胡椒叶片基因组DNA提取方法比较

目的：研究建立胡椒叶片中提取高质量DNA的方法。方法：采用各种CTAB法和SDS法的改良方法,提取胡椒叶片中的总DNA,并对DNA进行紫外和电泳检测。结果：改良CTAB法4和5提取的DNA经电泳检测,有一条明亮主带,且无拖尾现象,样品槽无荧光出现,说明抽出的DNA纯度较高,一致性好;测定其OD260和OD280值,并计算其比值,OD260/OD280值在1.8-2.0之间,提取率在51.667-60.000μg/g之间,获得的基因组DNA质量高。结论：改良CTAB法4和法5可从胡椒幼叶中提取高质量DNA。     

香蕉枯萎菌基因组DNA提取方法的研究

以香蕉枯萎菌菌株为试验材料,在SDS～CTAB法和高盐沉淀法等基础上加以改进,对两种提纯香蕉枯萎菌基因组DNA的方法进行了比较研究。结果表明：高盐沉淀法是适合于香蕉枯萎菌基因组DNA提取的方法。该方法提取的DNA OD260／OD280的比值为1．841,DNA产量为0．81mgDNA／g菌丝体。基因组DNA经琼脂糖凝胶电泳得到一条带型较宽且清晰的DNA谱带,基本无DNA碎带;将提取的DNA直接用于PCR扩增,得到带多而且清晰、整齐、基本无拖尾的RAPD图谱。     

大青杨基因组DNA提取方法的比较

本研究采用改良SDS法、常规CTAB法和改良CTAB法(1.5×CTAB,2×CTAB,3×CTAB)提取大青杨基因组DNA,并用紫外光普分析、凝胶电泳、限制性内切酶消化和RAPD方法进行鉴定.结果表明:5种方法中,改良SDS法DNA提取率最高,但CTAB法比改良SDS法提取获得的DNA纯度高,OD260/OD280为1.73～1.81.与常规CTAB法比较,改良SDS法和改良CTAB法能有效去除蛋白、多糖、酚类及次生代谢物质.综合分析确定改良2×CTAB法为大青杨基因组DNA的最佳提取方法.     

小鼠胚胎胃肠道细菌基因组DNA提取方法比较

目的:筛选能均衡地提取小鼠胚胎胃肠道微生物区系各种细菌总DNA的方法.方法:分别采用反复冻融法、CTAB -SDS法、柱式基因组DNA提取试剂盒法提取小鼠胚胎胃肠道细菌基因组DNA,对其进行琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度计测定、PCR扩增等质量检测.结果:CTAB -SDS方法提取的基因组DNA纯度较高,OD260/OD280平均值最高,为1.845,电泳条带清晰,能满足下游的PCR扩增等分子操作.结论:确定CTAB -SDS方法为提取小鼠胚胎胃肠道细菌基因组DNA的最佳方法,为研究不同种动物胚胎的肠道菌群的结构和多样性奠定了基础.     

利用改良CTAB法快速小量提取微胚乳玉米基因组DNA

为了能快速小量提取微胚乳玉米基因组DNA,以微胚乳玉米幼叶为试材,采用改良CTAB法和传统CTAB法提取微胚乳玉米基因组DNA,并对所提取的DNA通过紫外分光光度计、琼脂糖凝胶电泳和PCR扩增等方法进行检测。两种方法所得基因组DNA的OD260/OD280在1.8~1.9之间,电泳条带清晰,无蛋白质和RNA污染,DNA无明显降解,其浓度和纯度都适合基因工程实验操作的条件。改良CTAB法与传统CTAB法相比更简便快捷,可实现大批量的不同样本基因组DNA的同时提取,提供了一种简便、快捷、有效和实用的微量提取微胚乳玉米基因组DNA方法,可满足以PCR为基础的分子生物学研究。     

棉花根际促生菌基因组DNA的提取及其鉴定

植物根际微生物基因组的提取往往因为细胞壁不能完全裂解以及内含物的成分和含量受到影响,获得完整的基因组DNA一直是土壤微生物分子生物学研究的关键。本文以新疆盐碱地棉花根际促生菌为材料,比较了SDS法、CTAB法以及高盐结合的CTAB法提取棉花根际促生菌基因组DNA的效率,结果显示,SDS法和CTAB法在细胞裂解后,由于过多的多糖类物质混于上清液中使其过于粘稠而无法分层,没能得到DNA样品。高盐结合的CTAB法则有效弥补了上述方法的不足,能够获得A260/A280为1.82、A260/A230为2.43的高质量基因组DNA。同时实验还以细菌16SrDNA为内标进行PCR扩增,结果证明所获得的棉花根际促生菌基因组DNA可直接用于PCR等分子生物学进一步研究。     

烟草种质资源AFLP分析中DNA模板的制备

采用CTAB法和SDS法提取烟草基因组DNA,经检测表明,CTAB法提取的基因组DNA纯度高于SDS法;CTAB法提取的DNA,其OD₂₆₀/OD₂₈₀值均高于1.8,相对分子量23kb左右,且能完全被EcoRⅠ和MseⅠ酶切消化,并能获得清晰的AFLP指纹图谱。     

顽拗植物龙眼基因组DNA提取方法的研究

为从顽拗植物龙眼(Dimocarpus longan Lour.)叶片中获得可供后续分子生物学操作的基因组DNA．针对其组织细胞内富含多酚、多糖、单宁及色素等物质的特点,采用改进的CTAB法和SDS法,即在核裂解之前先破碎细胞．将存在于细胞质中的次生物质去除后再裂解细胞桉．结合其它一些改进措施．提取到的DNA沉淀呈纯白色．极易溶解于TE中。两种改进方法的OD260和OD280比值分别达到1.82和1．73,其鲜叶基因组DNA产量分别为103ug/g和127ug／g：RAPD扩增条带清晰,丰富．完全满足后续分子生物学操作的要求,其中改良CTAB方法效果更为理想,与之埘比．传统的CTAB法和SDS法提取到的DNA沉淀呈浅黄色甚至红褐色,很难被TE溶解,其OD260和OD280比值均低于1．5,也得不到扩增产物。     

1种小麦白粉病菌DNA基因组的微量简捷提取方法

为了寻找适合小麦白粉菌基因组DNA微量提取的方法,分别采用改进破壁法,液氮研磨法和溶菌酶消化法进行破壁,提取专性寄生菌小麦白粉菌DNA。结果表明,用改进的破壁方法,仅用3~10 mg的分生孢子粉所获得DNA的收率为（12.23±3.46）~（40.32±5.67）ng/mg,且OD260/OD280比值为1.71~1.92之间,说明该破壁方法获得的DNA收率大且纯度高。通过PCR反应获得了良好的效果。同时该方法也适用于小麦条锈菌和大麦白粉菌专性寄生菌DNA的提取。     

适合于胞质基因组扩增的红麻成熟叶片DNA提取改良方法

为了从成熟红麻叶片中提取高质量、高产量的基因组DNA,针对红麻成熟叶片中多糖、多酚含量较高的特性,利用改良CTAB法及改良SDS法分别提取红麻品种福红952成熟叶基因组DNA,并通过琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计测定进行DNA质量检测。结果表明:改良CTAB法提取的基因组DNA电泳时点样孔干净,条带整齐无拖带,OD260/OD280为1.9左右,产率可达1.84μg/g,其质量、产量都高于改良SDS法,所提取的DNA可用于红麻RAPD分子标记、线粒体DNA、叶绿体DNA通用引物PCR扩增。改良CTAB法是提取成熟红麻叶片DNA的有效方法,并且可用于红麻分子标记及胞质基因组学研究。     

煮沸裂解法和试剂盒法提取浸矿菌基因组DNA的比较

目的:在生物浸出中,微生物群落结构分析有着重要意义,而群落分析的基础是提取纯度高、损失少的基因组DNA。为了解决这一问题,本实验通过比较两种较常用的DNA提取方法,煮沸裂解法和试剂盒法,寻找一种灵敏、快速、经济实用的制备浸矿细菌基因组DNA的方法。方法:分别用煮沸裂解法和试剂盒法提取6种浸矿菌的基因组DNA,从所提取的基因组DNA浓度、纯度、回收率和对PCR扩增反应的影响方面比较了两种方法的提取效果;用两种方法来处理不同浓度梯度的一种菌,通过实时定量PCR来比较两种方法的灵敏性。结果:相同处理量(108个)的革兰氏阳性菌(1株)、革兰氏阴性菌(4株)、古菌(1株)经两种方法提取的基因组DNA差异较大,煮沸裂解法所得的6组基因组DNA更纯,其OD260/OD280的值更接近1.8-2.0(纯DNA的OD260/OD280在1.8-2.0之间),前者所提DNA回收率最大可达后者的16.7倍;煮沸裂解法只需较少菌(102个)便能让实时定量PCR检测到所提DNA模板浓度,比试剂盒法灵敏。结论:两种方法提取的基因组DNA均可用于后续的PCR扩增,此外,前者提取的DNA浓度随细菌浓度增加而呈线性增大,而后者随菌浓度增大,所提DNA量增加有限,因此,在生物浸出中微生物基因组DNA的提取可直接采用简单快速的煮沸提取法,为实验节约成本和时间。     

煮沸裂解法和试剂盒法提取浸矿菌基因组DNA的比较

目的：在生物浸出中,微生物群落结构分析有着重要意义,而群落分析的基础是提取纯度高、损失少的基因组DNA。为了解决这一问题,本实验通过比较两种较常用的DNA提取方法,煮沸裂解法和试剂盒法,寻找一种灵敏、快速、经济实用的制备浸矿细菌基因组DNA的方法。方法：分别用煮沸裂解法和试剂盒法提取6种浸矿菌的基因组DNA,从所提取的基因组DNA浓度、纯度、回收率和对PCR扩增反应的影响方面比较了两种方法的提取效果;用两种方法来处理不同浓度梯度的一种菌,通过实时定量PCR来比较两种方法的灵敏性。结果：相同处理量（108个）的革兰氏阳性菌（1株）、革兰氏阴性菌（4株）、古菌（1株）经两种方法提取的基因组DNA差异较大,煮沸裂解法所得的6组基因组DNA更纯,其OD260／OD280的值更接近1．8-2．0（纯DNA的OD260／OD280在1．8—2．0之间）,前者所提DNA回收率最大可达后者的16．7倍;煮沸裂解法只需较少菌（102个）便能让实时定量PCR检测到所提DNA模板浓度,比试剂盒法灵敏。结论：两种方法提取的基因组DNA均可用于后续的PCR扩增,此外,前者提取的DNA浓度随细菌浓度增加而呈线性增大,而后者随茵浓度增大,所提DNA量增加有限,因此,在生物浸出中微生物基因组DNA的提取可直接采用简单快速的煮沸提取法,为实验节约成本和时间。     

SDSC-TAB和高盐沉淀法提取香蕉枯萎病菌基因组DNA的比较

以香蕉枯萎病菌菌株为试验材料,采用SDS- CTAB法和高盐沉淀法提纯香蕉枯萎病菌基因组DNA。结果表明:高盐沉淀法是适合于香蕉枯萎病菌基因组DNA提取的方法。该方法提取的DNAOD2 60 2 80值显示产物纯度较高;经琼脂糖凝胶电泳得到一条带型较宽且清晰的DNA谱带,DNA浓度较高,基本无DNA碎带;不用RNase处理,已无RNA的干扰,无需任何纯化处理即可用于PCR扩增和RAPD分析。同时对DNA提取过程中的细节问题进行了探讨与分析。     

香菇基因组高分子量DNA的提取

介绍了一种简便快速提取香菇基因组DNA的方法,该法是对提取真菌DNA的SDS和CTAB法进行改进而成,经过修改后的SDS-CTAB法可在较短时间内高效地提取香菇基因组总DNA.制备物经琼脂糖凝胶电泳检测到大于20kb的DNA主带,基本无DNA碎带;OD260/280值显示产物纯度高,完全符合AFLP分析的要求。     

介绍一种简单高效的植物总RNA提取方法

在液氮中研磨小麦幼叶和不同发育时期的种子,经含0.1% SDS和0.1%十二烷基肌氨酸钠(LDS)的尿素缓冲液裂解后,醋酸钠和氯仿沉淀变性蛋白质,异丙醇沉淀核酸,溶解后经2.5mol/L LiCl沉淀总RNA,洗涤后就可得到高质量的总RNA,其OD260/OD280 为2.05~2.10,28S和18S RNA带清晰,叶片总RNA还可得到23S和16S RNA带,产率可达5mg RNA/10g材料。当使用含1% SDS和1% LDS的尿素缓冲液裂解材料时,则可用于DNA的分离提取,其分子大小可达50~100kb以上。 Abstract:Wheat leaf and seeds at different development stages had been squashed in liquid nitrogen,then lysised by urea buffer which contains 0.1% SDS and 0.1% LDS,denatured protein had been removed by NaAc and chloroform precipitation,total RNA was further purified by LiCl.The RNA we obtained had sharp bands of 28S and 18S after agarose gel electrophoresis,23S and 16S RNA bands can also be seen clearly in leaf RNA extract,the value of OD260/OD280 of RNA was 205~210.5mg RNA can been isolated from 10g leaf of wheat.This method can also been used in high molecular weight DNA isolation but the concentration of SDS and LDS must be increased to 1%.     

一种适用于PCR反应的酵母菌、无绿藻及丝状真菌DNA提取方法

目的 介绍一种从酵母、无绿藻及丝状真菌中提取DNA以用于PCR反应的方法。方法 所用菌种包括临床分离的未知菌株和保藏菌株共23株：未知酵母菌（5株）、真皮毛孢子菌（1株）、糠秕马拉色菌（1株）、季也蒙念珠菌（5株）、未知丝状真菌（6株）、无绿藻（1株）、烟曲霉（2株）、拟青霉菌（1株）、茎点霉（1株）。用溶细胞酶（lyticase）结合Biospin真菌基因组DNA提取试剂盒提取基因组DNA,A260／A280检测纯度并计算质量浓度,用真菌通用引物ITS1／ITS4扩增真菌核糖体基因（rDNA）内转录间区ITS基因,经PCR扩增检验所提取的DNA质量。结果 成功提取所有23株真菌基因组DNA,其纯度及质量浓度能满足PCR反应的要求。结论 用溶细胞酶结合Biospin真菌基因组DNA提取试剂盒从酵母菌、无绿藻及丝状真菌提取的DNA可用于PCR反应。     

一种快速提取基因组DNA的方法

采采用氧化硅超顺磁性纳米磁珠和自己设计的试剂体系及提取流程,建立了一种基因组DNA的快速提取方法,该方法以氧化硅磁珠为固相吸附载体,盐酸胍、 -巯基乙醇和SDS为主要裂解吸附试剂。以全血或培养细胞为实验材料进行基因组DNA的提取结果显示用本文建立的方法提取100 L小鼠抗凝血,可得2～3 g基因组DNA, OD260/OD280为1.8 ± 0.05,其纯度可满足后续的酶切和PCR生物操作要求。该方法整个提取过程只需12分钟,不需特殊实验条件同时可省略蛋白酶K的消化过程和离心操作,适用于一般实验室的需求,是一种操作简便、快速高效的提取方法。     

植原体DNA提取方法的改良

在总结多种植原体DNA提取方法的基础上 ,发展了一种提取植原体DNA新方法。用此方法提取的DNA经琼脂糖凝胶电泳检测到大于 15kb的DNA主带 ,基本无DNA碎带 ,不用RNase处理 ,也无RNA干扰 ,OD2 60 / 2 80 值显示产物纯度较高 ,无需任何处理 ,即可以作为模板扩增     

一种同时提取水稻土壤中细胞外和细胞内形态DNA的方法

采用灭菌的水稻田土壤为基质,分别投加细菌基因组DNA和细菌活体,应用该方法提取细胞内和细胞外DNA。结果表明,DNA提取效率平均在75.4%-82.3%,DNA纯度OD260/280在1.75-1.85之间。用细菌16S rDNA通用引物PCR表明,DNA纯度能满足PCR要求,细胞内DNA与细胞外DNA互不污染。