mountains of Beibei, Chongqing, China. While rhizobia generally have a pH range of 6.5-7.5 for optimum growth, strain PR389 grew in a liquid yeast extract - mannitol agar medium at pH 4.6, as well as in a pH 4.1 soil suspension, suggesting acid tolerance in this specific strain of rhizobium . However, at pH 4.6, the lag phase before vigorous growth was 40 h compared with 4 h under neutral conditions (pH 7.0). For PR389, the generation time after the lag phase remained the same at different pH levels despite the different durations of the lag phase. Except in the pH 4.4 treatment, the pH of the culturing media increased from 4.6, 4.8, 5.0, and 5.5 to neutral and slightly alkaline after 70 h of culture. Chloramphenicol was added to determine if protein production was involved in the increasing pH process. Chloramphenicol significantly inhibited PR389 growth under acid stress but had little effect under neutral conditions. Proton flux measured during a short acid shock (pH 3.8) revealed that this strain has an intrinsic ability to prevent H(+) from entering cells when compared with acid-sensitive rhizobia. We propose that the mechanism for acid tolerance in PR389 involves both intracellular and extracellular processes. When the extracellular pH is lower than pH 4.4, the cell membrane blocks hydrogen from entering the cell. When the pH exceeds 4.4, the rhizobium strain has the ability to raise the extracellular pH, thereby, potentially decreasing the toxicity of aluminum in acid soil.     

葛藤节肢动物类群结构动态

本文利用群落结构的有关指数(物种数S、丰富度指数R、多样性指数H、H'、D和DMc、均匀性指数J'、优势度指数d和优势集中性指数C)分析了葛藤节肢动物类群结构变化动态.结果表明,葛藤节肢动物类群丰富度和多样性一年中出现两个高峰,一个在五月下旬,一个在十一月上中旬,在第一个峰期,S,R,D,H',H和DMc的值依次为38.00,6.0205,0.9056,4.0205,3.8560和0.7207,在第二个峰期,上述指数依次为34.00,6.6661,0.9245,4.2124,3.6779和0.7808;均匀性在一至四月变化较剧烈,最大值0.8899出现在1月中旬,最小值0.5765出现在二月下旬,其它时间较为平稳;优势集中性和优势度指数的变化趋势一致,其高峰值出现在二月下旬至三月上旬.分析表明,多样性和优势集中性变化趋势往往相反,即物种越丰富,多样性越大,相应的优势集中性就越小,反之就大;均匀性与多样性关系密切,即群落多样性较高时均匀度变化较为平稳,反之,就剧烈.     

野葛离体培养生产异黄酮类化合物研究进展

野葛含有大量的异黄酮类化合物,其中葛根素是葛属植物特有药用成分。该文综述了野葛细胞和器官培养生产异黄酮类化合物的研究现状以及各种影响葛根素等异黄酮类化合物产生的因素,并评述葛根素的应用前景。     

Ethylene Production by the Kudzu Strains of Pseudomonas syringae pv. phaseolicola Causing Halo Blight in Pueraria lobata (Willd) Ohwi

Significant amounts of ethylene was produced by Pseudomonassolanacearum (all strains), P. syringae pv. phaseolicola (Kudzustrains isolated from Pueraria lobata) and Erwinia rhapontici(2 strains out of 22) out of 24 species, 3 subspecies and 38pathovars of plant pathogenic bacteria tested in yeast extract-peptonebroth. The bean strains of P. syringae pv. phaseolicola causinghalo blight in kindney bean plants did not produce ethylene.The Kudzu strains produced ethylene at a rate of 7 to 100?10^–9nl cell^–1 h^–1, which was 500 to 1,000 times higherthan that of P. solanacearum and several times higher than thatof Penicillium digitatum, the most potent ethylene producerknown among microorganisms. The presence of living cells was essential for ethylene productionby the Kudzu strains. The bacterium effectively produced ethylenefrom amino acids such as glutamate, aspartate and their amides.Although glucose and succinate were also good substrates forethylene biosynthesis, the rate of ethylene production was significantlysmaller than that with glutamate. Methionine, which is knownas the precursor of ethylene in plants, had no effect on ethyleneproduction by the bacterium. 1-Aminocyclopropane-1-carboxylicacid (ACC) also had no effect on ethylene production, and therewas not enough ACC in the bacterial cells to account for thehigh rate of ethylene production. Ethylene production from glutamatewas inhibited by n-propylgallate and EDTA, but not by aminoethoxyvinylglycine.These results indicate that ACC is not involved as an intermediatein the process of ethylene biosynthesis by the bacterium, suggestingthe presence of a pathway different from that of plant tissues. (Received September 4, 1984; Accepted October 27, 1984)     

野葛葡糖基转移酶PlUGTs的同源建模及其活性位点分析

本文对PIUGTs进行同源建模,并分析其与底物结合的构象及活性位点。通过SWISS-MODEL在线对P1UGTs进行模板预测和选择,运用Swiss—PdbViewer软件显示和优化,利用ACDLABS绘制糖基供体小分子（酶结合底物）,最后通过AutoDock_ADT进行分子对接,并分析PIUGTs酶与不同底物结合的整体构象及分析活性位点。研究结果表明PIUGT1、PIUGT2及PIUGT3均能得到较好的三级构象,并且PIUGT1、PIUGT2与三种底物均可进行较好对接,H18,R278,N359为PIUGTI与三种对接构象活性中心所共有的氨基残基;而G16,H17,V19,T148,N370,E374,E390为PIUGT2与三种对接构象活性中心所共有的氨基残基,但PIUGT3未能得到较好的对接构象。由此推测PIUGT1和PIUGT2均能合成葛根素．而PIUGT3不能催化葛根素的合成。