两种荧光探针标记鹿茸提取物的稳定性和生物活性比较研究

比较两种荧光探针异硫氰酸荧光素FITC和Cy5标记鹿茸提取物PAEs的最佳方法。用FITC和Cy5分别标记PAEs得到标记物FITC-PAEs和Cy5-PAEs;用SDS-PAGE凝胶电泳检测并比较两种荧光染料标记蛋白分子量的差异;用酶标仪检测在特定波长处OD值计算其标记率;用PC12细胞验证两种荧光染料的生物安全性;将荧光标记物分别与人工胃液和人工肠液共孵育,观察它们在其中的稳定性。结果表明,两种荧光染料标记PAEs蛋白分子量并无明显差异,但FITC-PAEs荧光强度稍强。通过计算标记率表明两种荧光染料均可充分标记PAEs,但Cy5价格昂贵。相比于FITC-PAEs,Cy5-PAEs在人工胃液和人工肠液中稳定性较差。因此,我们选择标记率高,在人工胃液和人工肠液中较为稳定且对机体无毒副作用,价格合理的FITC荧光染料标记PAEs并用于后续实验研究。这为建立蛋白类中药大分子的活性示踪方法,开发口服蛋白类药物奠定基础。     

优化的细菌鞭毛染色技术

优化了实验教材上传统的银染液鞭毛染色方法,用单宁酸和FeCl3做媒染剂,增大单宁酸和FeCl3的质量浓度(并将其配制的溶液分别保存),然后用碱性染料沙黄水溶液[1]、齐氏石炭酸碱性复红染液[1]和稀释10倍吕氏碱性美蓝染液[1],分别对培养好的枯草芽胞杆菌进行染色,得到较粗、清晰的染色结果。     

显微玻片标本制作中的代用药品

显微玻片标本制作中的代用药品为解决上生物实验课和指导学生开展生物学科技活动中的一些困难，现介绍几种效果较好价廉的显微玻片标本制作中的代用药品，用于玻片标本的染色。１医用紧药水市售的医用紫药水，是指龙胆紫、甲紫、结晶紫这一类性质相同的碱性染料，将其稀释...     

短小芽孢杆菌209碱性蛋白酶高产菌株260-52的选育和投产

短小芽孢杆菌(Bacillus Pumilis)209原系河南省皮革研究所筛选获得的芽孢杆菌碱性蛋白酶高产菌株,该菌株所产酶制剂已成功地用于黄牛正面革酶法脱毛和山羊正面革酶法脱毛。另据文献报道,该菌种所产碱性蛋白酶的性质与用于加酶洗涤剂的地衣形芽孢杆菌(B.licheniformis)产生的碱性蛋白酶性质相同,同属卡尔斯伯型芽孢杆菌蛋白酶,所以可以作为洗涤剂用酶。因此,209碱性蛋白酶是一种有发展前途的酶制剂。     

一株产漆酶细菌的分离鉴定及酶学性质研究

[目的]分离获得产漆酶的细菌菌株,研究漆酶的酶学性质并应用于染料脱色.[方法]利用含铜的富集培养基筛选产漆酶细菌;通过形态特征、生理生化试验及16SrDNA序列分析等方法进行鉴定;以丁香醛连氮为底物测定漆酶的酶学性质;通过测定染料在最大吸收波长下吸光值的变化评价漆酶对染料的脱色效果.[结果]从森林土壤中筛选到一株漆酶高产菌株LS05,初步鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens);菌株LS05的芽孢漆酶以丁香醛连氮为底物的最适pH为6.6,最适温度为70℃;该酶具有较好的稳定性,经70℃处理10h或在pH 9.0条件下放置10d后可保留活性.对抑制剂SDS和EDTA具有一定的抗性,在碱性条件下可有效脱色不同的工业染料,RB亮蓝、活性黑和靛红1h内的脱色率达93％以上.[结论]Bacillus amyloliquefaciens LS05的芽孢漆酶在高温和碱性条件下稳定性强,相对于真菌漆酶具有更好的工业应用特性,可有效用于工业染料废水的处理.     

高碱性纤维素酶产生菌的筛选及鉴定

从化纤厂土样中分离得到菌株AC-4,碱性纤维素酶活力达0.602 IU/mL。通过分析菌株形态学特性、培养特征及16S rDNA序列,确定该菌株为短小芽孢杆菌。对该菌所产碱性纤维素酶的酶学性质进行测定,确定其最适作用pH为9.5,最适作用温度为50℃。     

红铃虫染色标记

我们用染色标记的方法,对红铃虫的趋光习性进行了试验,效果良好。 一、材料与方法 1.染料 虫胶(漆片)0.25克,碱性品红0.25克(或碱性绿、碱性紫等)和95％酒精100克。先将由胶放入少量酒精内不断摇动,待溶解后加酒精和颜料,因颜料易沉淀,务须过滤后,方能备用。 2.染色 染色笼为长3O厘米、宽30厘米、高4厘米,二面装纱网,一边装绞链,以便开关,另一边留两个直径1厘米的放蛾孔。把当天在指管内羽化的、发育正常、翅展良好的红铃虫雌雄蛾计数放入染色笼内,在通风处用手提超低容量喷雾机将染料透过纱网均匀喷染在各蛾体上,染料不宜过多,并用立体显微镜检查染色情况。     

染料木黄酮对成骨细胞增殖分化的影响

目的：研究染料木黄酮对体外培养乳鼠颅盖骨成骨细胞增殖分化的影响。方法：取乳鼠颅盖骨,采用胶原-胰蛋白酶消化法,进行颅骨成骨细胞培养,取第二代成骨细胞,添加10^-5～10^-7mol／L染料木黄酮,在CO2孵箱中培养48h和72h后MTT比色法测定细胞增殖,培养72h采用^3H-TdR和^H-Pro掺入实验测定DNA和胶原合成。用试剂盒检测细胞裂解液碱性磷酸酶(ALP)活性。结果：染料木黄酮明显增加成骨细胞MTT的吸光度值、^3H-TdR和^3H-Pro的掺入,增加成骨细胞碱性磷酸酶活性。结论：染料木黄酮促进体外培养的乳鼠颅盖骨成骨细胞DNA和胶原的合成,促进增殖和分化。     

肥大细胞标本的快速简易制作方法

肥大细胞是大多数脊椎动物疏松结缔组织中常见的细胞 ,常成群地沿着小血管分布。该细胞胞质内充满着粗大的嗜碱性颗粒 ,其颗粒具有水溶性 ,用碱性染料染色时呈现异染性。通常在制作肥大细胞标本时先取皮下组织或肠系膜进行铺片 ,风干后经过固定液固定 ,再用甲苯胺蓝、硫堇等染色方法显示胞质内颗粒 ,然后再经脱水 ,透明和封片等常规操作程序完成标本制作。近年来 ,笔者根据该细胞胞质内嗜碱性颗粒具有异染性和水溶性特点 ,采用以酒精为溶剂的甲苯胺蓝染色液对风干后肥大细胞铺片标本不经固定而直接染色 ,染色后只经一道酒精洗去浮液 ,风干后…     

台盼蓝活体染色碱性品红整块复染法

巨噬细胞可作变形运动,并具有吞噬异物的能力。为了观察巨噬细胞,常规方法是,在取材前给活体注射无毒染料如台盼蓝、墨汁或中性红等。在制片中再选用碱性染料复染细胞核。本人采用活体注射台盼蓝后,取其组织块,经碱性品红整块复染,制成观察肝脏、脾脏、淋巴结内巨噬细胞的切片,取得比片染法更满意的效果。方法介绍如下: (一)染料配制 1.1％台盼蓝注射液台盼蓝1克加生理盐水100毫升,经煮沸,过滤备用。     

怎样配制和使用瑞特氏染料

瑞特氏染料是碱性美蓝(亚甲蓝)与酸陛伊红钠盐混合而成的染色粉。当溶于甲醇后即发生解离,分成酸性染料和碱性染料两种。常用于血涂片的染色,染色后能清楚地区分不同种类的白细胞。但如果染料配制或使用不当,则得不到较理想的染色效果。     

计算机在初中“生物的遗传”一节中的运用

在初二“生物的遗传”一课中我运用了电脑多媒体教学获得成功,它突破了传统教学不能解决的下述问题：（1）便抽象概念形象化什么叫染色体？书上的解释是：“细胞核内存在着一些容易被碱性染料染成深色的物质,这些物质叫染色体。”这种抽象的、在高倍显微镜下才能看见的物质光靠教师用语言表达,中学生是很难想象并理解的。我们制作了一组动画。图像是：出现一个细胞,从细胞上方开始往下滴一滴淡蓝色的碱性染料,同时伴有声响,使细胞浸在碱性染料中,结果细胞核中部分地方颜色明显变深。这个现象同学很容易就发现了,这时老师告诉同学这…     

CFSE标记技术及其在细胞研究中的应用进展

近年来活体染料CFSE已被广泛应用,其作用机制也逐渐阐明。它不仅应用于细胞增殖的体外实验,也可用于追踪细胞在体内的分裂增殖过程,为细胞免疫和细胞生物学研究开辟了一条新的有效途径。本文综述了活体染料CFSE的性质、工作原理及应用。     

彩色棉花

彩色棉花又称有色棉,是一种具有天然色彩的特殊类型的棉花,有浅蓝色、粉红色、浅红色、淡黄色、浅褐色和浅灰色等,也有同株异校多色杂生的棉花。彩色棉花不需染色可制成各种原色棉布,用这种布缝制的服装,经洗涤和长期风吹、日晒雨淋,也不褪色。由于没有受染料     

以导数光谱法研究糖胺多糖的结合性质

糖胺多糖(Glycosaminoglcan,GAG)是存在于动物结缔组织基质和细胞表面的一类聚阴离子型胞外大分子。GAG和其他生物大分子的结合性质是研究这类多糖结构和功能的重要内容。这种结合以静电作用为基础,但也受立体化学因素的调节。GAG与碱性染料相结合(主要借助静电引力),并引起后者减色(Hypochromism)和异染(Metachromasia)。这一性质已在结缔组织的组化测定、GAG药物分析和GAG空间结构研究等方面逐步得到应用Grant最近对肝素及其解聚物异染性质与生物     

防治血吸虫病药物的研究 Ⅶ.微量锑的比色测定法

目前广泛应用蓝光碱性蕊香红(rhodamine B,以下简称蕊香红)测定微量锑。Maren 将其应用于生物样品,但灵敏度仅及0.5微克锑,而且铁的干涉很大。过去虽有企图去除铁的干涉,或用其他染料及有机溶剂作锑的测定,但结果仍不能满意。     

南极海洋产耐有机溶剂变性剂氧化剂蛋白酶链霉菌菌株XE-1的初步鉴定及酶学性质

摘要:【目的】从南极海泥土壤中分离得到一株高产蛋白酶的放线菌(XE-1),对所产蛋白酶进行纯化以得到具有特殊性质的酶产物。【方法】通过对XE-1的生理生化和16S rRNA 基因序列分析,初步将其确定为灰红链霉菌的变种。利用乙醇沉淀、离子交换、凝胶等方法纯化后,利用冻干浓缩获得其胞外蛋白酶,用SDSPAGE测定分子量并进行性质表征。【结果】得到一种对高浓度的有机溶剂、变性剂、氧化剂耐受的,表观分子量为14 kDa的碱性丝氨酸蛋白酶,进一步分析,其最适pH 8.2,温度为55℃,米氏常数Km和Vmax分别为1.9 mg/mL和973 u/mL 。此蛋白酶活性于25%的有机溶剂为50%－180%的初始活性;在不同浓度的氧化剂中为110%－140%的初始活性,在0.2 mol/L到4 mol/L的变性剂中表现为100%－150%的初始活性。【结论】从南极海洋链霉菌XE-1中分离得到一种耐有机溶剂、变性剂、氧化剂,大小约为14 kDa碱性蛋白酶,其特殊的酶学性质可用于工业生产或药学等领域。     

地衣芽抱杆菌C碱性蛋白酶基因在枯草芽抱杆菌中的克隆及表达

本文采用DNA重组技术,用鸟枪法克隆获得地衣芽抱杆菌C1213碱性蛋白酶基因。对胞外蛋白酶 酶活测定表明,此基因在枯草芽抱杆菌中获得表达及分泌。用SDS-聚丙烯酚胺凝胶电泳法测定其胞外 蛋白质分子量,得知此基因产物与C1213碱性蛋白酶分子量相同。用酶切和琼脂糖凝胶电泳法确定了所 克隆DNA片段的物理图谱,并确定其大小为2.3kb     

微生物碱性蛋白酶的研究进展

碱性蛋白酶可源于动物、植物和微生物。微生物来源的碱性蛋白酶因其具有培养简便、产量丰富而应用尤为广泛,同时菌种筛选、纯化、诱变乃至重组工程菌技术的应用为其大规模工业化生产提供了坚实的基础。本文对微生物碱性蛋白酶产生菌的种类、高产菌株选育工作进展以及碱性蛋白酶的分类、性质、基因结构及功能等方面进行了简要概述。     

碱性染料用酸配制的原因分析

“观察植物细胞的有丝分裂”实验中介绍的染色剂有2种,一种是质量浓度为1%或2%的龙胆紫溶液(将龙胆紫溶解在质量分数为2%的醋酸溶液中配制而成的),另一种是醋酸洋红。很多教师及学生对于以上染色剂的配制有很大的疑问:碱性染料为什么用酸配制?配制好后的溶液是酸性的还是碱性的?如果是酸性的还