甘蔗幼叶原生质体分离过程中呼吸的变化及其影响因素

甘蔗幼叶呼吸途径以ＥＭＰ－ＴＣＡＣ为主,ＰＰＰ活力不强;游离原生质体ＥＭＰ活力与幼叶组织相近,但ＴＣＡＣ活力略有下降,ＰＰＰ活力明显提高,约为地组织的两倍,甘蔗幼叶原生质体在用酶法分离过程中,其组织呼吸速率开始时呈现短暂跃升后即迅速下降。导致呼吸下降的主因是细胞壁降解产物中的某些物质,它们通过钝化呼吸途径中某些关键酶的活性而降低了呼吸活力。     

细胞质雄性不育水稻幼穗花药的呼吸酶活性研究

研究珍汕９７Ａ和珍汕９７Ｂ的雌雄蕊原基形成期、花粉母细胞形成期和花粉母细胞减数分裂期的幼穗及单核期、二核期和三核期的花药中呼吸代谢三羧酸循环（ＴＣＡ）的苹果酸脱氢酶（ＭＤＨ）和异柠檬酸脱氢酶（ＩＤＨ）及戊糖途径（ＰＰＰ）的磷酸葡萄糖脱氢酶（Ｇ６ＰＤＨ）、磷酸葡萄糖酸脱氢酶（６ＰＧＤＨ）和５－磷酸核糖异构酶（Ｒ５ＰＩ）的活性。结果表明：可育花药的５种酶活性皆高于同期不育花药;而幼穗中,ＴＣＡ途径中的     

春小麦幼苗在水胁迫下内源ABA含量与自由基清除酶活力的变化

３个基因型的春小麦幼苗分别用ＰＥＧ作轻主胁迫（－０．６ＭＰａ）或中度胁迫（－１．５６ＭＰａ）的２个处理,不胁迫为对照,２ｄ后分开观察成熟叶和新生叶中内源ＡＢＡ和３个自由基清除酶活力对水胁迫的反应。３个基因型新生叶ＳＯＤ、ＣＡＴ平均活力极显著的高于成熟叶中的平均活力（Ｐ〈０．０１）,ＰＯＤ却是成熟的高,中度胁迫与对照相比,各基因型各叶龄的酶活力除成熟叶中ＣＡＴ的活力显著下降（Ｐ〈０．０１）外,其它都     

马铃薯野生种叶肉原生质体培养及其植株再生（简报）

马铃薯野生种叶肉原生质体培养及其植株再生（简报）何亚文,李耿光,张兰英（中国科学院华南植物研究所,广州５１０６５０）ＭＥＳＯＰＨＹＬＬＰＲＯＴＯＰＬＡＳＴＣＵＬＴＵＲＥＡＮＤＰＬＡＮＴＬＥＴＲＥＧＥＮＥＲＡＴＩＯＮＦＲＯＭＷＩＬＤＳＰＥＣＩＥＳＯＦＰ...     

甘蔗和烟草幼叶原生质体的核酸含量与核酸酶活性及其影响因素

与幼叶组织相比,酶法新鲜分离的甘蔗和烟草幼叶原生质体内的ＲＮＡ、ＤＮＡ及总核酸含量均降低。其原因可能是刚游离的原生质体内酸性和碱性ＲＮＡ酶与ＤＮＡ酶等活性提高所致。甘蔗叶原生质体内的核酸降低量和ＲＮＡ酶与ＤＮＡ酶活性的增加程度均高于烟草。随用作渗透压稳定剂的甘露醇浓度增加,甘蔗和烟草叶原生质体的ＲＮＡ酶和ＤＮＡ酶活性均相应提高。其中以甘蔗叶原生质体的核酸酶活性增加水平较明显。在细胞壁降解产物的作用下,除了甘蔗原生质体内的ＲＮＡ酶活性略被促进外,其ＤＮＡ酶和烟草叶原生质体内的核酸酶均不受影响     

用不同方法把烟草花叶病毒RNA基因导入植物原生质体的研究

应用电激法和聚乙二醇法以及脂质体协调的上述两种方法对烟草和青菜原生质体进行烟草花叶病毒ＴＭＶ－ＲＮＡ的导入试验,并应用酶标免疫技术、电镜观察、半叶接种和十二烷基磺酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）等方法对在原生质体中增殖的ＴＭＶ进行鉴定。实验证明,虽然电激法和聚乙二醇法均能有效地将外源病毒基因导入植物原生质体,但经阳离子脂质体处理后的ＴＭＶ－ＲＮＡ,其转染效率可提高１０倍以上。ＴＭＶ在原生质体转染４８小时后达到复制高峰。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示,原生质体转染４８小时后,除出现ＴＭＶ外壳蛋白明显条带外,尚有１条分子量在５０～５５ｋｄ蛋白质条带也明显增强。这些研究结果对植物遗传工程和抗病毒基因有种研究提供重要的数据和基础。     

抗坏血酸对沙打旺原生质体分离和培养中膜损伤及相关酶活性的影响

抗坏血酸（ＡＳＡ） 能减轻沙打旺原生质体的褐化,改善原生质体的培养状况。ＡＳＡ的作用可能与它增强原生质体抗过氧化能力有关。酶解处理诱导原生质体超氧化物歧化酶（ＳＯＤ） 和抗坏血酸过氧化物酶（ＡＰＸ）活性升高,但培养过程使ＡＰＸ 活性明显下降,原生质体清除过氧化物能力减弱,膜脂过氧化产物丙二醛（ ＭＤＡ） 积累增加,膜发生损伤。向酶溶液和培养基中添加ＡＳＡ 可显著提高ＳＯＤ 尤其是ＡＰＸ 活性,减轻膜脂过氧化,增强原生质体的存活力,促进原生质体的分裂和细胞克隆的形成。所有处理中过氧化氢酶（ＣＡＴ） 活性变化不大,表明它在原生质体清除过氧化物过程中不具主要作用。     

轻稀土离子对钙调蛋白激活的磷酸二酯酶活力作用的影响

研究了轻稀土离子（Ｌｎ３＋）对钙调蛋白（ＣａＭ）调控的磷酸二酯酶（ＰＤＥ）活力的影响。结果表明,在无Ｃａ２＋的ＣａＭ（Ａｐｏ—ＣａＭ）体系中,由ＣａＭ调节的ＰＤＥ的活力随Ｌｎ３＋浓度的变化曲线是双相效应,即在高浓度时,Ｌｎ３＋具有抑制ＣａＭ调节ＰＤＥ活力的能力;低浓度的Ｌｎ３＋可以提高ＣａＭ调节ＰＤＥ活力的能力。在Ｃａ２＋４－ＣａＭ－ＰＤＥ体系中,高浓度的Ｌｎ３＋的加入能抑制ＣｈＭ调节ＰＤＥ活力的能力,其抑制程度因其离子不同而异。ＣａＭ的两类拮抗剂ＪｕＡ（非竞争性抑制剂）和ＴＦＰ（竞争性抑制剂）都能抑制ＣａＭ－Ｌｎ３＋－ＰＤＥ系统的活性。最后对Ｌｎ３＋和ＣａＭ相互作用的分子机制进行了初步的讨论。     

COMPARISON OF HEPATIC ULTRASONOGRAHIC CHANGES WITH ENZYMATIC HISTOCHEMICAL CHANGES IN OBSTRUCTION OF BILE DUCT

ＣＯＭＰＡＲＩＳＯＮＯＦＨＥＰＡＴＩＣＵＬＴＲＡＳＯＮＯＧＲＡＨＩＣＣＨＡＮＧＥＳＷＩＴＨＥＮＺＹＭＡＴＩＣＨＩＳＴＯＣＨＥＭＩＣＡＬＣＨＡＮＧＥＳＩＮＯＢＳＴＲＵＣＴＩＯＮＯＦＢＩＬＥＤＵＣＴＣＯＭＰＡＲＩＳＯＮＯＦＨＥＰＡＴＩＣＵＬＴＲＡＳＯＮＯ...     

内皮素－1对缺氧肺动脉平滑肌细胞的增殖作用

内皮素（ＥＴ）是至今所发现的最强的内源性血管收缩肽,近年来发现ＥＴ－１能促进血管平滑肌细胞增殖。本研究表明ＥＴ－１对缺氧培养的肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣ）有剂量依赖的增殖作用,缺氧可促进ＰＡＳＭＣ的ＤＮＡ合成且增加ＥＴ－１的丝裂原作用。ＥＴ－１的丝裂原作用主要由其Ａ型受体（ＥＴＲ＿Ａ）所介导,ＥＴＲ＿Ａ的特异拮抗剂ＢＱ１２３可显著抑制缺氧以及缺氧与ＥＴ－１协同所产生的增殖作用,而且发现ＥＴＲ＿Ａ在缺氧培养的ＰＡＳＭＣ中的表达显著高于常氧对照组ＰＡＳＭＣ。本研究表明ＥＴ－１参与了缺氧性肺动脉结构重组,而缺氧可增强ＰＡＳＭＣ对ＥＴ－１的增殖反应性。     

甘蔗和烟草叶原生质体分离期间的膜损伤及有关酶活性变化

甘蔗和烟草叶原生质体分离期间的膜损伤及有关酶活性变化何若天,覃伟,李任强（广西农业大学实验中心,南宁５３０００５）关键词：原生质体,超氧阴离子自由基（Ｏ_２~－）,膜损伤,甘蔗,烟草植物原生质体分离期间,所用细胞壁降解酶和高渗介质等对细胞生理有深刻影响...     

几种植物组织及其原生质体过氧化物酶同工酶的比较研究

对马尾松幼苗子叶和胚轴、甘蔗、小麦、烟草、黄花菜等幼叶及其原生质体的过氧化物酶同工酶(POI)分别作比较研究。观察到凡经纤维素酶处理的各植物组织POI酶带数均多于未经纤维素酶处理的组织的酶带数;除个别例外,后者一般又比无壁原生质体的酶带数多。此种差异随植株生长年龄而增大,表明植物组织内大部分POI主要存于质外体中。     

Invertase in cultured Daucus carota cells

Invertase activity of cultured carrot cells was distributed between cell wall and supernatant fractions of the cell homogenate. The enzyme associated with the cell wall fraction was solubilized by alkaline NaCl solution and the proportions found in the cell wall and soluble fractions depended on the concentration of NaCl. Formation of protoplasts by the action of cellulase and pectinase was accompanied by release of 50–60% of the invertase activity from the cells.     

元麦叶肉原生质体细胞壁再生过程中的扫描电镜观察及过氧化物酶活性

元麦叶肉原生质体在MS培养基(附加2,4-D 1mg/L,6-BA 0.25 mg/L)中,进行液体浅层培养。用荧光增白剂(VBL)染色,培养1天出现再生壁。通过扫描电镜观察,发现随着培养时间的延长,原生质体表面逐渐出现短棒状突出物和纤维状结构;培养第5天,原生质体表面覆盖较厚的纤维层,与未脱壁的元麦叶肉细胞表面形态结构相似。用愈创木酚作氢供体测定原生质体胞壁再生过程中过氧化物酶活性,发现随着壁再生率提高,过氧化物酶活性明显下降。用聚丙烯酰胺凝胶电泳分离阳极向过氧化物酶同工酶酶谱,酶带也随着培养时间的延长而减少。由刚分离的原生质体中的8条减少到培养4天的2条,反映胞壁再生和过氧化物酶活性呈负相关。     

Polyamine oxidase in oat leaves: a cell wall-localized enzyme

The localization and activity of polyamine oxidase (PAO; EC 1.5.3.3), was investigated in leaves and protoplasts of oat seedlings. Activity of the enzyme is highest with spermine as substrate; spermidine is also oxidized, but putrescine and cadaverine are unaffected by the enzyme. Protoplasts isolated following digestion of leaves with cellulase in hypertonic osmoticum showed no PAO activity, and about 80% of the total leaf PAO activity could be accounted for in the cell wall debris. Histochemical localization experiments showed intense PAO activity in guard cells and in vascular elements whose walls are not digested by cellulase. When protoplasts were cultured in a medium suitable for regeneration of cell wall, PAO activity could be detected as the cellulose wall developed. Thus, PAO appears to be localized in cell walls.     

通气状况、某些呼吸中间产物和抑制剂对甘蔗幼叶原生质体酶解释离的影响

甘蔗幼叶原生质体酶解释离期间呼吸速率逐渐降低。通气良好者原生质体产量高,但各处理原生质体存活率差异不大。以无机盐为稳压剂者,苹果酸、α-酮戊二酸、丙酮酸钠、琥珀酸钠、柠檬酸钠等呼吸中间产物均能提高原生质体产量,尤以琥珀酸钠和丙酮酸钠效果最好。而以糖醇为稳压剂者,苹果酸、α-酮戊二酸、丙酮酸钠和琥珀酸钠等有促进作用,柠檬酸钠却有严重抑制效应,产物几全部为具壁细胞。 呼吸抑制剂如碘乙酸、氟化钠、丙二酸、叠氮化钠和2,4-二硝基酚等对原生质体产量和存活率均有抑制作用。随抑制剂浓度增加,呼吸受抑制越甚,原生质体产量和存活率的降低也越甚。琥珀酸能消除丙二酸对呼吸的抑制,并减轻丙二酸对原生质体释离的不利影响。 用酶法从具壁细胞中分离原生质体是既受细胞的代谢水平所调控,又受组成酶液的稳压剂的组分所影响。其原因需进一步研究。     

Pretreatment of Cell Suspensions as a Method to Increase the Protoplast Yield of Haplopappus gracilis

A low yield of free protoplasts was obtained when fast-growing cell suspensions of Haplopappus gracilis were treated with Driselase, an active mixture of cellulase and pectinase. If the cells in the suspension culture were pretreated by increased levels of auxin, reduced sugar concentration, addition of sulphur-containing amino acids, or by the reducing agent mercaptoethanol, protoplasts were released from a higher proportion of the cells. These pretreatments did not adversely effect division of the protoplasts.     

皱叶甘蓝的原生质体培养与植株再生

皱叶甘蓝(Brassica oleracea L. var. subauda)“SA61”(SV)的叶及下胚轴分离的原生质体在 MS_1(修改的MS)培养基上细胞壁再生和分裂启动较快。叶原生质体在 DPD_1(修改的 DPD)培养基上获得了最高的分裂率和植板率;下胚轴原生质体在MS_1上获得最佳的培养效果。叶原生质体培养3—4天后见到一次分裂;下胚轴原生质体在48小时左右即可发生一次分裂。原生质体培养 20—30天后形成肉眼可见的微愈伤颗粒,40天左右即可达1mm大小。在7种不同培养基上增殖微愈伤组织,MB_2、MB_3表现了优良的效果。在MS_2培养基上的芽分化效果最为理想。在不加任何激素的MS培养基上诱导生根,2周后得到再生植株。     

黄芪原生质体分离技术

以黄芪叶片和愈伤组织为材料,对黄芪原生质体的制备分离技术进行了研究。结果表明:采用黄芪叶片制备原生质体远远优于黄芪愈伤组织,能够获得大量高活力的原生质体;采用2%纤维素酶+0.5%半纤维素酶+0.5%果胶酶的混合酶水解12h就能达到较好的分离效果,获得高质量的黄芪原生质体,然后进行原生质体的培养。