黄连素作为核酸染料染色效果的探讨

目的:黄连素作为核酸染料与EB染色效果的比较。方法:通过不同种的提取工艺来提取黄连素,测定荧光光谱,选择合适的溶剂,进行琼脂糖凝胶电泳。结果:各种方法提取的黄连素都能够进行染色。结论:黄连素作为核酸染料染色效果低于EB,还有待进一步探讨。     

两种核酸染料染色效果的比较研究

用前染和后染两种不同的染色方法,研究比较SYBRGreenI和溴化乙锭(EB)两种核酸染料对凝胶中DNA的染色效果和灵敏度,及SYBRGreenI取代EB用于常规凝胶中核酸染色的可能性。结果表明,用前染法染色SYBRGreenI对琼脂糖凝胶中的核酸染色效果与EB相当;用后染法染色前者要优于后者,可显示5ng以下的DNA条带,在完全相同的操作条件下,其染色DNA条带背景清晰,灵敏度较高。因此,无致突变性新型染料SYBRGreenI可替代强致突变性染料EB用于检测凝胶中DNA片段大小、含量等,从而减少由于使用EB带来的环境污染和人体健康危害。     

影响琼脂糖凝胶电泳条带扭曲程度的因素

在不同的电压与载样量下,分别使用溴化乙锭（EB）与新型核酸染料GoldViewna II及GoldView对凝胶中的DNA进行染色,观察电泳条带扭曲程度,了解电压、载样量与核酸染料对琼脂糖凝胶电泳条带扭曲程度的影响.使用GoldViewna II染色,当电压≥10V/cm时,DNA条带的扭曲程度随载样量增大而加剧;当DNA载样量≥10ng时,DNA条带的扭曲程度随电压升高而加剧. 使用EB染色,仅当载样量≥50ng时,条带出现轻微扭曲,扭曲程度与电压无明显关系.结果表明使用GoldView染色,当电压不超过20V/cm或载样量不超过100ng时,DNA条带不扭曲.在琼脂糖凝胶电泳中,若要避免DNA条带扭曲干扰实验结果,使用GoldViewna II染色,若DNA载样量≥10ng,应控制电压≤5V/cm;使用EB染色,载样量应≤50ng;使用GoldView染色,可以使用20V/cm的电压缩短实验时间.     

间接核酸杂交方法的建立

建立了一种新的核酸杂交手段一间接核酸杂交方法,其突出的优点是用一种共同的核酸标记物就可检查不同的基因组或不同的基因。我们重组乙型肝炎病毒或EB病毒的核酸片段于噬菌体M_(13)mp8载体,以此重组的单链DNA为第一夹心层,用~(32)P标记的双链噬菌体DNA作为共同探针,检查乙型肝炎病毒和EB病毒的核酸,获得满意的结果。应用该法进行细胞内的原位杂交,检查细胞内存在的EB病毒基因效果亦佳。     

用碘标记核酸检查鼻咽癌上皮细胞中的EB病毒基因

用同位素碘化钠直接标记核酸。以细胞内原位杂交实验检查鼻咽癌上皮细胞中的EB病毒基因。共检查病理确诊的10例鼻咽癌活检标本的细胞涂片,其中9例直接证实有EB病毒核酸。本文建立并改进了细胞内原位核酸杂交技术,首先使用重组的单链DNA作探针,并将碘标记的核酸用于原位核酸杂交实验。     

核酸染料对DNA条带形态产生的影响分析

使用核酸染料对DNA片段进行前染色时,DNA条带会出现弯曲、变形、拖尾等现象。这些现象是由核酸染料造成的,并且与核酸染料的浓度及DNA的上样量成正相关,另外,还与分子量大小、琼脂糖凝胶的质量与浓度、电压相关。选择合适的核酸染料及染色方式可以减少DNA条带形态改变的概率,得到较好的电泳结果。     

分光光度法测定DNA或RNA含量

若样品纯度较高(即蛋白质、酚、琼脂糖或其他核酸的污染量不大),用紫外分光光度法即简便又准确。测定时,于260 nm与280nm两个波长下读数。通过260nm的读数可计算出样品中核酸的浓度,即10.D.260相当于50 μg/ml双链DNA,40μg/ml单链RNA或     

一种改进的快速Southern杂交方法

本文提出一种使用琼脂糖凝胶直接杂交的方法,结果准确、简单可行,是微量核酸、低拷贝基因鉴定以及疾病核酸诊断的一种较好方法。     

信息核糖核酸直接在琼脂糖凝胶上的原位杂交检测

核酸印迹法是已被广泛用于检测各种核酸分子及其片段的重要工具。直接在琼脂糖凝胶上做DNA分子杂交取得了很好的结果,但应用于RNA的原位杂交测定的报道还很少。我们用此方法检测了大鼠肝癌BERH-2甲胎蛋白信使核糖核酸,结果良好。现将方法介绍如下: (1) 将BERH-2细胞质总RNA(5—40微克,递     

EB病毒检测技术研究进展

EB病毒属于人类疱疹病毒Ⅳ型,是一种普遍存在的病原体,可以导致多种疾病。有效的EBV诊断对治疗选择和治疗监测有指导意义。目前实验室用于检测EB病毒的方法主要是血清学方法和核酸检测方法,血清学方法对于EB病毒感染相关疾病的诊断有着重要意义,但是不能监测疾病的发展与转归。核酸检测方法可以直观地反映病毒的存在,灵敏度高。不同的检测方法和标本类型都有着不同的临床意义和适用范围,因此对这些方法进行正确的选择非常重要。这篇综述介绍了目前常见的EB病毒检测方法的进展,详述了各种技术的优缺点,为临床选择适合的检测方法提供参考。