HCV全长NS3基因表达及在抗体检测中的应用

丙型肝炎病毒 (ＨＣＶ)是引起非甲非乙型肝炎的主要病原因子。被ＨＣＶ感染的病例中 ,超过 5 0 %以上会引起持续性感染、慢性肝炎 ,最终可能引起肝硬化和肝细胞癌[1] 。ＨＣＶ严重威胁人类健康 ,但目前对丙肝患者尚缺乏有效的治疗手段 ,因此 ,严格把好血源关 ,提高对丙肝患者检出的灵敏度 ,是阻止丙肝血源传播的有效手段。丙型肝炎病毒基因组为单股正链ＲＮＡ ,核苷酸长约 9.5ｋｂ ,仅含一个开放阅读框 ,翻译成一个大的聚蛋白前体 ,由宿主细胞信号肽酶和病毒蛋白酶加工成多个成熟蛋白。其中非结构蛋白ＮＳ3分子量为 70ｋＤ ,有丝氨酸蛋白酶…     

丙型肝炎病毒翻译及调控机制

丙型肝炎病毒（ｈｅｐａｔｉｔｉｓＣｖｉｒｕｓ,ＨＣＶ）是单股正链ＲＮＡ病毒,有单一阅读框架,编码约３０１０个氨基酸的病毒前体蛋白。ＨＣＶ基因组结构和病毒蛋白的亲疏水性与黄病毒相似,因此将其归于黄病毒科丙型肝炎病毒群［１］。与黄病毒不同的是,ＨＣＶ５′...     

CD81的分子生物学研究进展

ＣＤ８１是一种分子量为２６ｋＤ的四跨膜蛋白分子。在细胞膜上可与ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１９、ＣＤ２、ＣＤ８２、Ｌｅｕ１３、ＨＬＡ－ＤＲ和α３β１整合素等结合,调节跨膜信号转导。最近又证实ＣＤ８１可与丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）包膜糖蛋白Ｅ２结合,可能是ＨＣＶ感染靶细胞的受体蛋白。     

丙型肝炎病毒Core与NS3基因的不同融合方式及其表达

丙型肝炎病毒(简称ＨＣＶ)是危害人类健康的传染性疾病,预防该病的传播主要借助于ＨＣＶ血清学诊断来筛选献血员和检测临床标本。从国内外已分离到的ＨＣＶ株得知,ＨＣＶ核心蛋白(Ｃｏｒｅ)和非结构蛋白ＮＳ3含有较强的优势抗原表位,其相应的抗体出现早,阳性率高,已成为目前第二、第三代ＨＣＶ免疫诊断试剂的重要成份[1,2]。通常Ｃｏｒｅ蛋白和ＮＳ3蛋白分别用基因工程方法表达,然后作为固定化抗原,检测人体内ＨＣＶ的抗体。我们对Ｃｏｒｅ和ＮＳ3的两种不同组合方式及其表达的研究,对于发展新的ＨＣＶ诊断试剂很有帮助,现将结果报道如下。1…     

丙型肝炎病毒基因组的翻译及其产物的加工

丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）是一种单正链ＲＮＡ病毒,其５’非编码区（５’ＮＣＲ）是决定病毒蛋白表达的关键区。基因突变与报道基因表达技术研究表明５’ＮＣＲ有一内部核糖体进入位点（ＩＲＥＳ）。类似于微小ＲＮＡ病毒属。ＨＣＶＲＮＡ翻译成为一条多蛋白分子,对蛋白酶的裂解加工后形成１０余种结构和非结构蛋白。研究ＨＣＶＲＮＡ的翻译及产物加工,对ＨＣＶ及其抗原表达载体有重要意义。     

丙型肝炎病毒中国株非结构蛋白2~3部分基因cDNA克隆序列分析及表达

丙型肝炎病毒 (ＨｅｐａｔｉｔｉｓＣｖｉｒｕｓ,ＨＣＶ)是输血后和许多社区获得性非甲非乙肝炎的主要致病因子。ＨＣＶ为单股正链ＲＮＡ病毒 ,其基因组长约 9.5Ｋｂ ,编码区含一个大开放读码框架 ,编码 30 1 0 30 33氨基酸残基的多蛋白前体 ,经宿主蛋白酶和病毒蛋白酶加工成具有生物学功能的成熟蛋白。ＨＣＶ各区域的分布顺序是 :Ｃ Ｅ1 Ｅ2 ｐ7 ＮＳ2 ＮＳ3 ＮＳ4Ａ ＮＳ4Ｂ ＮＳ5Ａ ＮＳ5Ｂ[1] 。本文我们应用ＲＴ ＰＣＲ方法从ＨＣＶ患者血清中扩增编码病毒蛋白酶的非结构蛋白 (ＮＳ2 ＮＳ3)部分基因 ,对其核苷酸序列进行了分析 ,…     

猪瘟病毒兔化弱毒株cDNA片段的克隆及序列分析

猪瘟是猪最重要的传染病之一,往往给养猪业造成重大经济损失,猪瘟的病原为猪瘟病毒（ＨＣＶ）,属黄病毒科,瘟病毒属成员,其基因组为单股正链ＲＮＡ,长度为１２３ｋｂ,仅含有一个大的开放阅读框架,编码一个含３８９８个氨基酸残基（ＡＡ）的多聚前体蛋白［１,２］。目前已经定位的蛋白有５种,即Ｎｐｒｏ、Ｃ、Ｅ０、Ｅ１和Ｅ２,它们均由ＨＣＶＲＮＡ５′端所编码,除Ｎｐｒｏ外,其它４种均为ＨＣＶ的结构蛋白［３］。Ｎｐｒｏ为具有自我催化功能的蛋白水解酶,也是多聚蛋白Ｎ端的第一个蛋白水解酶,分子量为２３ｋＤ,Ｃ为构成…     

丙型肝炎病毒包膜糖蛋白的研究进展

本文概述了近年来利用体外表达系统对丙肝炎病毒（ＨＣＶ）包膜糖蛋白的翻译后加工、折叠、装配的研究进展。目前的研究表明：ＨＶＣＥ１、Ｅ２蛋白通过非共价键相连形成的异源二聚体代表了ＨＣＶ糖蛋白的天然构象;Ｅ１和ＥＡ２Ｃ末端的跨膜区能使其锚定于内质网;ＶＣ包膜糖蛋白在内质网中完成其加工及成熟的过程;分子伴侣及Ｅ１、Ｅ２蛋白 旁侧序列对形成天然ＨＣＶ包膜糖蛋白复合物起重要作用。     

丙型肝炎病毒NS3区研究现状

丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＮＳ３区是ＨＣＶ的核酶区,编码的ＮＳ３蛋白有血清蛋白酶、ＮＴＰ酶和ＲＮＡ解旋酶的活性,可影响ＨＣＶ的复制和增殖过程;而且ＨＣＶＮＳ３区还可以激发机体的细胞免疫应答。目前ＨＣＶＮＳ３区已成为研制抗ＨＣＶ药物和疫苗的靶基因区,本文就ＨＣＶＮＳ３区的研究现状进行了论述     

HSV—TK／GCV系统杀伤肝癌细胞的在体研究

目的和方法：将可产生含有ＨＳＶＴＫ基因逆转录病毒的包装细胞与ＢＥＬ７４０２肝癌细胞混合后,接种于裸鼠皮下,复制肝癌模型。确定ＨＳＶＴＫ基因转移后,给予动物注射ＧＣＶ,观察ＨＳＶＴＫ／ＧＣＶ系统基因治疗实验性肝癌的在体疗效。结果：在体条件下,逆转录病毒可将ＨＳＶＴＫ基因部分转导至肝癌细胞;ＧＣＶ作用后,ＴＫ＋中瘤细胞的生长受到明显抑制;电镜观察发现,ＧＣＶ杀伤ＴＫ＋肿瘤细胞的作用主要体现在细胞核;虽然组化染色分析表明ＴＫ基因转移效率只有１０％～３０％,但测量肿瘤体积显示ＨＳＶＴＫ／ＧＣＶ系统杀伤肝癌细胞的效果依然明显,故其作用机制可与“旁观者效应”有关。结论：ＨＳＶＴＫ／ＧＣＶ“自杀”基因系统有可能成为基因治疗肝癌的有效方法     

家蚕病毒的表面增强拉曼光谱研究

得到并分析了家蚕核型多角体病毒（ＢｏｍｂｙｘｍｏｒｉＮｏｃｌｅａｒＰｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓＶｉｒｕｓ缩写为ＢｍＮＰＶ）和质型多角体病毒（ＢｏｍｂｙｘｍｏｒｉｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃＰｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓＶｉｒｕｓ缩写为ＢｍＣＰＶ）包涵体（即核型多角体ＢｍＮＰＢ和质型多角体ＢｍＣＰＢ）在银胶溶液中的表面增强拉曼散射（ＳＥＲＳ）光谱。ＢｍＮＰＢ和ＢｍＣＰＢ通过氨基酸残基侧链的Ｓ原子、ＣＯＯ－（ＣＯＯＨ）和ＮＨ２（ＮＨ）基团以及蛋白质分子的Ｎ－末端与银表面相作用。Ｔｒｐ残基金部或大部处于疏水环境中。ＢｍＮＰＢ中蛋氨酸残基侧链的Ｓ－ＣＨ２和ＣＨ２－ＣＨ２链分别为扭曲和扭曲式构型。ＢｍＣＰＢ中的Ｓ－ＣＨ２和ＣＨ２－ＣＨ２链则分别属于反式和扭曲构型;Ｃ－Ｃ－Ｓ－Ｓ－Ｃ－Ｃ链为反式－扭曲－反式结构。     

两例丙型肝炎病毒(HCV)和乙型肝炎病毒(HBV)重叠感染者的HCV核心区cDNA序列分析

从临床肝病患者中选择两例ＨＣＶ和ＨＢＶ重叠感染者ＨＳＱ和ＳＺＨ,他们血清中的生化指标丙氨酸转氨酶（ＡＬＴ）持续异常,肝活检病理示有严重的肝损伤。在ＡＬＴ异常期,血清学检测结果为ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ阳性,抗ＨＣＶＩｇＧ（包括Ｃ２２、Ｃ３３ｃ）阴性,但套式ＰＣＲ检测ＨＣＶＲＮＡ阳性,核心区ｃＤＮＡ序列分析发现该区有１个密码子（ＧＧＣｎｔ３８５—３８７）缺失,对应缺失的氨基酸是甘氨酸（ＧＬＹ）,从血清学检测和序列分析结果推测,在ＨＣＶ和ＨＢＶ重叠感染中,ＨＢＶ和ＨＣＶ均可处于持续复制状态,抗ＨＣＶＩｇＧ抗体阴性可能是ＨＣＶ的多蛋白前体翻译和病毒颗粒装配受到ＨＢＶ干扰的结果。     

丙型肝炎病毒多表位抗原在恒河猴中的免疫应答及保护性试验

利用ＨＣＶ抗原多表位来研制ＨＣＶ疫苗是目前的一个新方向。本研　究利用ＨＣＶ的ＨＣＶ的５个保守表位串联,并加入破伤风类毒素上的一个Ｔ细胞激活位点,设计成　一个ＨＣＶ多表位抗原基因ＰＣＸ,在大肠杆菌中表达,用此蛋白免疫恒河猴,诱导猴体产生了较　高的抗体水平,滴度达１∶１０００以上,在免疫后的６０周抗体滴度仍达１∶４０以上。同时,在免　疫后６周用人ＨＣＶ阳性血清攻击猴子,免疫ＰＣＸ的猴子出现一过性ＡＬＴ升高,在攻击后三周内用　ＲＴ－ＰＣＲ检测到猴血清内ＨＣＶ的ＲＮＡ阳性。结果表明,免疫多表位的ＰＣＸ蛋白可以诱导机体产生　高水平的免疫应答。     

丁型肝炎病毒核酶及其应用

丁型肝炎病毒（ＨＤＶ）核酶是ＤＨＶ前体ＲＮＡ分子中一段能自我切割的ＲＮＡ序列,具有独特的二级结构,为ＨＤＶ双滚环复制所必需,通过抑制其活性可以控制ＨＤＶ感染。它又存在分子间切割活性,即反式切割作用,因而有可能应用于切割异源ＲＮＡ分子。本文就这些方面的研究进展作一综述。     

腹腔注射重组腺病毒诱导的免疫反应

为研究重组腺病毒接种实验动物后的免疫反应性,利用ＲＴ－Ｐ　Ｃ　Ｒ方法,从ＨＡＶ的ＲＮＡ中克隆了结构蛋白基因插入穿梭质粒ｐＸＣＸ２Ｎｏｔ　Ｉ,通过磷酸钙－ＤＮＡ共　沉淀技术,将复制缺陷型腺病毒载体与线形化的ｐＸＣＸ２－ＣＭＶ－ＨＡＶ共转染２９３细胞。一系列检测方法证明产生了重组腺病毒ｒＡｄＨＡＶ。纯化后的ｒＡｄＨＡＶ滴度为１×１０９ＴＣＩＤ５０／ｍＬ　,腹腔注射免疫昆明种小白鼠后,可诱导产生抗ＨＡＶ　ＩｇＧ和ＨＡＶ中和抗体。复制缺陷型腺病毒　可作为发展基因工程病毒疫苗载体的有效系统。     

HcNPV半胱氨酸蛋白酶,几丁质酶基因失活分析

将含有美国白蛾核型多角体病毒（Ｈｙｐｈａｎｔｒｉａ ｃｕｍｅａ ｎｕｃｌｅａｒ ｐｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓ ｖｉｒｕｓ,ＨｃＮＰＶ）半胱氨酸蛋白酶基因（ＣＰ）的自然和几丁质酶基因（ＣｈｉＡ）的片段克隆进ＰＣＲⅡ,构建了转移载体ｐＨｃＣＶｄｅｌ;将含有ＨｃＮＰＶ多角体蛋白全基因（ｐｏｌｈ）序列的片段插入到ｐＨｃＣＶｄｅｌ的ＥｃｏＲＩ位点,得到重组转移载体ｐＨｃＣＶｐｏｌｈ。通过重组转移载体与含有家蚕促     

用细菌/杆状病毒系统在昆虫细胞中表达GFP与HCV抗原融合蛋白

用细菌／杆状病毒（Ｂａｃ－ｔｏ－Ｂａｃ）系统在昆虫细胞中高效表达了绿色荧光蛋白（ＧＦＰ）与ＨＣＶ抗原的双功能融合蛋白,经ＥＬＩＳＡ测定和荧光显微镜观查证实,表达产物既能发射易于检测的绿色荧光,又具有ＨＣＶ的抗原活性,实现了用绿色荧光蛋白等分子标记抗原,为免疫诊断新方法的建立打下了理论基础．     

人类巨细胞病毒与人类肿瘤

人类巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）感染能导致多种细胞生物学特性的改变,通过分子病毒学及分子生物学方法在数种人类恶性肿瘤组织中检出ＨＣＭＶＤＮＡ和（或）基因产物。ＨＣＭＶ基因产物可通过激活细胞内多种因子基因,刺激原癌基因表达,抑制抗癌基因产物功能等多种途径干扰细胞生长,分化的调控机制,诱导细胞发生恶性变,ＨＣＭＶ持续感染可以增加受感染细胞恶性特征的表达,大量实验结果证实了ＨＣＭＶ的致癌潜能,揭示了ＨＣＭＶ在     

中国株丙型肝炎病毒（HCV）结构区蛋白在昆虫细胞中的表达及加工

利用杆状病毒表达系统在昆虫细胞中表达了完整的中国河北株丙丙型肝炎病毒结构蛋白。免疫印迹实验结果显示,表达产物中有一系列分子量不同、可以与ＨＣＶ抗体阳性病人血清反应的蛋白,表明结构蛋白被宿主细胞蛋白酶切割与加工,相应分别为２０ｋＤ的核心蛋白、３２ｋＤ糖基化的Ｅ１蛋白４０ｋＤ的未糖化的Ｅ２蛋白和７０ｋＤ糖基化的Ｅ２蛋白,另有８０ｋＤ及１００ｋＤ的两组前体蛋白。利用表达产物检测慢性ＨＣＶ感染者血清,发现     

HCV NS5A基因表达及其在血清学检测中的应用评估

人丙型肝炎病毒 (ＨＣＶ)感染可引起丙型肝炎、肝硬化和肝细胞癌[1] 。丙型肝炎病毒是单股正链ＲＮＡ病毒 ,基因组约长 9.5ｋｂ ,仅有一个开放阅读框 ,编码一个大的聚蛋白前体 ,由宿主蛋白酶和病毒编码的蛋白酶加工成多个成熟蛋白。非结构蛋白ＮＳ5Ａ分子量为 56ｋＤ/ 58ｋＤ。目前对ＮＳ5Ａ蛋白的功能尚不清楚 ,ＮＳ5Ａ蛋白可降低干扰素治疗效果[2 ] ;ＮＳ5Ａ蛋白含核定位序列 ,因此人们推测它在ＨＣＶＲＮＡ复制过程中可能起一定的作用[3～ 4 ] 。本研究在大肠杆菌中表达全长ＮＳ5Ａ蛋白 ,提纯后ＮＳ5Ａ蛋白能与大多数丙肝阳性血清起强烈…