NO和氧自由基在心肌缺血再灌注损伤中的协同作用——心肌缺血再灌注损伤产生的NO自由基的ESR研究

用低温电子自旋共振(ESR)技术检测到了大鼠心肌缺血再灌注过程产生的NO自由基与含铁蛋白结合的ESR信号 并且利用这一技术研究了大鼠心肌缺血再灌注损伤过程中NO和氧自由基的协同作用.结果发现,在缺血再灌注损伤的心肌中可同时检测到氧自由基和与血红蛋白β-亚基铁结合的NO自由基(β-NO复合物).在正常心肌中检测不到这两个信号,即使在灌注液中加入L-精氨酸也检测不到这两个信号.在缺血再灌注损伤的心肌中就可以检测的这两个信号了,而且随着在灌注液中加入L-精氨酸浓度的增加,这一信号也随之增加.在灌注液中加入NO合成酶抑制剂N~G-硝基精氨酸甲脂(NAME),这两个信号受到抑制.在灌注液中检测标志心肌损伤的乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶(CK)活性发现,在灌注液中加入低浓度的L-精氨酸(1mmol/L以下),对缺血再灌注心肌损伤有一定保护作用,但是,若加入高浓度L-精氨酸,则加重缺血再灌注心肌的损伤.加NAME对缺血再灌注心肌有明显保护作用.在灌注液中加入黄嘌吟/黄嘌吟氧化酶(X/XO)或Fe²⁺/H₂O₂,同时增加缺血再灌注心肌中的NO和氧自由基含量,并加重心肌的损伤.在灌注液中加入超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT),同时减少缺血再灌注心肌中NO和氧自由基的含量,并减轻心肌的损伤.     

牡丹花水提液对氧自由基的清除作用

牡丹花水提液加入O 2和·OH的产生及检测系统中,能显著降低介导的氮兰四唑(NBT)的光化学还原和·OH作用下的水杨酸羟基化作用.这提示牡丹花水提液具有显著的清除氧自由基的活性,红色牡丹花水提液清除氧自由基的效能高于浅色花.     

大鼠心脏低温保存及高钾停跳保护作用的ESR研究

用ESR研究大鼠离体心脏低温长时间缺血后再灌注时产生的自由基,并观察心肌超微结构的变化;对临床心脏直视手术中常用的高钾停跳液的保护作用机理进行了分析。实验结果表明超氧自由基信号强度随缺血温度的降低而明显减弱。高钾停跳液保护的大鼠离体心脏于低温(4℃)缺血后再灌15s,4h内超氧自由基信号强度变化不明显。缺血4h后再灌注,实验组心脏全部于15s内自动复跳,超微结构的变化轻微。以上改变与对照组比较有明显的差异。本实验为低温保存心脏及高钾停跳液的临床应用提供了实验依据。     

氢生物医学效应在疏解自由基氧化应激的分子机制

氢分子(H₂)作为有害自由基清除剂的选择性抗氧化新机制,为自由基生物医学理论研究和应用提供了新的方向。自2007年H₂首次被报道具有生物学效应以来,已在缺血/再灌注损伤、代谢综合征、炎症和癌症等疾病模型和人类疾病中被证实。虽然H₂的医学作用靶点仍存在争议,但大量的研究已证明H₂生物学效应具有医用气体作用和健康促进作用。系统地介绍了H₂对生物体及细胞调控的研究进展,阐述了H₂的抗氧化、抗炎和抗凋亡作用,探讨了H₂对线粒体和内质网的保护、细胞内信号通路的调节和免疫系统的平衡作用,以期为深入研究氢效应机制和规范氢供体应用范围提供理论依据。     

过氧亚硝基阴离子的研究进展

过氧亚硝基阴离子(peroxynitrite anion, ONOO-)是一氧化氮(NO)和氧自由基(O(-·)2)结合生成的.它可能是NO产生病理损伤作用的重要环节.它在休克、缺血-再灌注损伤、败血症、胰岛素依赖性糖尿病、动脉硬化及感染炎症等疾病中的作用已愈来愈受到重视.加强对ONOO-生成途径和NO、O(-·)2与ONOO-的相互作用的基础研究,以及ONOO-的病理生理作用的研究,特别是开展针对抗ONOO-损伤作用和有效清除体内ONOO-的新药研制,不仅有助于揭示NO的细胞毒作用的分子机制,还有助于为治疗某些临床危征提供启示性思路.     

川芎嗪对脑缺血/再灌注后所致肺损伤的影响

目的：观察川芎嗪对脑缺血／再灌注后肺损伤的影响。方法：采用Pulsinelli等的方法建立大鼠急性全脑缺血／再灌注模型。将Wistar大鼠随机分为三组,即：对照组（Control）、缺血／再灌注组（I／R）、川芎嗪＋缺血／再灌注组（TEP＋I／R）,分别测定各组肺功能（PaO2、PaCO2）,肺系数（LI％）、血浆和肺组织中与自由基有关物质的含量。结果：川芎嗪可有效改善脑缺血／再灌注后肺功能,减轻肺水肿,减少胞浆酶的漏出,增加自由基清除醇的活性,抑制组织脂质过氧化的发生。结论：川芎嗪对脑缺血／再灌注后肺损伤具有保护作用,其机制可能与其抗氧自由基和膜保护作用有关。     

兔心脏骤停模型方法的建立

犬心脏骤停模型报道较多,而兔心脏骤停模型建立方法的研究尚未见报道.为了配合"心脏骤停再灌注期内皮素、氧自由基、降钙素的影响及对抗作用研究"的实施,我们对兔心脏骤停模型建立的方法进行了研究,并测定了缺血再灌注后兔血中自由基含量的变化,现报告如下.     

木贼生物碱的提取及其功能的研究

以木贼为研究对象,提取生物碱,并对其体外抗氧化及抑菌功能进行研究,采用乙醇提取法和盐酸提取法确定生物碱的最佳提取条件,并研究木贼生物碱对羟自由基、超氧自由基、DPPH自由基的清除效率及其对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌的抑制效果。当乙醇浓度80%、料液比13 mL/g、浸泡时间18 h、浸提液pH值5时,木贼生物碱的提取含量最高。研究发现,木贼生物碱对羟自由基、超氧自由基、DPPH自由基的清除能力随着生物碱浓度提高而增强,其中对DPPH自由基的清除效果最佳,达到98.1%。木贼生物碱对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌均有一定的抑菌效果,最明显的是大肠杆菌,抑菌浓度为5 mg/mL。木贼生物碱通过乙醇提取效果较好,且体外抗氧化及对大肠杆菌等具有明显的抑制作用。本研究可为广泛应用木贼的药用价值奠定基础。     

辅酶Q10,甘露醇及别嘌呤醇清除活性氧自由基的ESR研究

药物清除氧自由基的ESR研究近年来在国内已有报道,但以中药有效成分为多见,我们选择了在心脏直视手术时用于临床心肌保护的几种有效药物:辅酶Q_(10)甘露醇及别嘌呤醇,用ESR技术测定其清除活性氧自由基的作用,以了解它们防治心肌缺血再灌注损伤的机理。     

转基因动物的组织缺血再灌注损伤较非转基因动物轻

近年来,缺血再灌注损伤中氧自由基的作用已被许多直接或间接证据所证实,并得到公认。目前直接测定氧自由基的方法是用电子自旋共振仪(ESR);间接的方法是使用外源性氧自由基清除剂如超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)观察其对组织缺血再灌注损伤的保护作用。最近Kinouchi等用携带人SOD 1基因的转基因小鼠(Tg)观察了处于高表达状态的铜锌超氧化物歧化酶(CuZn SOD,其SOD的活力是非转基因小鼠nTg的3.1倍)对小鼠大脑局部缺血再灌注损伤的保护作用,结果发现,缺血24h后,转     

缺血再灌心肌室颤阈值、Ca~(2 )含量、心律的同步动态变化及SOD的影响

利用大鼠心肌缺血再灌流模型,重点观测了早期再灌流时心肌室颤阈值(VFT)、心律、Ca~(2 )含量的同步动态变化及超氧化物歧化酶(SOD)对其影响,发现再灌流心律失常发生率的增高及心肌室颤阈值的降低与心肌Ca~(2 )含量的变化及Ca~(2 )超负荷的发生在时相上有差异。SOD对再灌流早期(再灌刚开始的1～3min)VFT一过性降低及心律失常发生率有明显抑制作用,而此时心肌Ca~(2 )含量无变化,提示(1)再灌流刚开始时出现的严重心律失常与氧自由基密切相关;(2)Ca~(2 )诱发心律失常的作用似迟于氧自由基。     

高效抗氧化大型真菌的筛选

为获得高效抗氧化菌株,采用直接提取方式从20个大型真菌菌株菌丝体培养液中提取抗氧化活性物质,采用邻苯三酚自氧化法、水杨酸法、DPPH法测定各菌株菌丝体培养粗提液对超氧阴离子自由基(O2)、羟基自由基.(OH)及1,1-二苯代苦味酰基自由基(DPPH-)的清除作用。结果表明:各菌株菌丝体培养粗提液对(O2)、.OH及DPPH-均有一定的清除作用,其中菌株NG菌丝体培养粗提液对OH-的清除效果最好,清除率为75.56%;菌株02菌丝体培养粗提液对(O2-)的清除效果最好,清除率为37.51%;菌株EG菌丝体培养粗提液对DPPH-清除效果最好,清除率为66.91%。     

活性氧自由基对心肌细胞损伤效应研究

为探讨活性氧自由基对心肌细胞的影响 ,采用胰蛋白酶酶消化法分离SD乳鼠心肌细胞 ,培养于适当的条件并观察其形态学和生理学方面的特征 ;加入H_{2O2 活性氧刺激心肌细胞 ,模拟氧自由基损伤心肌细胞方式 ,构建心肌细胞缺血再灌注损伤的模型并了解H2O2 对心肌细胞的损伤作用。结果表明胰蛋白酶消化分离的心肌细胞能够在体外完好生长 ,并能够在一段时间内维持其原有的生理特性 ;MTT检测结果和形态学观察结果表明H2O2 对心肌细胞的损伤与其浓度和作用时间呈正比关系 ,TUNEL和DNA凝胶电泳分析结果显示 ,H2O2 在心肌细胞中的积累是造成细胞凋亡的主要因素之一。}     

转基因鼠在脑缺血氧化应激研究中的应用

活性氧自由基作为脑内一类重要的病理因素直接或间接地参与脑缺血/再灌注的损伤过程。氧自由基不仅受到脑内促氧化酶与抗氧化酶间平衡的调节,同时也参与了细胞内信号转导通路,在神经元死亡中发挥着决定性作用。近年来,转基因及基因敲除鼠已广泛应用于这些影响活性氧自由基的形成和清除过程的酶类物质及各种介导细胞死亡与凋亡过程的蛋白质的研究中,为脑缺血/再灌注损伤治疗的基础及应用提供了必要条件。     

多巴胺受体(DR2)激活对乳鼠心肌细胞缺氧/再灌注损伤的保护作用及其机制

目的:观察多巴胺受体(DR2)激活对乳鼠心肌细胞缺氧/再灌注损伤的影响,并探讨其机制。方法:复制原代培养乳鼠心肌细胞缺氧/再灌注损伤模型,细胞随机分为正常组(Control)、缺氧/再灌注组(H/R)、DR2激动剂组(溴麦角环肽,Bro)、抑制剂组(氟哌啶醇,Hal)。倒置显微镜、透射电镜、流式细胞仪检测细胞凋亡情况;检测细胞培养液乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量;RT-PCR和Western blot方法检测心肌细胞促凋亡因子(Cyt C、caspase-3、caspase-8、caspase-9、Fas及Fas-L)及抑凋亡因子(Bc-l 2)mRNA和蛋白表达。结果:与正常组相比,H/R组细胞凋亡率、LDH活性、MDA含量、促凋亡因子及抑凋亡因子表达均增加,唯有SOD活性降低;与H/R组比较,Bro组可减轻或逆转上述指标的变化;Hal组上述指标变化不明显。结论:DR2激活可抑制缺氧/再灌注所致的乳鼠心肌细胞损伤和凋亡,机制与减少氧自由基有关。     

海金沙草多糖的提取及抗氧化活性(英文)

用响应面优化技术研究了提取时间、固液比、提取温度等对海金沙草粗多糖提取的定量影响,获得了提取工艺的最优工艺参数:提取时间为123.3 min,固液比(s/w)为1∶20.9,提取温度为49.9℃,二阶多项式曲线回归模型预测多糖产量为12.466%,多糖提取验证试验结果(提取率)为12.85±0.18%(n=3),比模型预测稍高。多糖经纯化并进行体外抗氧化活性研究(以维生素C为对照品),结果发现,多糖产物对超氧阴离子(O2–.)和羟基氧自由基(.OH)具有较好的清除作用。     

咪唑类氮氧自由基的合成及其DPPH清除能力的研究

目的:合成8种新型咪唑类氮氧自由基(4a~4h),并探讨其对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基(DPPH)的清除作用。方法:本文以2-硝基丙烷为原料,经烷基化、还原、缩合及氧化反应等步骤,合成8种新型咪唑类氮氧自由基(4a~4h)。将4a~4h分别与DPPH作用,使用紫外-可见分光光度法测定其中DPPH的浓度,考察4a~4h对DPPH自由基的清除作用,以四甲基哌啶氮氧自由基(Tempol)作为阳性对照。结果:合成中间体及终产物经~1H NMR、HRMS、EPR等光谱数据确证了结构。通过DPPH自由基清除实验,结果显示所合成的8种新型咪唑类氮氧自由基对DPPH均有清除作用。结论:合成了新型咪唑类氮氧自由基,并对其合成方法进行了重要改进。在对DPPH自由基清除能力方面,8种化合物在一定浓度范围(0.01μmol/mL-2.4μmol/mL)内,清除作用与浓度成依赖性增长关系。其中,4b与Tempol相当,4a优于阳性对照Tempol,具有进一步开发研究的潜在价值。     

参麦注射液抗心肌缺氧-再给氧损伤实验研究

采用Ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆ离体心脏灌注模型,对大鼠心肌缺氧—再给氧损伤中抗自由基酶ＳＯＤ和ＧＳＨ－Ｐｘ,过氧化产物ＭＤＡ、心肌酶ＣＰＫ和心肌细胞超微结构进行了观察、同时探讨了参麦注射液的保护作用机理。结果表明：（１）心肌缺氧灌注４０ｍｉｎ,富氧再灌５ｍｉｎ,与正常对照组比较,心肌细胞超微结构损伤严重,线粒体数目减少,大部分空泡变性,嵴消失,糖原颗粒减少,心肌收缩结构受到严重破坏。同时ＣＰＫ活性明显升高,ＳＯＤ及ＧＳＨ－Ｐｘ活性明显降低,ＭＤＡ含量明显升高（Ｐ＜０．０１）。（２）预先给不同剂量参麦注射液进行灌注,与模型组比较,心肌超微结构损伤明显减轻,线粒体数目较多,嵴密集,未见肿胀变形,糖原颗粒丰富,心肌收缩结构基本正常。ＣＰＫ活性明显降低,心肌ＳＯＤ及ＧＳＨ－Ｐｘ活性明显增高,心肌ＭＤＡ含量明显降低（Ｐ＜０．０１）。且参麦大剂量组疗效优于复方丹参液（Ｐ＜０．０５）。我们推测其保护作用机理可能是稳定心肌细胞膜,保护心肌线粒体,增加能量供应,提高抗自由基酶活性,从而减轻氧自由基对心肌的损害     

青藤碱抗大鼠肝脏缺血/再灌注损伤作用的机制探讨

目的:观察青藤碱时大鼠肝脏缺血再灌注损伤的影响,探讨其保护大鼠肝脏缺血再灌注损伤作用的机制.方法:通过建立大鼠全肝缺血再灌注损伤模型,应用硝酸酶还原法测定肝脏缺血再灌注后60min血清NO水平变化;测定再灌注60 min后肝组织内MDA和SOD含量变化;再灌注60min取肝组织完成肝组织显微结构的观察.结果:肝脏缺血再灌注损伤后血清NO水平降低;青藤碱能提高再灌注后血清NO水平,且能改善肝脏缺血再灌注损伤的微循环,减轻肝细胞内超微结构的损害程度.结论:青藤碱对大鼠肝脏缺血再灌注损伤有保护作用,其主要作用机制是清除氧自由基和改善微循环.     

冬虫夏草对缺血再灌注损伤修复和作用机制的研究进展

冬虫夏草是珍贵中药材,内含丰富的生物活性成分,冬虫夏草对器官缺血性再灌注损伤具有一定的保护作用。文中首次总结了冬虫夏草对心、脑和肾缺血再灌注损伤的修复作用和相关调控机制最新的研究进展。冬虫夏草在肾缺血再灌注损伤过程中能够清除多余的自由基,抑制炎症级联反应、肾细胞凋亡、内质网应激和调控抗氧化基因的表达,降低氧化应激水平;通过调节VEGF和NGAL,来改善血管内皮损伤及慢性缺氧损伤,从而起到一定的保护肾脏作用。冬虫夏草能有效促进脑组织中SOD、GSH-PX和CAT活性,降低MAD含量,抑制脂质过氧化反应,改善自由基代谢;通过抑制炎症因子TNF-α、IL-1β和ICAM-1的表达,促进脑缺血损伤功能恢复;冬虫夏草增加Hcn2、S1c6a1基因表达上调和Hspa12a表达,对脑神经元起到保护作用。冬虫夏草通过减缓心律失常、提高机体耐缺氧能力、稳定溶酶体膜以及改善心肌的能量代谢,保护心肌缺血再灌注损伤MIRI后的心肌损伤;冬虫夏草能使Grp78和Caspase-12的m RNA及mi R-455的含量均降低,从而减少MIRI后内质网应激介导的细胞凋亡。上述研究结果的总结为后续系统地研究冬虫夏草保护器官性缺血再灌注损伤的作用提供参考。