GM3抑制人白血病J6－2细胞肌醇磷脂代谢循环

采用无载体 ³²P和[ ³H]肌醇标记磷脂,观察了促分化剂神经节苷脂GM₃对人单核样白血病J6-2细胞肌醇磷脂代谢的影响.GM₃抑制[ ³²P]Pi和[ ³H]肌醇掺入J6-2细胞磷脂酰肌醇(PI),促进[ ³²P]Pi和[ ³H]肌醇掺入磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸(PIP₂),抑制[ ³²P]Pi掺入磷脂酸(PA),抑制[ ³H]肌醇掺入三磷酸肌醇(IP₃).GM₃的上述作用均为浓度依赖性的,随GM₃浓度的提高而增强.上述结果表明,GM₃抑制J6-2细胞的肌醇磷脂代谢循环.     

神经节苷脂GM3对人白血病J6—2细胞磷脂酰胆碱代谢的影响

神经节苷脂ＧＭ３诱导人单核样白血病Ｊ６－２细胞沿单核／巨噬细胞途径分化。在ＧＭ３诱导分化同时,Ｊ６－２细胞磷脂代谢发生了显著变化。采用（＾３２Ｐ）Ｐｉ、［ＧＨ３－＾３Ｈ］胆碱和［ＣＨ３－＾３Ｈ］ＳＡＭ参入实验对ＧＭ３影响Ｊ６－２细胞ＰＣ代谢的机制进行了初步的探讨。ＧＭ３促进［＾３２Ｐ］Ｐｉ参入Ｊ６－２细胞ＰＣ;抑制［ＣＨ３－＾３Ｈ］胆碱参入ＰＣ及ＰＣ合成的前体磷酸胆碱及ＣＤＰ－胆碱;ＧＭ３促进［Ｃ     

神经节苷脂GM_3对人白血病J6－2细胞磷脂酰胆碱代谢的影响

神经节苷脂ＧＭ３诱导人单核样白血病Ｊ６－２细胞沿单核／巨噬细胞途径分化．在ＧＭ３诱导分化同时,Ｊ６－２细胞磷脂代谢发生了显著变化．采用（（３２）Ｐ）Ｐｉ、［ＧＨ３－３Ｈ］胆碱和［ＣＨ３－３Ｈ］ＳＡＭ参入实验对ＧＭ３影响Ｊ６－２细胞ＰＣ代谢的机制进行了初步的探讨．ＧＭ３促进［（３２）Ｐ］Ｐｉ参入Ｊ６－２细胞ＰＣ;抑制［ＣＨ３－３Ｈ］胆碱参入ＰＣ及ＰＣ合成的前体磷酸胆碱及ＣＤＰ－胆碱;ＧＭ３促进［ＣＨ３－３Ｈ］ＳＡＭ参入ＰＣ,但抑制［ＣＨ３－３Ｈ］ＳＡＭ参入ＰＣ合成的前体胆碱、磷酸胆碱和ＣＤＰ－胆碱．上述结果提示,ＧＭ３抑制Ｊ６－２细胞ＰＣ合成的ＣＤＰ－胆碱途径,促进ＰＣ合成的ＰＥ甲基化途径．     

神经节苷脂GM_3对J6－2细胞蛋白质磷酸化的影响

通过研究神经节苷脂ＧＭ＿３对国人单核样白血病细胞系Ｊ６－２细胞蛋白质磷酸化的影响,在［γ－￣３２Ｐ］ＡＴＰ,ＧＭ＿３,ＡＴＰ,Ｍｇ￣（２＋）与Ｊ６－２细胞液及颗粒两部分共同反应,１Ｏｍｉｎ（３０℃）体系中,观察到ＧＭ＿３对两部分蛋白质磷酸化的调节作用。ＧＭ＿３（１００μｍｏｌ／Ｌ）促进颗粒部分分子量为１８００００,８７０００,７８０００,６７０００,４３０００及３１０００的蛋白质磷酸化,促进胞液部分分子量为８７０００及５６０００的蛋白质磷酸化,而且能抑制７００００及４３０００蛋白质磷酸化。由于ＧＭ＿３已被前人证实能对Ｊ６－２细胞起分化作用,其作用时间长达４－６ｄ,很可能ＧＭ＿３对蛋白质磷酸化作用的调节是ＧＭ＿３促分化作用的早期信号。     

神经节苷脂GM_3对人单核样白血病J6-2细胞中磷脂代谢的影响

用50μmol/L GM_3处理J6-2细胞6天,经组化与细胞学检查,证实细胞沿单核巨噬细胞途径分化。以[~(32)P]Pi或[CH_3-~(14)C]胆碱冲激(Pulse)后,将洗净的细胞进行Folch分配。取下相进行薄层层析,再做放射自显影。结果表明:GM_3的处理能促进[~(32)P]Pi或[CH_3-~(14)C]胆碱向磷脂酰胆碱的参入,而抑制向其他磷脂组分的参入。用[CH_3-~(14)C]胆碱冲激的Folch分配上相含水溶性胆碱代谢物,经TLC,结果表明CM_3的处理使[CH_3-~(14)C]胆碱向CDP-胆碱的参入减少。本研究证实,GM_3能调节J6-2细胞的磷脂代谢,其调节机制值得研究。     

GM_3对小鼠腹腔巨噬细胞磷脂代谢转换率的影响

神经节苷脂ＧＭ_３对小鼠腹腔常驻巨噬细胞（Ｒ－Ｍ）和Ｇｅ－１３２体内激活的巨噬细胞（Ｇｅ－１３２－Ｍ）的磷脂代谢转换有显著的影响,当这两种Ｍ在体外用ＧＭ_３处理时,表现出［￣（３２）Ｐ］Ｐｉ和［￣３Ｈ］肌醇参入ＰＩ降低,参入ＰＩＰ、ＰＩＰ_２增加;但在［￣（３２）Ｐ］Ｐｉ和［￣３Ｈ］胆碱参入ＰＣ上,Ｒ－Ｍ与Ｇｅ－１３２－Ｍ不同,即ＧＭ_３促进同位素前体参入Ｒ－Ｍ的ＰＣ,抑制它们参入Ｇｅ－１３２－Ｍ的ＰＣ．以上结果表明ＧＭ３可能提高了ＰＩ或ＰＩＰ的磷酸激酶的活性,致使［￣（３２）Ｐ］ＰＩＰ和［￣（３２）Ｐ］ＰＩＰ_２增多,［￣（３２）Ｐ］ＰＩ减少．激活的Ｍ（Ｇｅ－１３２－Ｍ）本身ＰＣ代谢转换率较Ｒ－Ｍ高,当Ｇｅ－１３２－Ｍ再受ＧＭ_３刺激,ＰＣ代谢转换率降低,这提示ＧＭ_３对激活的Ｍ的ＰＣ代谢转换有调节作用．     

神经节苷脂GM_3对人白血病J6-2细胞PKC转位及DAG含量的影响

应用SDS PAGE及Western印迹技术检测神经节苷脂GM3 处理前后人白血病J6 2细胞不同类型PKC在细胞内的转位情况 ,同时利用高效薄板层析技术观察了细胞内DAG含量的变化 ,从而探讨GM3 抑制PKC活性的机制 .实验发现 ,GM3 处理后胞液PKCα明显增加 ,而颗粒结合PKCα则相对减少 ;GM3 对其它亚型PKC在细胞内分布无显著影响 .同时还发现 ,GM3 处理后细胞内DAG含量降低 (P <0 0 5 ) .结果表明 ,GM3 抑制PKCα由胞浆向质膜转位 ,对其它亚型PKC在细胞内转位无影响 .提示GM3 抑制的PKC亚型可能是PKCα .同时GM3 降低细胞内DAG含量 ,这可能与GM3抑制PKCα活性机制有关     

Effects of Ganglioside GM3 on Phospholipid Turnover of Human Leukemic J6-2 Cells

Ganglioside GM₃ was reported to induce the differentiation of HL-60 cells to differentiate along the macrophage-monocytic route. We used human monocytoid leukemia J6-2 cells and successfully induced differentiation by GM₃. Because differentiation is accompanied by retarded growth rate and cell cycle is intimately related to phospholipid metabolism, so we explored how GM₃ was related to phospholipid metabolism. By using [³²P]Pi, [³H-CH₃]choline, [³H-CH₃]SAM, and [³H]inositol as radioactive tracers, we studied the turnover changes of phospholipids and their metabolites induced by GM₃. For the morphological changes of differentiation to occur, the cells had to be treated with GM₃ at a concentration of 50 M for 5-6 days, but the phospholipid changes occurred at a very early stage of GM₃ treatment (only 1 h). Our results indicate that GM₃ stimulated PE methylation pathway inhibited both CDP-choline pathway and PI cycle. The phospholipid changes may constitute the early events in differentiation induced by GM₃.     

外源性GM_3／GD_3对人肝癌培养细胞蛋白激酶活性的影响

ＧＭ_３／ＧＤ_３在体外对部分纯化的酪氨酸蛋白激酶（ＴＰＫ）和蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）都有激活作用。ＧＭ_３处理细胞４ｄ后,完整细胞ＴＰＫ活性未出现大改变,而ＰＫＣ的活性则大幅度上升,为对照组的８８倍;同样条件下经ＧＤ_３处理后,ＴＰＫ的活性下降,为对照组的０．６６倍,而ＰＫＣ活性则上升,为对照组的４３倍。上述结果表明,ＧＭ_３／ＧＤ_３对不同蛋白激酶活性的影响互不相同,对同一蛋白激酶在不同条件下的影响也互不相同。     

外源性GM_3／GD_3对人肝癌培养细胞原癌基因表达的研究

应用原位分子杂交技术及细胞图象分析证实了人肝癌细胞株ＳＭＭＣ７７２１细胞经１０μｇ／ｍｌ的ＧＭ_３／ＧＤ_３处理后,ＧＤ_３处理组细胞内Ｎ－ｒａｓ基因ｍＲＮＡ的阳性信号弥漫分布于整个细胞,而经ＧＭ_３处理组和对照组阳性信号集中于核膜。ＧＭ_３／ＧＤ_３处理组及对照组ｃ－ｆｏｓ基因ｍＲＮＡ的阳性信号均集中于核膜,但ＧＭ_３处理组信号强度最大。上述结果提示,ＧＤ_３可使某些肿瘤细胞向更加恶性的方向发展,而ＧＭ_３则可使某些肿瘤细胞向正常方向转化。     

GM_3在几种哺乳动物肝脏和狗红细胞中的含量及其分离纯化

从正常兔、猪和狗的肝脏及狗红细胞中分离纯化了总神经节苷脂,测定了脂结合唾液酸,进行了高效薄层层析,比较了上述四种组织中GM_3的含量。结果表明狗红细胞中的GM_3的含量较另三种的高,狗肝和兔肝次之,猪肝含量甚微。从狗红细胞中提取和纯化了GM_3,其得量为每毫升压积红细胞351.0μg,纯度为92.2％。     

神经节苷脂GM3对J6－2细胞蛋白质磷酸化的影响

通过研究神经节苷脂GM₃对国人单核样白血病细胞系J6-2细胞蛋白质磷酸化的影响,在[γ- ³²P]ATP,GM₃,ATP,Mg²⁺与J6-2细胞液及颗粒两部分共同反应,10min(30℃)体系中,观察到GM₃对两部分蛋白质磷酸化的调节作用.GM₃(100μmol/L)促进颗粒部分分子量为180 000,87 000,78 000,67 000,43 000及31 000的蛋白质磷酸化,促进胞液部分分子量为87 000及56 000的蛋白质磷酸化,而且能抑制70 000及43 000蛋白质磷酸化.由于GM₃已被前人证实能对J6-2细胞起分化作用,其作用时间长达4-6d,很可能GM₃对蛋白质磷酸化作用的调节是GM₃促分化作用的早期信号.