避孕疫苗的现状及展望

简述了近年来国内外在避孕疫苗方面的研究情况。重点介绍了抗卵透明带（ＺＰ）避孕疫苗、抗精子抗原避孕疫苗和抗人绒毛膜促性腺激素（ｈＣＧ）避孕疫苗研究的现状以及近年来取得的进展,对这三种避孕疫苗的优缺点进行了评价。阐述了作者对免疫途径避孕的观点,展望了避孕疫苗的发展前景     

乳杆菌介导的免疫避孕疫苗的研制现状

免疫避孕是一种生育期妇女节育的重要措施,研制免疫避孕疫苗是当前研究的热点领域之一。乳杆菌是一种新型的疫苗载体,本研究综述了乳杆菌介导的猪卵透明带3α抗原和人绒毛膜促性腺激素β疫苗的构建及其作用机制等方面的研制现状。     

猪卵透明带ZP3α真核表达载体的构建及体外瞬时表达

目的：构建猪卵透明带zP3α真核表达栽体,为探讨卵透明带DNA疫苗避孕疫苗奠定基础。方法：采用PCR法获得了去除N端信号肽序列和C端跨膜区序列的猪卵透明带ZP3α的cDNA序列片段,以专门用于发展DNA疫苗的质粒pVAX1为载体构建了真核细胞表达质粒pvAX1-pZP3α。通过脂质体转染将之导入HeLa细胞进行体外瞬时表达,然后采用RT—PGR和间接免疫荧光技术(IIF)检测pZP3α在mRNA水平的转录和蛋白质水平上的表达。结果：真核细胞表达质粒pVAX1-pZP3α构建成功,用RT-PCR和IIF技术检测到了pZP3α在HeLa胞中的转录与表达。结论：真核表达载体pVAX1—pzP3aα的成功构建和表达为研制开发有效的人用卵透明带DNA避孕疫苗奠定了基础。     

免疫不育疫苗的研究进展

免疫不育疫苗主要以哺乳动物的精子或卵子蛋白以及在受精和胚胎早期发育过程中发挥重要作用的激素为靶抗原。以激素为抗原的不育疫苗产生的不育效果多为不可逆的,且对机体损伤较大。以精子表面抗原制备的疫苗能够诱导产生精子抗体和不育效果,目前已成为避孕研究的一个热点。哺乳动物卵透明带（zona pellucida,ZP）是覆盖于卵母细胞及着床前受精卵外的一层基质,其在调节精卵特异性结合、诱导获能精子发生顶体反应和阻止多精受精等方面发挥着重要作用。ZP相对分子质量较小且免疫原性强,是免疫不育疫苗理想的靶抗原,抗ZP抗体可阻断精卵结合,故可被用作人类避孕和免疫不育控制有害动物种群数量的靶抗原,但人用ZP疫苗免疫机体后造成的卵巢功能损伤和免疫抑制等问题尚有待明确。     

卵透明带ZP3的研究及其应用

卵透明带蛋白围绕在卵母细胞外,在受精过程中起着重要作用。ZP3蛋白是卵透明带蛋白家族中的重要成员,在功能上,ZP3作为初级精子受体,起始精卵结合和顶体反应。由于ZP3在受精中的重要作用,它成为免疫避孕的有效靶点。ZP3蛋白疫苗和DNA疫苗可以诱导机体产生较强的免疫反应,导致生育降低,同时带来一定程度的副作用。本文重点介绍了ZP3的免疫特性及其应用。     

人乳头瘤病毒疫苗的研究进展

人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）是公认的几种瘤病毒之一,与多种人类良、恶性肿瘤的发生密切相关。有效疫苗的研制,对控制ＨＰＶ感染和ＨＰＶ相关肿瘤的免疫治疗都有十分重要的意义。本文就近年来ＨＰＶ的肽疫苗、重组病毒（细菌）疫苗,病毒样颗粒（ＶＬＰ）疫苗以及ＤＮＡ疫苗的研究进展作一综述。     

草原兔尾鼠和昆明白小鼠卵透明带3 DNA疫苗免疫不育效果的研究

为探讨不同种类小鼠卵透明带3（zp,）的免疫不育效果,并筛选高效且具有物种特异性的DNA抗生育疫苗,本研究选择草原兔尾鼠卵透明带3（Lzp3）和昆明白小鼠卵透明带3（Mzp3）构建不同的DNA抗生育疫苗表达载体,pcDNA3-mzp3（pcD-M）、pcDNA3-1zp3（pcD-L）、pcDNA3-aat-comp-mzp3（pcD-ACM）和pcDNA3-aat-comp-lzp3（pcD-ACL）分别免疫NIH小白鼠。研究中用水动力转染技术取代传统的Hela细胞真核转染检测小鼠体内真核表达情况．结果表明四种质粒均能在小鼠肝脏中进行表达;ELISA图示表明重组质粒均能使小鼠激发较高水平的特异性抗体;抗生育结果表明四种DNA疫苗均具有免疫不育的效果（P〈0．05）,其中pcDNA3-aat-comp-mzp3（pcD-ACM）的免疫效果最好（P〈0．01）;卵巢病理切片H．E染色结果显示pcD-M和pcD-L组卵巢结构与对照小鼠区别不大,而pcD-ACL和pcD-ACM组卵巢结构发生病理性变化。结果初步说明草原兔尾鼠和昆明白小鼠卵透明带3对NIH小白鼠均有抗生育效果,但不具有物种特异性。     

国产避孕疫苗研究现状和前景

国产第１代避孕疫苗已经研制成功。疫苗构建是采用妊娠特异性强、妊娠期短暂出现的糖蛋白激素－－人类绒毛膜促性腺激素（ｈｕｍａｎ ｃｈｏｒｉｏｎｉｃ ｇｏｎａｄｏｔｒｏｐｉｃ ｈｏｒｍｏｎｅ,ｈＣＧ）为靶抗原,应用蛋白质工程技术研制的。抗原不但保留了ｈＣＧ的生物活性,而且不与垂体的其他３种激素交叉,并克服了“自身免疫耐受性”,使免疫系统对它作为“非自身”而产生抗体反应。以此构建的第１代避孕疫苗原型,经临     

去Ｎ端信号肽和Ｃ端跨膜区猪卵透明带—３β蛋白在原核系统表达的研究

猪卵透明带（Zona pellucida,ZP)由生物化学和免疫学性质截然不同的三种糖蛋白（pZP１、pZP3α和pZP3β）组成由于抗pZP3β抗体能在体外与人ＺＰ发生交叉反应,因此pZP3β一直被认为是研制抗受精避孕疫苗的潜在抗原之一,为了能在原核系统中获得无卵巢因子污染的pZP3β蛋白,本文采用ＰＣＲ方法删除了原cDNA中编码５′-和３′－端信号肽和跨膜区的ＤＮＡ顺序。扩增的pZP3β基因核心片段（pZP3β″）经ＤＮＡ测序验证后,通过引入其两端的ＥcoRⅠ和SalⅠ酶切位点被定向插入pＢＶ２２１质粒ＰＲＰＬ启动子下游的多克隆区。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析表明：工程菌在热诱导后能特异地表达pZP3β蛋白,并能在蛋白印迹实验中被兔抗pZP IgGs识别。     

人卵透明带蛋白ZP3a和ZP3b肽段的免疫原性及其抗血清体外抑制人精子-半透明带结合

分析大肠杆菌表达的重组人卵透明带-3（r-huZP3）蛋白两个肽段（r-huZP3a^22-176及r-huZP3b^177-348）的免疫原性,比较两者抗血清体外抑制人精子-半透明带结合的能力。以制备性聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）纯化的大肠杆菌表达蛋白为抗原,主动免疫新西兰兔产生抗huZP3a^22-176及huZP3b^177-348抗血清：通过ELISA测定比较两者的抗体应答水平;以蛋白印迹和免疫组化方法测定两者抗血清同重组表达蛋白、大然人卵ZP以及卵巢组织的反应性;通过竞争性半透明带结合试验（hemizona assay,HZA）观察两者抗血清体外抑制人精子-ZP结合能力。结果显示：未与人分子蛋白载体耦联的r-huZP3a^22-176和r-huZP3b^177-348抗原都在免疫兔中产生了较高的抗体滴度,而且它们的抗血清可识别人肠杆菌表达的各自重组ZP3肽以及人卵细胞表面天然ZP,两者抗血清也都能在体外抑制人精子-ZP结合。由此可见,r-huZP3^22-176及r-huZP3b^177-348蛋白具有良好免疫原性,所产生抗血清也都显示出细胞和组织特异性。因此,单一或合并两个huZP3肽段均可作为抗原研制检测不明原因性不孕妇女中是否存在抗自身ZP抗体的诊断试剂盒,另外它们的抗血清也能用于鉴定已知huZP3表位肽段的最小B-细胞表位基序。     

hCG嵌合肽在大肠杆菌中高表达的研究

目的：研制基因工程嵌合肽（CP）抗原的科学意义和应用价值，除取决于CP构建物能否体现强免疫原性和光或无MHC遗传限制外，它还应能在生物系统中被高表达，对于后，我们作了多方面的探索，包括在系列hCG CPs(-1,-7,-10,和－11）的N端再接一段25聚肽的研究。方法：插入片段选自可高表达的猪卵透明带（pZP)－4蛋白的N端，在上述hCGCPs的衍生物（CP12，CP15－17）构建中，先合成它的编码序列正负链4个DNA片段，然后配对退火，再连接成一个大片段，由于其5'端为EcoRI(E)粘性末端，3'端接了母体CPs 5'端ATG后至B HI(B)粘性末端的17bp序列，故此合成片段被直接经E和B双酶切构建pBV221/CP系列重组质粒，并分别经DNA测序验证，结果：在SDS－PAGE分析中，新构建的CP衍生物在宿主菌中的表达量均比母体CPs有明显提高，且的特异表达都为单抗OT3A的蛋白印迹试验所证实。另外，用兔抗pZP多抗的检测显示阴性结果，表明所选用的pZP-4肽段内无B细胞表位存在。意义：本工作不仅为今后其他CP分子设计和高表达研究结累了经验，也扩展了可供筛选的hCG CP避孕和／或肿瘤治疗性疫苗原系列。     

乙型肝炎脂肽疫苗

脂肽疫苗中的脂质部分能够提高肽苗的免疫原性,在无佐剂的条件下即能有效地激发体内抗原特异性的体液和细胞免疫反应。该文主要综述了乙型肝炎脂肽疫苗研究进展,为进一步研制用于预防和治疗的新型乙型肝炎脂肽疫苗奠定基础。     

卵透明带基因的分子生物学研究概况

卵透明带蛋白是免疫避孕的潜在免疫原。现代分子生物学技术的导入使卵透明带研究跃上了基因水平的新台阶。本综述了近年来以小鼠为主包括人在内若干种哺乳动物卵透明带基因的研究进展,及这些基因的分离、定位、结构特征及表达机制。     

蝎毒素可被用作构建肽类新药分子的“骨架”

蝎毒素可被用作构建肽类新药分子的“骨架”吉永华,赵菁（中国科学院上海生理研究所,上海２０００３１）（中国科技大学生物系九六届实习生）关键词蝎神经毒素多肽,分子模板,新药研制与开发经过近４亿年的漫长进化过程,蝎子由原先约２ｍ多长海生庞然大物逐渐演化为现...     

恶性疟原虫杂合多肽抗原与霍乱毒素B亚单位融合基因在大肠杆菌中的表达

目前疟疾因其发病率较高,分布范围广,恶性疟病程凶险和无特效疫苗用于预防而倍受关注,研制有效的疫苗刻不容缓。由于用常规方法难以研制抗疟疫苗,不少实验室都在尝试用多肽化学合成和基因重组等生物高技术来解决这一世界性难题。我们在patarroyo报道的化学合成的45肽和58肽这两种杂     

抗艾滋病分泌型重组BCG疫苗的研究进展

抗艾滋病分泌型重组ＢＣＧ疫苗,是一种含有分泌融合蛋白质的牛分枝杆菌ＢＣＧ菌的疫苗。融合蛋白质是由外来抗原肽（艾滋病毒表面抗原肽）插入含有信号肽的载体蛋白（抗酸菌的α抗原）分子表面得到的。该疫苗能有效地诱导杀伤Ｔ细胞,显著提高抗体水平,用于艾滋病的预防和治疗。     

肺炎链球菌疫苗的研究进展

肺炎链球菌疫苗研制对于肺炎链球菌感染的防治具有重要意义。常见的荚膜多糖疫苗存在很大缺陷,需要更为有效的疫苗来替代。本文综述肺炎链球菌疫苗研制中的一些进展,包括结合疫苗的研制、几种公认的蛋白疫苗因子的研究进展和新的蛋白疫苗因子的筛选。同时还介绍肺炎链球菌疫苗研制过程中的一些新思路（联合疫苗、活疫苗、DNA疫苗）,它们是对肺炎链球菌疫苗研制方法的丰富。     

WHO新型佐剂第三次会议简报

佐剂对各种类型疫苗(如全菌体疫苗、亚单位疫苗、合成肽疫苗或DNA疫苗)的免疫反应质量产生了关键的和独特的影响。目前,明矾是获准在人类疫苗中使用的少数几种佐剂之一。有资料显示,很多重组和合成肽疫苗与明矾配方后免疫原性差,因而临床上研制了大量新的、比明矾更有效的佐剂。     

犬卵透明带3DNA疫苗在小鼠模型中的避孕效果评价

为了评价犬卵透明带3(CZP3)DNA疫苗的避孕效果,采用6只雌性小鼠Mus musculus肌肉注射50μg pcDNA3-CZP3质粒后30 V电压刺激6次的方法建立实验组,以6只同等注射pcDNA3质粒的雌性小鼠为阴性对照组;初免后每周采血并用ELISA方法检测小鼠的CZP3抗体水平及第6周抗体滴度;第6周与雄鼠合笼,计算产仔数;第24周收集卵巢制成HE染色切片进行观察;最后用小鼠血清进行小鼠及犬卵透明带的间接免疫荧光实验。结果显示,1)实验组小鼠从初免第2周就产生了抗CZP3的抗体,并且与阴性对照组之间的差异有统计学意义(P0.05);第24周实验组的抗体水平与阴性对照组之间的差异有高度统计学意义(P0.01)。2)第6周血清中的抗体1∶4 000倍稀释时,实验组与阴性对照组之间的差异有高度统计学意义(P0.01)。3)小鼠生育率由阴性对照组的100%降低至实验组的50%,平均产仔数由阴性对照组的(6.667±0.422)只降至实验组的(2.500±1.455)只,且实验组的抗体水平与产仔数呈高度负相关。4)卵巢HE染色切片结果显示,CZP3 DNA疫苗避孕的免疫未对小鼠卵巢发育产生影响。5)间接免疫荧光实验显示,实验组小鼠产生的血清可以与小鼠及犬卵子的卵透明带基质结合。综上所述,CZP3 DNA疫苗在小鼠模型中能够显著降低小鼠的生育率及产仔数,但不影响小鼠的卵巢发育。     

保护HLA—DR3转基因鼠抗结核杆菌感染的复合期多表位疫苗

结核分枝杆菌（Mtb）每年导致近200万人死亡。BCG是当前唯一使用的结核病疫苗,能够诱导不恒定的保护力,不能防止潜伏性结核病的复活。因此,急切需要有效的疫苗来补充BCG。由于在细菌的繁殖阶段与休眠阶段结核分枝杆菌的蛋白质组在性质和数量上不同,所以改良的结核病疫苗应该能够诱导产生对感染各个阶段表达的结核分枝杆菌抗原的免疫应答。因此,这种“复合期”疫苗应该由结核分枝杆菌感染不同阶段表达的（免疫决定簇）抗原组成。作为一个概念性多级疫苗,我们通过融合五种HLA—DR3限制性T细胞表位构建了一个多表位肽（polyepitope）,这些限制性表位来源于不同的结核分枝杆菌蛋白,有繁殖期高表达产物（Ag85B,hsp65,19kDa脂蛋白）,有休眠菌富表达而且经结核菌素皮下测试阳性（TST＋）个体验证的产物（hspl6,Rvl733c）。在体外试验中,结核病治愈后HIA-DR3＋而非HLA-DR3-病人和结核菌素皮下测试阳性个体的外周血单核细胞对复合期多表位肽反应良好。使用缺乏内源性鼠Ⅱ类基因的HIA—DR3转基因小鼠模型,在体内分析了复合期多表位肽的免疫原性和保护效力。用CpG做佐剂的复合期多表位肽免疫动物产生了高水平的IgG以及多功能CD4’T细胞,它们能够产生HLA-DR3限制性表位特异性的IFN-y、TNF和IL-2。重要的是,当作为预防性疫苗时用结核菌攻击之后,复合期多表位肽的免疫降低了肺部结核杆菌的数量。考虑到可用于免疫识别的潜在Mtb抗原的广谱性,我们的模型数据证明了复合期多表位肽疫苗预防结核病的潜力。