大肠杆菌中的蛋白质分泌

目前,在微生物遗传工程中应用的表达载体大多是指导目的基因在宿主的胞质中表达,尽管外源蛋白的产量可达菌体总蛋白的50％以上,但同时也存在不少缺点:(1)高水平表达的外源蛋白容易发生沉降、凝聚,难以重新折叠为正确构象,不易获得有功能的产品;(2)产品纯化工艺复杂;(3)对宿主有毒性作用,导致表达体系不稳定;(4)外源蛋白易被胞内蛋白酶降解。这使得微生物遗传工程的应用受到很大限制。 如果能使在胞质表达的外源蛋白分泌到胞外,既可纠正由子高表达所引起的种种不利。近十年开展了对E.coli中蛋白质定位的深入研究。E.coli的蛋白质最初都是在胞质合成的,通过分泌而定位于膜或周质。例如外膜蛋白A(OmpA)先以前体形式在胞质合成,然后借助信号肽的作用穿过内膜,在分泌过程中信号肽被切除成的成熟蛋白定位子外膜。现在许多作者利用E.coli分泌蛋白的信号肽序列与目的基因相融合,将外源蛋白分泌出胞质。如用碱性磷酸酶(phoA)的信号肽分泌人α干扰素,使产物的稳定性和产量都有所提高,并且可通过简单的物理技术得到产品。E.coli溶血素通过特殊的分泌机制穿越细胞膜分泌至培养基,现已尝试用该系统构建表达载体。 本文从信号肽的作用、成熟蛋白对分泌的影响、宿主在分泌中的作用、E.coli溶血素的分泌以及外源蛋白在E.coli中的分泌等几方面综述近几年研究E.coli蛋白质分泌的进展。     

酵母制造人体清蛋白将进入商业化生产

清蛋白(albumin)又称蛋白素,在人、动物和许多植物组织内都能发现,溶于水,遇热凝固,医用清蛋白(用来补尝因重伤而引起体液的损失)必须从人体血液中提取,昂贵。美国遗传工程技术公司(旧金山)的科学家们已经用遗传工程改造大肠杆菌,并用它制造人体清蛋白获得成功。     

烟草组分1蛋白的提纯结晶超离心分析

我们为了研究叶录体的分子遗传、分子进化和遗传工程,从78年开始对烟草、水稻和油菜等植物的组分Ⅰ蛋白进行了研究。在对它们进行提纯的基础上,从80年开始又对烟草的组分Ⅰ蛋白进行了结晶和超速离心分析工作。     

重组蛋白药物的生产技术进展

重组蛋白药物是生物药物中的核心产品,主要是通过基因工程菌来生产功能蛋白或其突变体,用于弥补体内蛋白的缺失,从而对疾病的治疗发挥关键作用。近年来,重组蛋白药物在疾病治疗中发挥作用越来越大,相关技术也发展迅速。通过综述重组蛋白药物的中上游生产流程,并重点分析了重组蛋白药物在表达系统、细胞培养、纯化和质量控制等环节的最新技术进展,展示了重组蛋白药物制备的技术提升水平,以期为国内重组蛋白药物的生产提供一定的参考依据。     

Cetus公司希望在1988年上市白细胞间质素-2

Cetus公司已在今年早些时候取得白细胞间质素-2(IL-2)的专利。该公司的IL-就一种突变型蛋白,是用先进的遗传工程技术设计的一种新颖的人重组体蛋白质。遗传工程师的这种设计能力对于生物技术业来说是极为重要的,犹如合成化学之对于制药业那样。这也说明生物技术已经发展到了比较熟练的水平,为改进其产品使之超过天然蛋白质提供了可能性。     

循环自由流等电聚焦方法的建立及应用研究

等电聚焦是利用蛋白质分子或其它两性电解质分子的等电点不同,在一个连续、稳定、线性的pH梯度中进行蛋白质分析分离的技术。薄层凝胶等电聚焦具有高分辨率,但上样量小,聚焦后样品分析处理不便,仅局限于分析。循环自由流液相等电聚焦以液体循环流动代替固相载体,上样量大,聚焦后样品分析处理方便,有较大的制造潜力。Bier等已开展这项技术的研究。该技术应用到遗传工程上可对干扰素等进行精制纯化^[3]。本实验应用循环自由流等电聚焦仪(Recycling free-flow isoelectric fo-cusing,RIEF)进行了pH梯度的建立、模型化合物的分离、相关参数的比较,并被步应用于生物活性蛋白的精制和活性回收,旨在为遗传工程产品下游工艺提供一种新型而行之有效的方法。     

胞内蛋白的选择性提取

生物技术如ＤＮＡ重组、细胞融合技术,已使应用微生物廉价地大规模生产有价值的生物产品如：胰岛素、葡萄糖苷酶等成为可能。但很多基因重组蛋白是以胞内包涵体形式存在的,这些胞内蛋白制品在纯化过程中,由于步骤多、最终收率低,极大提高了生产成本。据统计,在蛋白制品生产中,分离和纯化费用占总生产费用的８０％以上［１］。因而开发新型生化分离技术,生产胞内蛋白质已成为工业生产的核心问题。 减轻蛋白质后处理工艺的负荷最根本的方法是尽量减少目标蛋白提取时非目标杂质的混入。传统胞内产物分离纯化的第一步是细胞破碎,破碎方…     

生物技术在生防微生物遗传改良中的应用

生物技术在生防微生物遗传改良中的应用黄大昉（植物病虫害生物学国家重点实验室）８０年代中期以来,用于植物病虫害防治的生物技术的研究取得了一系列突破性进展,一跃成为农业与生命科学领域重要的发展前沿之一。近年来,杀虫防病遗传工程微生物的研究十分活跃,并先于抗病虫遗传工程植物进入了实用化阶段。这一发展显示出生物技术用于生防微生物遗传改良的巨大潜力。     

制备遗传工程小鼠的技术改进

遗传工程小鼠是当今生命科学领域集成度最高的研究体系之一。特别在“人类基因组计划和小鼠基因组计划”完成后,遗传工程小鼠在制备人类疾病模型、药物开发和评价、基因功能分析以及比较基因组学中发挥着越来越重要的作用。由此,也推动了遗传工程小鼠相关技术的快速发展。就遗传工程小鼠制备的现况、存在的问题以及新策略等相关问题进行了总结。     

工业遗传工程迅速发展

据法国“研究”杂志1980年第115期报导,目前,世界各国的工业遗传工程正在迅速发展。1980年6月,法国第一个工业遗传工程企业正式成立,由四家公司联合投资。这一企业的资金为4千亿法郎,下设一个实验室。该企业负责向人、动物的治疗部门、生物能量学领域和工业微生物学部门提供产品。同时,还拨出一定数量的经费用于遗传     

遗传工程在食品和发酵工业中的应用

80年代中期,遗传工程在食品和发酵工业中的研究和应用越来越广泛。利用遗传工程技术克隆编码酶的基因,经基因扩增可以提高酶的产量,或发酵产物的产量。这是酶工业发展     

乳酸克鲁维酵母表达外源蛋白研究进展

乳酸克鲁维酵母已成功地应用于多种异源蛋白的表达生产之中。与其他酵母相比，乳酸克鲁维酵母具有许多优点，如超强的分泌能力，良好的大规模发酵特性、食品安全的级别及整合表达能力等，其作为宿主系统表达药用蛋白也已显示出巨大的潜力。从不同的菌属、遗传工程和分子生物学技术（如启动子、表达载体）等方面简要综述了乳酸克鲁维酵母作为蛋白表达宿主系统的优势。     

工业遗传工程迅速发展

据法国“研究”杂志1980年第115期报导,目前,世界各国的工业遗传工程正在迅速发展。1980年6月,法国第一个工业遗传工程企业正式成立,由四家公司联合投资。这一企业的资金为4千亿法郎,下设一个实验室。该企业负责向人、动物的治疗部门、生物能量学领域和工业微生物学部门提供产品。同时,还拨出一定数量的经费用于遗传     

Rohm与Haas公司进行昆虫植物的田间试验

目前,遗传工程植物获得批准进行田间试验的情形比遗传工程细菌稍好一些。Ro hm 与Haas 公司研究出的遗传工程烟草是第一个获得美国农业部批准的抗昆虫植物。它是继最近批准的 Ciba-Geigy 的抗除草剂烟草和 Agracetus 的带有编码酵母乙醇脱氢酶基因的烟草之后,又一项进展。这种抗昆虫烟草中带有一个取自苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis 简写为 BT)的杀虫蛋白基因,是比利时的 Plant Genetic System 的研究人员根据与 Rohm 与 Haas 公司所签定的协议,负责研究开发的。BT 多年来一直被用于防治鳞翅目幼虫。一般常见的鳞翅目害虫有:舞毒蛾、棉夜蛾幼虫、棉铃虫、切根虫、粘虫、玉米穗蛾、甘蓝尺蛾、烟草天蛾、烟草夜蛾、     

优化培养基增加层理鞭枝藻藻胆蛋白产量

藻胆蛋白(phycobiliprotein)是蓝藻和红藻藻胆体的组成部分,是光合作用集光复合体的组成部分,一般由α和β亚基构成,每个亚基含1～4个辅基色素,从而使藻胆蛋白具有特定的光谱吸收性质。根据这些吸收光谱性质,可以将藻胆蛋白分为:别藻蓝蛋白(APC)、藻蓝蛋白(PC)和藻红蛋白(PE)等,在某些缺乏PE而有异形胞的蓝藻中存在充当PE天线捕光功能的藻红蓝蛋白(PEC)〔1〕。藻胆蛋白可用于天然食用色素、化妆品色素和制药行业,还可作为免疫检测、荧光显微技术和流式细胞荧光测定法技术方面的荧光探针。特别是本工作研究的层理鞭枝藻(简称M.laminosu…     

植物生物反应器的研究进展

利用植物生物反应器生产外源蛋白是一个有吸引力的廉价生产系统,以下介绍了植物生物反应器的不同表达系统,及其各个系统的发展进程和研究现状等。重点论述了应用植物各大表达系统生产疫苗、抗体和医用蛋白等方面的情况以及本实验室在这一领域的研究情况。随着该领域研究的进展,植物生物反应器用于生产低成本药用蛋白的产业化将显示出越来越良好的发展前景。     

科技信息

·组织血纤维蛋白溶酶原活化剂量迄今最成功的遗传工程产品我国南京大学生化系从人尿中提取尿激酶技术,一举填补了我国这项产品的空白,并在江苏溧阳设厂生产尿激酶,防止血栓形成,减少了进口药品所需之外汇支出。国外先后已有17家公司运用遗传工程方法,通过微生物生产尿激酶,但一些遗传工程师们并未就此止步,现在又研制出组织血纤维紊蛋白溶酶原活化剂(商品名“活化酶(Activase)”)。这种新产品在投入市场的头45天内,销售额直线上升,达到0.58亿     

植物遗传工程

960679 遗传工程大麦的最新进展[英]/Mannonen,L.…∥Critical Rev. Biotechnol. -1994,14(4).-287～310[译自DBA,1995,14(12),95-07151] 就以下方面综述了大麦遗传工程的最新进展:大麦作为遗传工程的目标;遗传工程(遗传工程的先决条件,用于大麦转化的基因,大麦组织培养物的转化,大麦体细胞克隆变异,大麦转化的基因转     

食品工业用酶的克隆

遗传工程技术已成功地应用于药物工业,从而生产出许许多多新颖产品。愈来愈明显,这项技术也大规模地应用于生产对食品工业有价值的酶。通过遗传工程获得生产上     

锌指蛋白核酸酶的作用原理及其应用

锌指蛋白核酸酶(Zinc finger nucleases,ZFN)因其能特异性识别并切割DNA序列以及可设计性,被用于基因定点突变和外源基因定点整合。目前,ZFN技术以其准确的靶位点设计能力和诱发高效率基因打靶的优势,越来越受到基因改造研究者的重视,已经成功应用于动植物细胞、胚胎的基因改造。随着鉴定靶DNA高亲和力的锌指蛋白(Zinc finger protein,ZFP)实验技术日渐成熟,可以预见到不久的将来这项技术会在基因工程和育种中得到广泛应用。文章介绍了锌指蛋白识别DNA靶位点和ZFN介导的基因打靶(Double strand break gene targeting,DSB-GT)的原理,同时还综述了目前ZFN技术用于基因改造的研究进展。