糖基磷脂酰肌醇锚定蛋白质与肿瘤血管生成的关系

肿瘤血管生成是一个非常复杂的过程,涉及到多种因子的调节。目前,已发现多种糖基磷脂酰肌醇锚定蛋白质与肿瘤血管生成密切相关。尿激酶型纤溶酶原激活剂受体(urokinase plasminogen activator receptor,uPAR/CD87)、CD55、基质金属蛋白酶、T-钙黏着蛋白、RECK、Eph家族受体作用蛋白A(Eph family receptor interacting protein A,ephrin A)等均能调节肿瘤血管生成过程。本文对糖基磷脂酰肌醇锚定的调节因子如何影响肿瘤血管生成,以及它们作为肿瘤治疗的主要靶标研究进行综述,为肿瘤治疗的抗血管生成新靶标的设计提供信息。     

尿激酶型纤溶酶原激活物受体研究进展

尿激酶型纤溶酶原激活物受体作为胞外纤溶酶系统的一员,以糖基磷脂酰肌醇锚的形式固定于细胞膜上,它参与了胞外纤溶酶活性的调节,具有内化受抑制的尿激酶的功能;同时参与了胞外信号的传递;另外它对癌症的临床预后及抗癌转移的研究有重要的意义．     

膜锚蛋白结构与功能及其调控机制

最近发现一些膜蛋白不是通过疏水的穿膜结构固定于膜上,而是通过与糖链结合直接连接到糖基磷脂酰肌醇(GPI)上,成为一种蛋白质在膜上锚着的新型方式.这些膜锚蛋白包括:粘附分子;受体蛋白;酶蛋白等.这些生物活性分子由于在膜上的运动性增大,可产生继发的生物效应.膜锚蛋白有膜结合型和溶于体液的可溶性型,通过蛋白与 GPI 的结合和脱离,可调控其生物活性;产生的 GPI 本身亦可作信使物质,调控细胞分裂与分化等.     

影响血清中GPI-PLD活性检测的因素

采用在碱性条件下正丁醇抽提的人胎盘膜上的碱性磷酸酶（ＡＬＰ）作底物, 检测血清中糖基磷脂酰肌醇－ 特异性的磷脂酶Ｄ （ＧＰＩ－ＰＬＤ） 的活性水平． 这种ＡＬＰ 含疏水的ＧＰＩ锚定膜结构（ａｎｃｈｏｒ）, 与血清保温后能被其中的ＧＰＩ－ＰＬＤ降解成亲水的不含ＧＰＩ－锚定的ＡＬＰ． 采用Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１１４ 二相分离法和梯度凝胶电泳法来分离含ＧＰＩ的ＡＬＰ和不含ＧＰＩ的ＡＬＰ, 计算出转化率（％ ）, 用来表示ＧＰＩ－ＰＬＤ酶活性． 对这两种方法进行比较后, 表明在一般实验室条件下, 二相分离法更为简便, 并对其影响因素进行了全面探讨．     

假丝酵母黏附相关糖基磷脂酰肌醇锚定细胞壁蛋白的研究进展

假丝酵母（俗称念珠菌）是人类重要的条件致病性真菌,可导致人体浅表组织感染,甚至入侵血流引起念珠菌血症和播散性念珠菌病。黏附是念珠菌机会性感染的第1步,该过程受黏附蛋白的精确调控。糖基磷脂酰肌醇锚定细胞壁蛋白（GPI-CWP）家族中有许多成员参与调控念珠菌的黏附。本文就几种重要的念珠菌黏附相关GPI-CWP：凝集样序列（Als）、菌丝壁蛋白1（Hwp1）、上皮细胞黏附素（Epa）、聚苯乙烯黏附增强蛋白1（Eap1）等的致病机制展开综述。     

胰岛素介体产生机制的探讨

胰岛素介体──肌醇磷酸多糖,被认为是胰岛素的第二信使,存在于细胞膜上的糖肌醇磷脂是产生该介体的前体,经胰岛素或磷脂酰肌醇特异性的磷脂酶Ｃ（ＰＩＰＬＣ）水解,产生介体和二酰甘油（ＤＧ）．本实验以人红细胞为材料,用３￣Ｈ同位素标记、有机溶剂提取、薄层层析及放射性自动计数等方法,分析胰岛素或ＰＩＰＬＣ作用于红细胞后前体和ＤＧ的变化情况,以推测介体的产生机制．结果显示：胰岛素使红细胞膜上及释放至胞外上清的前体量均较对照升高,且使体系中的ＤＧ量升高;ＰＩＰＬＣ则使红细胞膜上的前体量下降,使释放至胞外上清的前体量升高,推测：胰岛素或ＰＩＰＬＣ作用于完整细胞时,激活了某种酶,使前体先从膜上释放至胞外上清,再被水解为介体和ＤＧ,同时胰岛素还可能激活完整细胞内再合成前体的机制,而ＰＬＰＬＣ却不能．     

磷脂酰胆碱特异性磷脂酶C的研究

随着人们对信号转导认识的逐步加深,各种磷脂酶在信号通路中的作用也日渐受到重视,并日趋明了。其中磷脂酶Ａ２（ＰＬＡ２）、磷脂酰胆碱特异性磷脂酶Ｄ（ＰＣ－ＰＬＤ）的基因已克隆,对磷脂酰肌醇特异性磷脂酶Ｃ（ＰＩ－ＰＬＣ）也有较深了解,而对磷脂酰胆碱特异性磷...     

哺乳动物精卵黏附和融合的分子基础

哺乳动物受精是一个多分子参与的多级过程,在精卵融合形成一个受精卵时达到顶点。新的研究已表明:精卵黏附后,精子膜从赤道区开始与卵膜融合;有精子膜上的去整合蛋白金属蛋白酶蛋白家族(ADAM)、Izumo、附睾蛋白DE、卵膜上的整合蛋白、四次跨膜蛋白CD9、CD81、糖基磷脂酰肌醇锚定蛋白等多种分子参与精卵黏附和融合过程。     

GPI锚定蛋白前体C-端附着信号的疏水性决定其内质网相关蛋白质降解途径

目前,已知超过150种糖基磷脂酰肌醇锚定蛋白(glycosylphosphatidylinositol anchored protein, GPI-anchored protein)在哺乳动物细胞中表达,并参与免疫识别、细胞通讯与信号转导等多种生理过程。当蛋白质无法被GPI修饰时,前体蛋白质通过内质网相关蛋白质降解(endoplasmic reticulum associated degradation, ERAD)途径降解。然而,GPI锚定蛋白ERAD的降解机制尚不清楚。为了探究GPI锚定蛋白前体的ERAD途径的具体机制,本研究敲除人胚胎肾细胞293细胞株(HEK293)的GPI转酰胺酶复合物亚基PIGS基因,进而敲除E3泛素连接酶HRD1和GP78基因,之后随机在PIGS-KO,PIGS-HRD1-KO和PIGS-GP78-KO过表达16种GPI锚定蛋白质(以亲本PIGS-KO细胞株作为对照组),Western印迹结果证明,GPI锚定蛋白前体在细胞株PIGS-HRD1-KO中的蛋白质积累量(I_PHK)和PIGS-GP78-KO中的蛋白质积累量(I_PG...     

磷脂酰肌醇转移蛋白

磷脂酰肌醇转移蛋白(phosphatidylinositol/phosphatidylcholine transfer proteins,PITP)普遍存在于真核生物细胞中,PITP能够结合并交换一分子的磷脂酰肌醇(phosphatidylinositol,PI)或磷脂酰胆碱(phosphatidylcholine,PC),并促进这两类脂分子在细胞内膜组分间的转移。PITP对细胞内膜组分间脂类的运输和代谢、分泌囊泡的形成和运输、磷脂酶C(phospholipase,PLC)调节的信号传导以及神经退化等生理生化过程具有重要的影响。综述了近年来PITP的研究进展,并对目前研究中存在的一些问题进行探讨。     

黄瓜细胞中水杨酸的信号传递研究

应用放射性标记、薄层层析和阴离子交换柱层析技术,证明黄瓜（ＣｕｃｕｍｉｓｓａｔｉｖａＬ．）细胞中存在肌醇脂质信使系统,并且水杨酸（ＳＡ）能够促进肌醇磷脂代谢,激活磷脂酶Ｃ（ＰＬＣ）,促进磷脂酰肌醇降解,导致第二信使肌醇１,４,５三磷酸（ＩＰ３）和双酰甘油（ＤＡＧ）含量增加,表明ＳＡ信号传递有可能通过肌醇脂质信使系统的介导来完成。ＳＡ的生理功能尤其在诱导植物抗病性中的作用很可能是通过肌醇脂质信使系统介导的。     

异搏定对小鼠肝癌腹水瘤细胞系PI—PLC活性的影响

本文采用６１５近交系小鼠肝癌腹水瘤Ｈｃａ－Ｆ２５ＣＬ－Ａ２细胞,测定钙拮抗剂异搏定作用前后磷脂酰肌醇特异的磷脂酶Ｃ（ＰＩ－ＰＬＣ）活性的变化,并与同样处理的瘤株内钙恒稳的有关指标相比较。结果表明经异搏定处理后的Ａ２细胞ＰＩ－ＰＬＣ活性显著降低,并在钙恒稳的指标基本呈现相应的平等变化趋。提示ＰＩ－ＰＬＣ可能参与肿瘤细胞内钙恒稳的变化过程,异搏定的作用可能与磷脂酰肌醇信号传导系统相关。     

构建表达Flag-GPI的重组乙型肝炎病毒载体

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)是小型的嗜肝DNA病毒,能够特异性地感染人肝实质细胞。HBV的易感性可以归于多个方面,包括细胞表面的受体以及细胞内的蛋白或其他因子,目前对HBV易感性的了解还有待深入。本课题利用课题组原有的HBV 5c3c载体和糖基磷脂酰肌醇(glycosylphosphatidylinositol,GPI)的特性,构建了重组HBV载体5c3c-CD59-Flag-GPI和5c3cT-Flag-GPI,转染Huh7细胞后可以将Flag标签锚定在细胞膜上,且可利用Flag抗体通过流式细胞术对其进行分选。在回补HBV包膜蛋白的情况下,5c3cT-Flag-GPI能包装形成完整的重组HBV颗粒。本研究为后续优化重组HBV的包装效率,进而为HBV易感性研究提供工具并奠定基础。     

血清中GPI—PLD的性质研究

纯化的ＧＰＩ－ＰＬＤ是分子量为１００ｋＤ的单肽链,而血清经凝胶过滤时,该酶为５００ｋＤ。了解酶分子天然状态下的性质,有助于认识其生理功能。采用凝胶过滤、疏水柱层析及超速离心分离并测定该酶活性及磷脂、甘油三酯和胆固醇的浓度。结果说明,ＧＰＩ－ＰＬＤ在血清中不是以肽的多聚体形式存在,而可能是与血脂结合,形成蛋白与脂的复合物,经超速离心后存在于ＨＤＬ的密度区内,但该复合物与富含Ａｐｏ－Ａ１的ＨＤＬ亚类是     

一种精子表面GPI锚定蛋白初步鉴定方法的建立

精子表面糖基磷脂酰肌醇（GPI）锚定蛋白(GPI-Aps)在精子不同阶段都发挥着关键作用.本研究介绍了嗜水气单胞菌毒素（aerolysin）作为生物探针来鉴定精子表面的GPI锚定蛋白.实验依次进行了嗜水气单胞菌培养、毒素提取纯化、多克隆抗体制备以及三明治蛋白印迹验证实验.凝胶蛋白分离实验显示,硫酸铵沉淀加Sephadex G-100层析柱纯化得到了分子质量为45 kD高纯度细菌毒素|蛋白印迹实验验证了制备的多克隆抗体的特异性|三明治蛋白印迹结果显示,嗜水气单胞菌毒素能识别出12条精子脂筏提取蛋白条带,其分子质量主要分布在15~130 kD之间|Alex488标记的免疫荧光实验显示,嗜水气单胞菌毒素识别的GPI锚定蛋白主要分布在精子头部和尾部.研究结果提示,嗜水气单胞菌毒素能够有效地识别精子表面的GPI锚定蛋白.     

植物信号传导中的磷脂酶

20世纪 80年代早期人们意识到构成细胞膜的磷脂不只是一道将细胞物质与外界隔开的屏障,而且是细胞对外界环境刺激作出应答的物质基础。磷脂酰肌醇（ｐｈｏｓｐｈｏｔｉｄｙｌｉｎｏｓｉｔｏｌ,ＰＩ）不但是构成细胞膜的重要组分（约占细胞膜组分的 10 %）,在细胞内外环境信号的传递方面也起着重要的作用［1］。磷脂酶（ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ）水解磷脂后产生的三磷酸肌醇 （ｉｎｏｓ ｉｔｏｌｔｒｉｓｐｈｏｓｐｈａｔｅ,ＩＰ3 ）／二酰基甘油（ｄｉａｃｙｌｇｌｙｃｅｒｏｌ,ＤＡＧ）、磷脂酸（ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｉｃａｃｉ…     

硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的功能机制研究进展

硫酸乙酰肝素蛋白聚糖是由核心蛋白和与之相连的硫酸乙酰肝素糖链组成,广泛分布于细胞膜与细胞外基质中。其中多配体蛋白聚糖（syndecan）和糖基磷脂酰肌醇锚定蛋白聚糖（glypican）存在与细胞膜上,而串珠蛋白聚糖（perlecan）和组合蛋白聚糖（agrin）表达在细胞外基质中。该类蛋白在生理与病理历程中,如发育、伤口愈合、肿瘤发生发展、感染、免疫应答等过程中担任重要作用,这些功能是其核心蛋白和糖链共同作用的结果。概述硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的功能及其机制研究进展,同时强调其在作为药物靶标和临床诊断研究中的应用。     

人参茎叶皂甙对创伤小鼠活化T细胞内磷脂酰肌醇代谢的影响

研究了人参茎叶皂甙（ＧＳＬ）对创伤小鼠活化Ｔ细胞内磷脂酰肌醇代谢的影响。结果显示,ＧＳＬ体内应用（５０ｍｇ·ｋｇ￣（－１）·ｄ￣（－１）,伤后０─３ｄ）对创伤小鼠活化Ｔ细胞内三磷酸肌醇（ＩＰ＿３）、游离Ｃａ￣（２＋）、钙调素（ＣａＭ）、ＣａＭ依赖的蛋白激酶（ＣａＭ－Ｐｋ）、蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）水平的降低具有明显的逆转效应,并可明显降低创伤小鼠血清、巨噬细胞、Ｔｓ细胞对各指标的抑制活性。ＧＳＬ（１．０─１００ｍｇ／Ｌ）在体外也可明显提高创伤小鼠活化Ｔ细胞内ＩＰ＿３、Ｃａ￣（２＋）、ＣａＭ、ＣａＭ－ＰＫ及ＰＫＣ水平。上述结果表明,ＧＳＬ可逆转创伤小鼠活化Ｔ细胞内磷脂酰肌醇代谢的降低。     

糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D的研究进展

羧基端结合有糖基化磷脂酰肌醇（GPI）结构的膜蛋白,称为GPI锚定蛋白;此后不久又鉴定出一种GPI锚定蛋白专一性的磷脂酶D（GPI-PLD）。GPI-PLD能特异性地水解GPI、释放出锚定蛋白并调节锚定蛋白的表达和生物功能等,本文概述了近年来有关GPI-PLD的研究状况,包括它的组织和器官来源,生理功能、病理条件下的活性改变,分子结构以及cDNA克隆等。     

去细胞外钙对培养鸡胚肌管磷脂酰肌醇水解的影响

本工作研究了去细胞外钙对取自９天来亨鸡胚的培养肌管磷脂酰肌醇水解的影响,８０ｍｍｏｌ／ＬＫ＾＋暴露可以显著和蔼同磷脂酰肌醇的水解。在暴露于无钙任氏液的肌管中,磷脂酰肌醇的水解随时间延长而呈指数递减。时间常数约为２６分钟。在胞外无钙时,８０ｍｍｏｌ／ＬＫ引起的磷胆酰肌醇水解与对照相比略有下降,结果表明,高钾暴露能够增强培养肌管的磷脂酰醇的水解;但与成熟的肌纤维不同,细胞外钙是必须的。