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高盐沉淀CTAB法提取温室菊花基因组DNA 总被引:4,自引:0,他引:4
根据温室菊花植物组织富含多酚、多糖的具体特性,对CTAB法加以改进:在待沉淀液中加入1/2体积5 mol·L~NaCI.改进后的方法获得的DNA质量良好,电泳条带清晰,提取过程无明显的DNA降解,基本上排除了多酚物质的干扰.以提取的DNA为模板,用一对引物扩增菊花中18S基因,得到条带单一,大小与已知一致,说明获得的DNA可以进行PCR扩增,EcoR I 酶切基因组DNA图谱表明,提取的DNA能被限制性内切酶完全酶切,可以满足相关的分子生物学研究. 相似文献
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苎麻总DNA提取的CTAB法优化方案 总被引:17,自引:0,他引:17
根据苎麻组织自身含有较多的本分类,粘状物及黄酮类等次生代谢物质的特点,对CTAB法进行优化后用于提取苎麻组织总DNA。在研磨过程中加入抗氧化剂PVP,提取缓冲液加入终浓度6%的PVP和4%的β-巯基乙醇,可防止整个提取过程中溶液变褐;在第2次用氯仿/异戊醇抽提时,加入10%的CTAB和4%的NaCl高盐溶液,以除去多糖。经几种改良方案提取总DNA的ISSR-PCR扩增结果验证,以同时加入抗氧化剂和高盐溶液的CTAB-4法效果最好。 相似文献
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应用改良CTAB法提取树莓DNA最佳条件的探索 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:改良CTAB法提取三种树莓叶DNA最佳条件的探索及检测DNA的完整度。方法:通过改良CTAB法提取树莓叶三个品种的基因组DNA。结果:经检测,所提样品OD260/OD280值在1.6~1.9之间,得率为198~396ng/μl,电泳条带较清晰,无明显拖尾现象;提取最佳条件为水浴时间90min、CTAB抽提液浓度3%时,发现DNA完整性较好、纯度较高,可以满足相关的分子生物学研究需要。结论:该研究可以为树莓叶分子生物学的后续研究的开展奠定实验基础。 相似文献
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应用CTAB法对砂梨品种DNA提取效果的研究 总被引:4,自引:0,他引:4
为了获得质量较好的DNA,我们采用CTAB法对11个砂梨品种的叶片DNA提取情况进行了研究,发现参试样品中一些样品的蛋白质含量较多,而另外一些样品的多糖、酚类物质含量较高。对于蛋。白质含量较多的这类材料,适当增加24:1的处理次数能够使蛋白质沉淀下来;对于多糖、酚类物质含量较高的材料,用5mol/L的NaCl和3mol/L的NaAc等处理能够有效的降低多糖含量。另外,对研磨样品的加入量和PVP的加入时间进行了对比,最后用双酶切、电脉检测等不同的分析方法对所得到的DNA提取物的浓度和纯度进行检测,发现加入样品量在0.3g左右、在研磨后的粗提液中加入PVP,所得到的DNA质量较好. 相似文献
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植物根际微生物基因组的提取往往因为细胞壁不能完全裂解以及内含物的成分和含量受到影响,获得完整的基因组DNA一直是土壤微生物分子生物学研究的关键。本文以新疆盐碱地棉花根际促生菌为材料,比较了SDS法、CTAB法以及高盐结合的CTAB法提取棉花根际促生菌基因组DNA的效率,结果显示,SDS法和CTAB法在细胞裂解后,由于过多的多糖类物质混于上清液中使其过于粘稠而无法分层,没能得到DNA样品。高盐结合的CTAB法则有效弥补了上述方法的不足,能够获得A260/A280为1.82、A260/A230为2.43的高质量基因组DNA。同时实验还以细菌16SrDNA为内标进行PCR扩增,结果证明所获得的棉花根际促生菌基因组DNA可直接用于PCR等分子生物学进一步研究。 相似文献
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利用改良CTAB法快速小量提取微胚乳玉米基因组DNA 总被引:2,自引:0,他引:2
为了能快速小量提取微胚乳玉米基因组DNA,以微胚乳玉米幼叶为试材,采用改良CTAB法和传统CTAB法提取微胚乳玉米基因组DNA,并对所提取的DNA通过紫外分光光度计、琼脂糖凝胶电泳和PCR扩增等方法进行检测。两种方法所得基因组DNA的OD260/OD280在1.8~1.9之间,电泳条带清晰,无蛋白质和RNA污染,DNA无明显降解,其浓度和纯度都适合基因工程实验操作的条件。改良CTAB法与传统CTAB法相比更简便快捷,可实现大批量的不同样本基因组DNA的同时提取,提供了一种简便、快捷、有效和实用的微量提取微胚乳玉米基因组DNA方法,可满足以PCR为基础的分子生物学研究。 相似文献
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提取得到高质量的DNA样品是进行分子生物学研究的必要前提。为了找到一种适用于提取涡虫基因组DNA的常规方法,我们以东亚三角头涡虫为材料,分别用改良的CTAB法、SDS法、SDS-蛋白酶K法对涡虫的基因组DNA进行了制备,并对3种方法制备的涡虫基因组DNA进行了检测与比较。根据比较结果,我们认为改良的CTAB法最适合于涡虫基因组DNA的快速制备,为涡虫的分子生物学研究打下了基础。 相似文献
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大花蕙兰基因组DNA提取及RAPD反应条件探索 总被引:10,自引:0,他引:10
用SDS、CTAB和改良CTAB法分别提取大花蕙兰叶片基因组DNA,发现以改良CTAB法提取的DNA纯度高,产率也较高。以5’-GGTGCTCCGT-3(’BA440)为随机引物,并以大花蕙兰品‘种金杯(’Cymbidiumhybridiumcv.HiroshimaGoldenCu“pSunnyMoon”)的DNA为模板,对RAPD(RandomAmplifiedPolymorphicDNA)反应体系进行了优化研究,结果表明,25μl反应体系中,Mg2 、TaqDNA聚合酶、引物、模板DNA和dNTP5种主要成分的适宜浓度或用量分别是:2.0mmol/L、1.0U、0.20μmol/L、25ng和0.20mmol/L。扩增程序优化为:94℃预变性4min;94℃变性0.5min,37℃退火1min,72℃延伸1min,40个循环;最后72℃延伸7min。 相似文献
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本研究采用改良SDS法、常规CTAB法和改良CTAB法(1.5×CTAB,2×CTAB,3×CTAB)提取大青杨基因组DNA,并用紫外光普分析、凝胶电泳、限制性内切酶消化和RAPD方法进行鉴定.结果表明:5种方法中,改良SDS法DNA提取率最高,但CTAB法比改良SDS法提取获得的DNA纯度高,OD260/OD280为1.73~1.81.与常规CTAB法比较,改良SDS法和改良CTAB法能有效去除蛋白、多糖、酚类及次生代谢物质.综合分析确定改良2×CTAB法为大青杨基因组DNA的最佳提取方法. 相似文献
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以刺参为试验材料,分别以CTAB法、SDS法、Segama试剂盒法对刺参的触手、管足、体壁、纵肌、肠和呼吸树组织进行基因组DNA的提取,均得到了高质量的基因组DNA。Segama试剂盒提取DNA条带较其他两种方法清晰,杂质少且无降解,效果最佳。对比6种不同的刺参组织,其中纵肌组织3种方法均获得高质量基因组DNA,为提取基因组DNA的首选组织。开发了利用刺参触手和管足活体取样提取基因组DNA的方法,得到了高质量的基因组DNA,这为刺参无损伤取样提供了数据支持,使得将来刺参家系建立过程中保证亲体的健康存活及减少试验样品取样所带来的损伤成为可能。 相似文献