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合成的富含嘌呤或嘧啶的脱氧寡核苷酸可与双链DNA内特定的同聚嘌呤、同聚嘧啶序列结合形成稳定的三螺旋结构(三链DNA)。已在体外及体内证实了在靶基因内形成的局部三链DNA可抑制其转录,这给肿瘤和病毒感染性疾病的治疗提示了新的方向,人们称之为反基因策略。然而,三链DNA的稳定性不够理想和靶序列的选择范围较窄等问题的存在,在一定程度上限制了反基因策略的应用。 相似文献
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自Dervan等1987年首先证实三链DNA的形成可介导对靶DNA的特异切割以来,有关三链DNA的研究进展和奶快。本综述了近几年分子间三链DNA在基因表达调控、染色体作图、基因分离及定点诱变等方面的应用,并对三链DNA应用中存在的几个问题及相应的解决方法作了简单介绍。 相似文献
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中国科学院昆明动物研究所刘次全研究员等 ,在中国科学院化学研究所STM实验室首次观察到变性条件下λ噬菌体DNA三链辫状结构的直观形貌 ;在此基础上 ,参照TAT三碱基体的有关结构参数 ,分别在M - 2 40 0计算机和SGI系统的4D/ 80s、 4D/ 2 0G和SGIIndigoR40 0 0上成功的构建了国内外第一个三链辫状结构模型 ;进而就三碱基体模型和能力学 ,DNA三链结构模型和能力学 ,以及三链DNA碱基配对相互作用三链和三链辫状DNA构象比较方面 ,进行了系统的定量和半定量的理论生物学研究。在取得较大进展的基础上 ,又对… 相似文献
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三链形成寡聚核苷酸的反基因作用机制 总被引:1,自引:0,他引:1
1957年Felsenfeld等发现一条PolyA链能跟两条PolyU链形成三螺旋 ,这是三链形成寡聚核苷酸 (triple formingoligonucleotide ,TFO)研究的开始[1] 。随着DNA合成技术的进展 ,人们能合成各种序列的寡聚核苷酸。1 987年LeDoan等[2 ] 发现聚嘌呤或聚嘧啶寡聚核苷酸能序列特异地结合于同聚嘌呤 /同聚嘧啶DNA双链的大沟内 ,识别的机制包括形成Hoogsteen和反Hoogsteen氢键。现在常用的包括含 (G、A) ,含 (G、T)或含 (C、T)的 3种TFO以及它们的类似物。… 相似文献
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四链DNA(loopG4)螺旋结构的计算机模拟 总被引:1,自引:0,他引:1
对包含连续鸟嘌呤的寡核苷酸所形成两种反平行四链DNA(统称loopG4)的螺旋体部分进行了计算机模拟,给出了各种结构参数,发现loopG4中的磷酸基团呈疏密相间的分布,导致与其抗衡的K+亦呈疏密相间的分布。与先前做的平行四链DNA相比较,平行G4的构象能最低,二沟G4和三沟G4次之。loopG4中G四聚体的两种不同堆积方式以背对背的堆积能为低,为实验结果提供了理论支持。还探讨了能量优化过程中G4-DNA的构象变化趋势,提示了金属离子的不同类型或不同浓度可能会导致G4-DNA构象的改变 相似文献
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三螺旋结构寡核苷酸对特定基因抑制作用的研究进展 总被引:3,自引:0,他引:3
熊鸿燕 《国外医学:分子生物学分册》2000,22(4):243-247
三股螺旋结构寡核苷酸9TFO)能直接与目标双链DNA连接,可阻止DNA的延伸、抑制转录因子与基因连结,在DNA水平干扰基因表达,TFO可分为嘧啶型和嘌呤型两大类,其与目标基因双链形成的三聚体复合物的稳定性受多种理化因素的影响,序列的化学修饰以及“拉链”寡核苷酸和多聚赖氨酸衍生物的协同作用能明显增加TFO与目标基因的连接及复合物的稳定,增强对目标基因的抑制作用。 相似文献
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人IgG Fc基因克隆及人源抗HBsAg全分子抗体在CHO … 总被引:1,自引:0,他引:1
利用mRNA提取试直接从健康人外周血白细胞中提取mRNA,逆转寻为 cDNA,合成引物扩增人抗体分子IgGI亚型Fc基因,克隆到pGEM-T-Vector中并测序。合成引物扩增人抗体分子轻,重链信号肽序列,分别克隆并测序将轻链信号肽和轻链(kappa)VL-CL基因进行重组形成轻链全分子基因,再将其克隆到哺乳细胞表达载全pcDNA3.1中。将重链信号肽、重链(gamma)VH-CH1和Fc基因进行 相似文献
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草鱼(Ctenopharyngodon idellus)线粒体DNA控制区及其两侧tRNA基因的克隆与结构分析 总被引:3,自引:0,他引:3
动物线粒体DNA控制区是线粒体基因组复制与基因表达的最主要的调控区.采用杂交和测序的方法对草鱼线粒体DNA控制区进行定位、克隆并测定了控制区及其旁侧的tRNAPhe、rRNAPro和rRNAThr三个基因的序列,与多种脊椎动物的相应序列进行了比较,并进行了结构分析.草鱼线粒体控制区全长927bp,含有与酵母和爪蟾线粒体启动子相似的序列,其CSBⅠ、CSBⅡ和CSBⅢ序列与其他几种动物的CSB比较相当保守,TAS与其回文基序可形成稳定的茎环结构,成为H-链复制的终止信号.草鱼线粒体tRNAPhe、tRNAPro和tRNAThr可折叠成三叶草形二级结构,其基因具有许多不同于细胞质tRNA基因的结构特点,可能反映了线粒体tRNA与线粒体核糖体具有不寻常的作用方式 相似文献
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1957年Felsenfeld等发现一条Poly A链能跟两条Poly U链形成三螺旋,这是三链形成寡聚核苷酸(triple-forming oligonucleotide,TFO)研究的开始[1].随着DNA合成技术的进展,人们能合成各种序列的寡聚核苷酸.1987年Le Doan等[2]发现聚嘌呤或聚嘧啶寡聚核苷酸能序列特异的结合于同聚嘌呤/同聚嘧啶DNA双链的大沟内,识别的机制包括形成Hoogsteen和反Hoogsteen氢键.现在常用的包括含(G、A),含(G、T)或含(C、T)的3种TFO以及它们的类似物.人们根据TFO能序列特异的识别双螺旋DNA,从而可能影响基因的转录而发展出反基因战略. 相似文献
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以鱼呼肠孤病毒双链RNA为模板,建立一种快速、简便、高效的cDNA合成及克隆策略。在一定量模板条件下,采用随机六聚体为引物合成cDNA第一链。以退火方式形成双链cDNA,直接通过琼脂糖凝胶电泳检测其cDNA合成产量。双链cDNA经两端补齐后,平头连接于具有阳性选择标记的载体中,以高效电转化的方式进行快速克隆。 相似文献
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登革病毒感染性转录体技术 总被引:2,自引:0,他引:2
登革病毒 (Denguevirus)属黄病毒科黄病毒属 ,基因组结构为单股正链RNA ,全长约 1 0~ 1 1kb。登革病毒在复制过程中不形成DNA中间体 ,因此要在基因水平研究其特征存在一定困难 ,因为突变、重组、克隆等分子生物学技术都是在DNA水平上的操作。体外转录制备感染性RNA(感染性转录体 )技术提供了解决这一难题的新途径[1]。该技术是把病毒RNA逆转录成cDNA ,并置于RNA聚合酶启动子的下游 ,在RNA聚合酶的作用下体外转录出全长正链RNA ,经转染易感细胞后复制出子代病毒颗粒。由于这种子代病毒来自cDN… 相似文献
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抗人CD3单抗重,轻链可变区基因的体外扩增,克隆和序列分析 总被引:1,自引:0,他引:1
根据免疫球蛋白重链和轻链可变区基因5'端序列和J区序列,化学合成适合于体外扩增抗体重、轻链可变区基因的二对引物。从体外培养的OKT3杂交瘤细胞中提取总RNA,反转录生成cDNA,以cDNA为模板,分别加入合成的重、轻链可变区引物进行PCR,扩增出抗体重、轻链可变区基因片段。将扩增产物分别插入pUC19质粒,筛选出阳性克隆,用链终止法进行DNA序列测定。所测重链可变区基因全长357bp,编码119个 相似文献
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杆状病毒DNA解旋酶 总被引:3,自引:0,他引:3
DNA解旋酶 (helicase)是DNA复制过程中一类重要的酶 ,负责打开DNA双链 ,并参与新生链的合成 ,在DNA修复和重组过程中都发挥着必不可少的作用。杆状病毒DNA解旋酶除了参与DNA复制外 ,对于晚期基因的转录、关闭宿主蛋白质合成及决定杆状病毒宿主域方面都有重要的作用。1.杆状病毒解旋酶的结构目前已有 5种杆状病毒的DNA解旋酶基因得到克隆并测序 ,分别是苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒(AcMNPV) ,黄杉毒蛾核多角体病毒 (OpMNPV) ,家蚕核多角体病毒 (BmNPV) ,甜菜夜蛾核多角体病毒(SeMNPV)及粉… 相似文献
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根据免疫球蛋白重链和轻链可变区基因5’端序列和J区序列,化学合成适合于体外扩增抗体重、轻链可变区基因的二对引物。从体外培养的OKT3杂交瘤细胞中提取总RNA,反转录生成cDNA,以cDNA为模板,分别加入合成的重、轻链可变区引物进行PCR,扩增出抗体重、轻链可变区基因片段。将扩增产物分别插入pUC19质粒,筛选出阳性克隆,用链终止法进行DNA序列测定。所测重链可变区基因全长357bp,编码119个氨基酸,轻链可变区基因全长321bp,编码107个氨基酸。 相似文献