继代十七年的玉米花粉胚性细胞系的异常核和异常分裂观察

对继代１７年的玉米花粉胚性细胞系核形态和细胞分裂情况进行了观察分析,结果表明：随着继代培养时间的延长,异形核比率增加,异形核类型和异常分裂增多。分析认为异形核和异常分裂现象出现和增多是导致胚性细胞系分化率降低异形分化和非整倍体细胞产生的主要原因。并提出来自玉米农家种“八趟白”的部分胚性细胞系能长期保持倍性稳定和胚胎发生并再生,与不断挑选和继代培养中不加２,４－Ｄ有关。     

继代十七年的玉米花粉胚性细胞系的异常核和异常分裂观察

对继代17年的玉米花粉胚性细胞系核形态和细胞分裂情况进行了观察分析,结果表明:随着继代培养时间的延长,异形核细胞比率增加,异形核类型和异常分裂增多。分析认为异形核和异常分裂现象出现和增多是导致胚性细胞系分化率降低、异形分化和非整倍体细胞产生的主要原因。并提出来自玉米农家种“八趟白”的部分胚性细胞系能长期保持倍性稳定和胚胎发生并再生,与不断挑选和继代培养中不加2,4-D有关。     

球孢白僵菌继代培养中的菌落局变现象

通过球孢白僵菌两个野生型菌株及其单孢株在不同培养基、温度、湿度和光照条件下继代培养,结果产生3种不同类型的菌落局变.局变产生的分离子多表现为菌落瘩薄或气生菌丝陡长、产孢量下降、生长速率增加等现象.培养基、温度、湿度和光照等因素对菌落局变有明显诱导作用.湿度为15℃,相对湿度较低及全光照条件下于SDAY培养基上培养,局变发生频率最低.在实验室继代培养中,野生型菌株在4-14代内即可发生局变而被局变分离子所取代.引人注意的是,单孢株局变产生的分离子同时伴随着棕黄色或红棕色素的分泌,仅以菌落形态和颜色等培养特征作为球孢白僵菌种的划分依据是不可靠的.文中提出了菌落局变发生的遗传变异可能机制.     

普通小麦×栽培大麦杂种体细胞无性繁殖系建立

取小大麦杂种幼穗在含有2,4-D 2mg/l的N_6培养基上诱导出愈伤组织。在继代培养中不断产生胚状体和再生植株。经过筛选,N_6+KT1.0mg/l+IBA0.5mg/l和N_6+KT1.0mg/l+ZT0.1mg/l,为较好的继代分化培养基。培养近三年,继代23次,仍具有增殖分化能力。小植株移入土中均能成活及正常生长。     

伊贝母愈伤组织在继代培养过程中的染色体变异

在前文工作的基础上,本文继续对伊贝母愈伤组织在培养43天(继代1次)、122天(继代3次)、203天(继代5次)、279天(继代7次)、427天(继代11次)时的染色体变异情况进行了观察和分析,现将结果报道如下。     

党参的离体培养及植株再生的研究

在附加激素的MS培养基上,培养党参下胚轴和无菌芽切段,诱导产生愈伤组织并且再生植株。经过两年多(15个世代)的继代培养,建立了党参体细胞无性系。实验结果表明:(1)培养基MS 0.4mg/L 2,4-D 0.8mg/L Kt 2.0mg/L IAA对愈伤组织诱导及继代培养,MS 0.2mg/L 6-BA诱导外植体产生丛芽和愈伤组织再分化,MS 0.5mg/L NAA 0.2mg/L 6-BA及MS 0.2mg/L NAA诱导生根效果最好。(2)愈伤组织再分化经过胚状体途径。     

4℃保存的绵羊皮肤成纤维细胞的培养及冷冻

为了探讨利用死亡珍稀动物皮肤建立成纤维细胞库的方法,本研究采集幼龄绵羊耳廓皮肤,在4℃条件下保存0 h(对照组)、24 h、48 h和72 h后进行原代培养,达到85%汇合后再进行了继代培养或者经冷冻-复苏后继代培养。结果:(1)与对照组相比,各保存组皮肤成纤维细胞经原代培养后达到85%汇合时间滞后(分别为4 d和8d~15 d);(2)各保存组成纤维细胞经4代培养后,与对照组继代培养达到85%汇合时间相同(对照组继代培养第1~4代均为4 d);(3)原代培养成纤维细胞通过冷冻-复苏后经第2代培养,即可在4 d内均达到85%汇合。表明动物死亡后立即采取其耳廓皮肤并在4℃下保存一段时间后,经原代培养和继代培养,或经原代培养、冷冻-复苏和继代培养,可获得具有正常继代能力的成纤维细胞。     

继代培养的玉米花粉胚性细胞系的倍性及其染色体上组成异染色质变异

来源于八趟白的细胞系No.1,经过六年半继代培养,显示出随着继代培养时间的延长,染色体数目变异的频率减低,其单倍性愈趋稳定。尽管继代培养时间的延长并不影响这个细胞系倍性的稳定性,但却能引起单倍体细胞中第4和第9染色体上的组成异染色质发生显著变异。     

甜瓜离体再生继代培养中玻璃化现象的研究

为提高甜瓜离体培养的再生率和转基因效率,以优质甜瓜品种‘伽师瓜’(‘卡拉库赛’)离体再生不定芽为外植体,通过连续多代继代培养,对引起玻璃化苗现象的几个主要因素进行了研究。结果表明,在甜瓜离体再生继代培养中,外植体继代次数是影响玻璃化发生的主要因素,同时培养基中的6-BA浓度偏高、琼脂浓度偏低以及蔗糖浓度偏低或偏高等可导致玻璃化苗的增加。培养基中较低的6-BA浓度(0~0.2 mg/L),琼脂浓度为6 g/L,蔗糖浓度为25 g/L以及添加活性炭等措施可有效地降低甜瓜玻璃化苗的发生。     

烟草愈伤组织继代培养和分化期间蛋白质代谢的比较研究

柳叶烟草(Nicotiana tabacum L.)愈伤组织在分化和芽原基形成期间,与继代增殖培养物比较,蛋白质含量与蛋白水解酶活性均缓慢上升;组分Ⅱ(水溶性蛋白与酶蛋白)蛋白质和核糖体组蛋白的合成速率都明显高于继代培养物;分化组织中总核糖体水平,特别是执行蛋白质合成功能的多聚核糖体的构建也都高于继代培养物。显然,分化培养愈伤组织较继代培养物有更高的蛋白质合成作用;而且组织分化和芽原基形成所需合成的新蛋白组分是与继代增殖生长的不同。继代培养后期,蛋白水解酶活性迅速升高,多聚核糖体相对量与蛋白质合成速率均明显下降,蛋白质含量急剧降低,表现出继代培养物开始衰老的代谢特征。此时期的分化培养组织,随着芽原基的继续生长,虽然蛋白质合成速率、多聚核糖体水平与蛋白质含量较前期有所降低,但都明显高于同时期的继代培养愈伤组织。     

烟草愈伤组织继代培养与分化期间核酸代谢的比较研究

柳叶烟草愈伤组织在分化和芽原基形成期间,DNA 和RNA 含量均高于继代培养物;在芽原基形成后和幼芽生长期间(12天以后),DNA和RNA 含量持续上升,而同期继代培养物巳进入生长静止期,DNA 和RNA 含量基本不变或略有下降。根据RNA 电泳结果还进一步分析了两种愈伤组织培养物各RNA 组分变化与总RNA 含量变化的关系。分化培养物在芽原基形成时有明显升高的RNase 活性峰和持续上升的RNA 合成速率;而此时期继代培养物的RNase 活性及RNA 合成能力均较低;分化愈伤组织的DNA 合成速率在幼芽生长期间仍维持上升趋势,且显著高于同期继代愈伤组织的合成速率。这些结果表明,烟草愈伤组织分化培养物比继代培养物有更旺盛的核酸代谢能力。     

水翁悬浮细胞系的建立及其悬浮培养的生长特性

建立了水翁悬浮细胞系,并对其悬浮培养的生长特性作了初步探讨。以水翁新生芽尖作为外植体,接种于添加有不同浓度和配比的生长调节物质及各种附加物的MS固体培养基中,诱导培养产生初代愈伤组织;挑选Ⅰ和Ⅱ型的愈伤组织进行继代培养改良,考察愈伤组织的生长状况和统计生长量来决定最佳继代培养基的配方和得到适合悬浮培养的愈伤组织;将以上得到的愈伤组织转接于最佳继代液体培养基中,于24±1℃,120r/min条件下振荡培养,筛选分散度好、较均匀、生长快、色浅透明的细胞作为种子传代,数次传代后得到性能良好的悬浮细胞系;以细胞生长量(鲜重)为指标,绘制了水翁悬浮细胞的生长曲线。研究表明:2.0mg/L的2,4-D的诱导率最高(92%,初代愈伤组织为Ⅰ型),Ⅱ型愈伤组织的最高诱导率为75%;最佳的继代培养基配方为MS 0.5mg/L 2,4-D 0.5mg/L 6-BA 1.0mg/L IAA 0.5mg/L IBA 0.5mg/L NAA 0.1mg/L KT 700mg/L LH,形成Ⅱ型愈伤组织的生长量可达3.28g/瓶(鲜重);液体继代培养3代后,可得到性能良好的悬浮细胞系;水翁悬浮细胞的生长曲线表明,最佳接种期为培养后的16~18d。     

球孢白僵菌单孢子分离株在继代培养过程中菌落局变的遗传分析

研究了球孢白僵菌Beauveria bassiana单孢株继代过程中的菌落局变现象,并通过AFLP分析了角变子与原菌株间在分子水平上的差异。结果表明,野生型出发菌株Bb13的单孢分离株13S5和13S8在继代培养过程中均发生生长速率加快和产孢量下降现象。13S5在前5代,13S8在前6代产孢量有所下降但不显著,至第10代时产孢量比第1代分别下降了81.7%和69.0%。菌株角变现象在继代培养5-6代后表现明显,而13S8角变子出现的频率更高。AFLP指纹图谱分析表明,用20个引物组扩增出的98个位点中,两个角变子与野生型菌株间有12条差异条带,变异率达12.2%。由此证明单孢子分离株在继代培养中发生菌落局变后遗传物质已产生了变异。     

玉米胚性愈伤组织的长期继代及其染色体分析

对５种基因型幼胚诱导的愈伤组织继代培养表明,玉米胚性愈伤组织的长期继代受基因型,培养基成分,激素,培养条件的影响。适时继代,逐代筛选对胚性保持起重要作用。适当降低培养温度（１２±２℃）有利于愈伤组织的保存和胚性保持,可以减少愈伤组织长期继代所需的物质和工作量。长期继代培养的胚性愈伤组织,胚状体发生能力和植株再生率无显著变化,但正常苗的再生频率显著下降。观察愈伤组织细胞染色体发现：（１）基因型对不同倍性细胞的比例有明显影响。（２）随着继代时间的延长,二倍体细胞下降,四倍体和非二倍体细胞增多。（３）愈伤组织中出现多种染色体结构变异,这些结构变异有可能导致非整倍体细胞的形成。     

红叶椿腋芽增殖培养基的筛选

红叶椿具有极高的应用价值,但因其为单性雄株,只能进行无性繁殖,而常规无性繁殖方式又无法满足市场需求,因此组织培养才是其加快繁殖的有效方法。本试验就BA和NAA对红叶椿继代培养中组培苗的增殖系数和生长情况的影响进行了研究,从而筛选出最佳增殖培养基:1／2MS(大量元素) BA1．0 mg／L NAA0．01 mg／L或1／2MS(大量元素) BA0．5 mg／L NAA0．001 mg／L。     

利用组织培养对秦岭百合属植物的保种繁殖研究

通过组织培养的方法对秦岭野生百合属植物进行了保种繁殖研究。实验证明,在ＭＳ＋０．５ｍｇ／ＬＮＡＡ上可诱导云南大百合、秦岭麝香百合和川百合产生较多的小鳞茎,在ＭＳ＋０．５ｍｇ／ＬＮＡＡ＋０．１ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ上继代培养２０多次仍保持较强的活力和稳定的遗传性。而卷丹在ＭＳ＋１ｍｇ／ＬＮＡＡ上诱导产生小鳞茎,在ＭＳ＋０．５ｍｇ／ＬＮＡＡ＋０．１ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ上继代培养较好。结果表明,通过组织培养可以建立百合属植物的种质基因库。     

火炬松细胞悬浮培养体细胞胚胎发生的研究

用火炬松成熟合子胚诱导产生的胚性愈伤组织建立了胚性细胞悬浮系。研究了细胞密度,继代时间和ＡＢＡ浓度等对悬浮条件下胚性柄细胞团及体细胞胚形成的影响。结果表明：当细胞密度为６×１０＾３个／ｍｌ,继代时间为２个月,ＡＢＡ浓度为５ｍｇ／Ｌ时,最有利于ＥＳＭ及ＳＥ发生。在悬浮培养条件下,还观察到裂生胚及子叶原基的分化。     

秋水仙素诱导兰属'素心黄'多倍体的方法研究

采用继代培养法和侧芽萌动培养法比较秋水仙素诱导'素心黄'多倍体的效果.结果表明,继代培养法加倍效果较好,其诱导率为16.7%;细胞学鉴定表明,该方法诱导培育的植株具有多倍体表型特征,其体细胞染色体数2n=80,未见嵌合现象,而对照2n=40.     

红豆杉高产细胞系快速建立和更新的新方法

目的：通过优化培养基和培养条件,建立太行红豆杉速生细胞系,为红豆杉细胞工厂化生产提供原种细胞系和繁殖技术。方法：以太行红豆杉为材料,筛选B5、WPS、MS等3种培养基和6-卞基嘌呤（6-BA）、萘乙酸（NAA）、2,4-二氯苯氧乙酸（2,4-D）等3种激素组合,采用液体、半固体、纸桥共3种培养方法继代培养并筛选高产细胞系。结果：B5＋NAA（1.0mg/L）＋6-BA（0.5mg/L）＋2,4-D（1.0mg/L）为最适愈伤组织诱导培养基,诱导率达100%;B5＋NAA（1.0～1.5mg/L）＋2,4-D（1.5～2.0mg/L）＋6-BA（0.5mg/L）为最佳继代培养基,生长量最高可达0.30g/（g·d）（鲜重）。结论：初步建立了红豆杉细胞系快速建立和繁殖新方法,用半固体培养产生初代细胞系、液体培养将细胞系同步化、纸桥培养快速繁殖细胞系,并通过检测紫杉醇含量不断更新细胞系。该细胞系体系建立方法简单,纯化速度快,易更新,产物细胞系可作为工厂化生产的原种细胞系。     

三七的组织和细胞培养（简报）

在以6,7V为基本培养基,对云南产三七植株各部位进行愈伤组织诱导,其中以6,7V 2,4—D0.8mgL_(-1)为最佳培养基,愈伤组织再行继代培养后,筛出3个较优的无性系,首次获得粗根无性系,这个无性系经继代培养后其愈伤组织的生长速率和皂苷含量都高。