神经肽Y的基因及其表达调控

神经肽酷氨酸是一种含３６个氨基酸残基的生物活性多肽,在体内具有收缩血管,影响激素分泌,调节生物节律及摄食行为等多种生物学功能。本从ＮＰＹ ｃＤＮＡ克隆,基因结构与功能关系以及多种因素对其基因表达的调节等方面作一综述。     

禁食和复投喂对大口黑鲈胆囊收缩素及其受体基因表达的影响

为研究大口黑鲈(Micropterus salmoides) 胆囊收缩素(Cholecystokinin, CCK)和其受体(Cholecystokinin receptor, CCKR)基因在摄食活动中的功能, 研究通过克隆得到CCK1、CCK2、CCK1R和CCK2R基因的编码区序列, 其长度分别为414、387、1368和1359 bp, 分别编码137、128、455和452个氨基酸。荧光定量结果表明CCK1和CCK2基因均在脑组织中高表达, 其次为肠道组织, 而CCK1R和CCK2R基因分别在胆囊和脑组织中高表达。在摄食后24h内, CCK1、CCK2、CCK1R和CCK2R基因的相对表达量呈先升高后下降趋势, 其中CCK1、CCK1R和CCK2R基因在摄食后3h相对表达量达到最高值, 而CCK2基因在摄食后12h相对表达量达到最高值(P<0.05)。禁食过程中CCK1、CCK1R和CCK2R基因相对表达量在禁食14d时显著升高(P<0.05)。复投喂后CCK1、CCK1R和CCK2R基因的相对表达趋势与餐后表达趋势相似, 呈先升高后降低趋势。但在禁食和复投喂过程中CCK2基因相对表达量并无显著变化。综上所述, 研究结果推测CCK1基因可能与CCK1R、CCK2R基因结合, 作为饱腹信号因子, 通过抑制食欲调控大口黑鲈摄食、消化等生理过程; 而CCK2基因可能作为短期食欲因子调节摄食活动。研究结果可为大口黑鲈摄食活动调节提供理论依据。     

神经肽Y及其受体在银屑病慢性瘙痒中的表达特征

该文旨在研究神经递质神经肽Y(NPY)及其受体在银屑病小鼠的背根神经节(DRG)与脊髓中的表达特征。将8周龄的雄性C57BL/6小鼠随机分为咪喹莫特(IMQ)模型组和空白对照组两组。观察小鼠的行为学变化和皮肤炎症,采用HE染色分析皮肤炎症,甲苯胺蓝染色分析肥大细胞浸润情况。通过实时荧光定量PCR分析DRG中NPY mRNA的表达变化和皮肤中细胞因子的表达变化,并通过RNA原位杂交技术分析Npy1r(NPY受体Y1相应的基因)、Npy2r(NPY受体Y2相应的基因)的表达情况。鞘内注射Y1拮抗剂或Y2拮抗剂后观察小鼠的行为学变化。IMQ造模小鼠的抓挠行为极显著增加。与对照组相比, IMQ模型组小鼠皮肤出现明显的银屑病样炎症性皮肤病变,而肥大细胞数目并无明显变化。在皮肤中, IMQ模型组IL-4与IL-5 mRNA表达水平与对照组相比没有明显改变;TSLP与IL-33表达水平升高。在DRG中, IMQ模型组NPY的m RNA表达水平与对照组相比升高, Npy2r与Nppb在神经元中有明显的共表达。在脊髓中, Npy1r与Grp有部分共表达, Npy1r与Npy2r同时表达在部分神经元中。在...     

小鼠c-Myc基因的克隆表达及其纯化

目的:克隆小鼠c-Myc基因,构建原核表达载体并对其进行蛋白表达及纯化。方法:以TetO-FUW-OSKM质粒为模板经PCR扩增c-Myc基因,再通过基因重组技术与pET-3C载体相连转化大肠杆菌DH5α。经抗性筛选,PCR鉴定阳性重组子,测序正确后,重组质粒转化大肠杆菌Rosetta(DE3),IPTG诱导蛋白表达,SDS-PAGE对重组蛋白进行鉴定分析。结果:DNA电泳结果证实PCR扩增产物与预期大小一致,DNA测序结果显示与GenBank公布的c-Myc基因序列一致,IPTG诱导SDS-PAGE电泳后,在分子量64kDa左右出现诱导后蛋白新增条带,与预测的c-Myc分子量大小一致。结论:成功地构建了pET3C-Myc原核表达载体,表达并纯化出了c-Myc蛋白,为今后研究c-Myc蛋白及相关蛋白诱导体细胞成多能干细胞打下基础。     

水稻乙醛脱氢酶基因的克隆及其在不育系中的表达

从水稻中分离了乙醛脱氢酶基因（Ｏｓａｌｄｈ）的全长ｃＤＮＡ,序列分析显示Ｏｓａｌｄｈ ｃＤＮＡ含有一个完整的编码５４９个氨基酸的开放阅读框,其编码蛋白ＯＳＡＬＤＨ的Ｎ端为预期的线粒体前导肽,中部具有醛类脱氢酶基因家族的酶催化活性中心,ＯＳＡＬＤＨ与玉米、烟草、人类的线粒体乙醛脱氢酶同源性分别高达８７％、７７％、５９％。Ｎｏｒｈｅｒｎ分析显示,幼根中Ｏｓａｌｄｈ的表达水平高于幼苗,幼穗,不育品种幼重     

PTD-NPY融合基因的克隆及其在毕赤酵母中的分泌表达

应用重叠延伸PCR方法扩增HIV-1 TAT蛋白转导结构域(PTD)与鼠源神经肽Y(NPY)的融合基因,克隆目的片段并插入酵母表达载体pPICZαA,构建成重组表达质粒pPICZα-PTD-NPY.PCR和酶切鉴定及测序正确后,经限制性内切酶Sac Ⅰ线性化重组表达质粒并通过电转化整合到巴斯德毕赤酵母菌GS115的染色体基因组中.阳性重组酵母菌用含1%甲醇的培养基诱导其分泌表达.经过120 h的诱导,取上清浓缩除盐后进行SDS-PAGE电泳,表明该系统成功表达了PTD-NPY融合蛋白,Western blotting实验证实表达产物具有特异性.获得真核表达的PTD-NPY融合蛋白,为下一步的应用研究提供了物质基础.     

鲢（Hypophthalmichthys molitrix）肿瘤坏死因子基因的克隆与表达分析

肿瘤坏死因子(TNF)是一种炎症细胞因子,在非特异性免疫系统中发挥着重要作用.TNF由单核细胞或巨噬细胞产生,能直接造成肿瘤细胞的死亡,并参与机体炎症和免疫应答的调节.用RACE(rapid amplification of cDNAends)-PCR方法,从鲢总RNA反转录产物中获得了1 254 bpTNF cDNA全序列.该序列包含394 bp的5'端非编码区,398 bp的3'端非编码区和462 bp的开放阅读框.鲢TNF的开放阅读框编码239个氨基酸,其中包含构成一对二硫键的2个保守半胱氨酸.同时利用RT-PCR技术,对该基因在鲢鱼体内不同组织之间的表达差异进行了分析研究,结果表明鲢TNF mRNA主要在脑、鳃和头肾中表达,肠和脾中有少量表达,而在肝中几乎没有表达.     

核盘菌arom基因的克隆及其在酿酒酵母中的表达

核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)arom基因已经被克隆、测序。该基因编码的AROM蛋白是芳香族氨基酸合成途径中催化第二步到第六步的五功能多肽。为了对扩增的核盘菌arom基因进行功能验证和探索大量获得AROM蛋白的成熟方法,克隆了arom基因的编码框序列,并将其与载体pYES2连接,构建了酵母表达载体pYES2-arom。用LiAc/SSDNA/PEG方法将该表达载体转入酿酒酵母H158(Saccharomyces cerevisiaeH158)中。酶活测定、RT-PCR和Northern杂交结果显示,核盘菌arom基因在酿酒酵母胞内获得了表达,转化子具有AROM蛋白结构域之一5-烯醇丙酮酰莽草酸-3-磷酸合酶的催化活性。不同培养时间取样样品的酶活检测结果表明,当转化子在30℃的条件下,在SC-U酵母尿嘧啶营养缺陷型选择培养基中以180r/min被振荡培养时,其外源AROM蛋白的5-烯醇丙酮酰莽草酸-3-磷酸合酶酶活在培养72h达到最高。     

甘蓝中BcpLH同源基因的克隆及其表达分析

根据大白菜ＢｃｐＬＨ基因设计引物,用ＰＣＲ方法从甘蓝结球期的茎尖组织中克隆到了大白菜ＢｃｐＬＨ基因的同源基因ＢｏＬＨ１。序列分析表明,ＢｏＬＨ１基因含有３个内含子,ｃＤＮＡ编码２４５个氨基酸,编码的蛋白中存在两个双链ＲＮＡ结合蛋白结构域;Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交结果显示在甘蓝基因组有１个以上的ＢｏＬＨ１基因拷贝。ＰＣＲ表达分析表明,甘蓝ＢｏＬＨ１同源基因主要在结球期的茏尖组织、球叶和包叶中表达。推测Ｂ     

运动后恢复过程中大鼠骨骼肌α-肌动蛋白基因的表达

目的：探讨运动后恢复过程中骨骼肌α－肌动蛋白基因的表达及运动对该基因表达的影响。方法：设计强化训练的大鼠模型,用定量反转录聚合酶链式反应（Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ＲＴ－ＰＣＲ）方法,研究恢复过程中,大鼠骨骼肌α－肌劝蛋白（α－ａｃｔｉｎ）基因的表达。结果：所有强化训练运动恢复组的骨骼肌α－肌动蛋白ＭＲＮＡ水平均高于安静对照组（Ｃ）,且强化训练恢复安静组（ＥＲ）、强化训练恢复３０ｍｉｎ组（Ｅ－０．     

白鲢个体发育过程中同工酶基因的表达与调控研究

采用淀粉或聚丙烯酰胺凝胶电泳及特异性组织化学染色技术研究了白链早期发育过程中（从未受精卵到卵黄吸尽期）及成体不同组织（脑、眼、心、肌、肾、肝）中六种同工酶系统（ＬＤＨ,ＭＤＨ,ＩＤＨ,ＡＤＨ,ＳＤＨ,ＥＳＴ）的分化表达谱式,白链各同工酶基因的表达具有明显的组织特异性早期发育过程中,ＡＤＨ和ＳＤＨ基因均无活性,其它四种同工酶则具有不同的个体发育谱式。值得一提的是,由取自同一地区的两对白链的受精卵的形     

诱导鲢排卵时性类固醇激素含量的变化

本文报道了人绒毛膜促性腺激素(HCG)和哺乳动物促黄体激素释放激素类似物(LHRH—A)诱导鲢鱼排卵过程中,血清中性类固醇激素的变化规律。实验表明,经注射催产药物后,雌鱼血清中主要出现睾酮和17α20β-双羟孕酮(17α20βρ)浓度的变化,而雌二醇和孕酮浓度始终很低,变化不大。两种催产剂皆先诱导睾酮浓度达到峰值(4．83—16．65ng／ml),睾酮浓度随后下降,而17α20βρ浓度达到峰值(4．35—5．0ng／m1)时出现排卵。HCG和LHRH—A直接和间接地通过诱发17α20βρ的合成,再经其中介作用,最后诱导卵母细胞成熟排卵。雄鲢经人工催产注射后未发现17α20βρ的变化,睾酮反有所下降。本研究为采用17α20βρ作为鲢的催产药物提供了理论依据。     

鲢的远缘杂交子代和人工三倍体的同工酶表达

用聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳分析了鲢♀×鳙♂、鲢♀×团头鲂♂的二倍体和异源三倍体杂种,以及同源三倍体鲢及其亲本种的８种蛋白质和同工酶的表型。二倍体杂交子代的基因表达是多样的,这些多样的表达可能与双亲的这些蛋白质和同工酶的表型差异有关。如与二倍体杂交子代相比,鲢×鳙异源三倍体的肌肉蛋白和血清蛋白有效一致的表型,此外在两种异源三倍体中ＥＳＴ和ＭＤＨ同工酶的表型接近母本,这些结果表明异源三倍体由于增加了一套     

鲢早期发育阶段鱼体脂肪酸组成变化

用气相色谱仪分析了鲢受精卵和仔鱼的脂肪酸组成及其变化。受精卵中共检测到19种脂肪酸;SFA含量最高,其次为PUFA,MUFA最少。SFA中以16C：0为主,MUFA中以18C：1为主,PUFA中以DHA、AA和EPA为主;n-3/n-6为2．45。初孵仔鱼中HUFA因卵膜的脱落而减少,以后逐渐积累;鲢仔鱼具有将18C PUFA转化为长链HUFA的能力;在早期发育阶段,鲢仔鱼主要消耗16C：0作为能量代谢的基质。     

二龄鲢和鳙血液的比较研究

以１１５尾二龄链和９１尾二龄鳙为材料,测定了血液中红细胞数,白细胞数、血红蛋白值、红细胞脆性植、比积及比重,红细胞沉降率,白细胞分数计数值及各型血细胞大小等正常值。结果显示：红细胞和白细胞值,比积值及淋巴细胞所占百分比值均是鲢高于鳙,而红细胞沉降率和中性粒细胞却是鳙高于链,在鲢上,其血液指标植也存在雌雄差异,上述血液指标值也存在周年变化。     

鲢鱼骨骼肌肌球蛋白重链基因的cDNA克隆与表达

肌球蛋白分子含有2个约200kD的重链亚基和4个约20kD的轻链亚基,重链亚基由球状的头部(S1)和α-双螺旋的杆部(Rod)组成1。在鱼类肌肉蛋白质的组成中,肌球蛋白约占肌原纤维蛋白的50%以上,并且其基因在生物进化过程中的变异性很大,以致肌原纤维蛋白性质的变化主要是由肌球蛋白的变化引起的2。       

草鱼Noxa基因克隆及其应答GCRV入侵的表达响应

研究通过获得草鱼Noxa基因(Cinoxa)全长cDNA, 进行序列分析和进化树构建, 使用定量PCR (qPCR)的方法研究其在GCRV刺激下的表达模式。研究发现, 草鱼Noxa基因的蛋白序列与斑马鱼Noxa基因具有高度相似性。通过分析草鱼和斑马鱼的Noxa基因的蛋白三维结构(3D)模型, 研究发现两者具有高度一致的蛋白三维结构模式, 该模型与高等哺乳类中的Bcl-2家族蛋白中C端结构域同源。对Cinoxa在GCRV刺激下的表达模式的研究表明, Cinoxa在GCRV感染后中肾、脾脏和头肾中表达发生显著性变化, 攻毒后24h和120h出现显著上调表达。研究表明草鱼Noxa为斑马鱼Noxa的同源基因, 并且参与了草鱼对GCRV入侵的应答反应, 为深入研究鱼类Noxa应答病毒入侵的功能和转录调控机制奠定了基础。     

鲢,鳙滤食器官结构与功能的研究

用扫描电镜和组织学等方法研究链,鳙滤食器官的结构,并观察,分析了滤食器官各部分的功能,结果表明,它们的鳃耙,腭褶和鳃耙管上皮部分布有味蕾和丰富的粘液细胞,鳙腭褶和鳃耙管上皮中味着细胞数量明显一多于鲢的,腭褶表皮上分布着排列有序的枕状突起,鲢可通过沉食途径和阻塞效应有效地摄食直径为３．２μｍ的小球藻,本文还通过对腭褶,鳃耙管及鳃耙在摄食活动中的运动方式的直接观察,分析了它们各自的主要功能。     

长江中下游鲢鳙草青四大家鱼线粒体DNA多样性分析

对长江中、下游湖北石首、江西九江、安徽芜湖三江段鲢、鳙、草鱼、青鱼天然群体共３６５尾鱼的线粒体ＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）的ＮＤ５／６、Ｃｙｔｂ基因和Ｄ－Ｌｏｏｐ区片段进行了限制性内切酶酶切片段长度多态（ＲＦＬＰ）分析。结果表明：（１）长江中、下游鲢、鳙和青鱼的遗传多样性丰富，草鱼不甚丰富。发现鲢、鳙和青鱼的ｍｔＤＮＡ基因型分别有２８、１９、２７种，草鱼ｍｔＤＮＡ基因型仅见７种；鲢、鳙和青鱼的基因型多样性     

白鲢肝脏CYP3A序列分析及毒死蜱对其抑制作用研究

CYP3A是I相解毒酶系CYP450家族中的重要成员,在肝脏解毒过程中发挥重要作用。首次克隆了白鲢肝脏CYP3A基因并研究了毒死蜱对该基因表达的影响。生物信息学分析预测结果表明,CYP3A基因编码513个氨基酸,其蛋白质分子量为58.8 ku,理论等电点为7.96。该蛋白是一个稳定蛋白且具有一定的亲水性。二级结构预测可知,CYP3A包含45.2%的α-螺旋、12.3%的延伸链、4.3%的β-折叠和38.2%的无规则卷曲,具有2个显著的跨膜结合区。急性毒性实验结果表明,毒死蜱对白鲢具有很高的毒性,其96h LC50为0.172 mg/L。另外,荧光定量PCR检测发现,毒死蜱对白鲢CYP3A基因表达有明显的抑制作用。