较长单链DNA在质粒DNA中定位插入

一般重组DNA的方法都是用T_4-DNA连接酶把限制性内切酶处理过的外源DNA片段和载体DNA,连接到一起,但这种方法必须要有合适的内切酶切点,因而使得这种方法的灵活应用受到一的定限制。     

一种从重组质粒快速提纯DNA插入片段的方法

本文介绍一种从重组质粒中快速提纯ＤＮＡ插入片段的方法。质粒ＤＮＡ的制备简单、快速、分离的质粒ＤＮＡ可用于限制性酶切和转化大肠杆菌等。从琼脂糖凝胶中提纯ＤＮＡ插入片段的方法操作简单,回收效率高,提纯的ＤＮＡ片段可用于连接和制备杂交探针等。     

γ辐射诱导质粒DNA单链断裂的反向氧效应

以凝胶电泳法研究了γ辐射引起质粒ＤＮＡ单链断裂（ＳＳＢ）的氧效应,发现含自由基清除剂－甘露醇的ＤＮＡ溶液在Ｎ２饱和条件下的ＳＳＢ产额大于空气饱和时的产额,使得Ｓ析氧增比（ＯＥＲ）小于１,即ＤＮＡ之ＳＳＢ存在反向氧效应,同时,Ｇ（ＳＳＢ）及其氧增比均随甘露醇浓度的增大而减小。     

石英晶体DNA传感器检测单链DNA

利用自组装法,将5'末端标记有巯基醇的单链DNA探针,固定在4．43MHz AT切石英晶体的镀金表面,制成石英晶体DNA传感器,并用该DNA传感器进行了互补单链DNA定量定性检测的探索。     

单链环状DNA基因组的发现

单链环状ＤＮＡ基因组的发现关键词单链环状ＤＮＡ常有学生问我：您是如何着手寻找单链ＤＮＡ病毒的？您怎么一下子就找到了头绪？寻找单链ＤＮＡ并不是我最初的目标,发现它们完全是偶然机遇,或者说是因为敢于相信自己的试验数据。实际上,一开始我是想弄清楚某一病毒结...     

用石英晶体DNA传感器检测单链DNA的探索

利用自组装法,将5′末端标记有巯基醇的单链DNA探针,固定在4.43MHzAT切石英晶体的镀金表面,制成石英晶体DNA传感器,并用该DAN传感器进行了互补单链DNA定量定性检测的探索。     

酵母菌中质粒DNA的快速检测

随着基因工程研究的发展,近年来酵母质粒作为基因工程载体的研究已获得明显进展。因此,开展酵母质粒DNA快速检测方法的研究,将是很有意义的。目前质粒在啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)中研究较多。1982年龚启蕙等报道了啤酒酵母7209—1A及1984     

衰老过程中大白鼠脾细胞的DNA单链断裂与重接能力的变化

 DNA被紫外线损伤后,由DNA切除修复酶切除嘧啶二聚体,随之以另一条正常的DNA链为模板修复合成DNA片段,最后由DNA连接酶将新合成的DNA片与原有的DNA链连接。本文用荧光法测定DNA修复过程中DNA单链的断裂及重接能力与衰老的关系。结果表明,不同年龄大鼠脾细胞均具有修复DNA单链断裂的能力,DNA单链断裂重接的能力与年龄有相关性,断乳鼠及青年鼠的脾细胞当保温至30min时,即开始了DNA链的重接,保温90min后则恢复到原有水平;而老年鼠脾细胞保温至90min时才开始DNA链的重接,保温150min,尚未恢复到原有水平。还发现,断乳鼠及老年鼠脾细胞的单链DNA含量高于青年鼠。     

棒状杆菌中质粒DNA的快速检测方法

在棒状杆菌质粒DNA快速检测中,比较了三种方法:强碱法、快裂法和我们设计的酶法。用强碱法抽提的质粒带很淡,快裂法其次,且不能区别两个分子量相近的质粒;而用酶法则显带清晰,且能很好地区分两个大小相近的质粒,分辨率高,认为在棒状杆菌质粒快速检测中是一种很好的方法。     

DNA单链二级结构预测与单链构象多态性分析的一致性研究

单链构象多态性(SSCP)分析是一种简便,快速检测DNA突变的方法,它在基因突变检测、遗传分析、进化研究等领域有着广泛的应用价值.但是这种方法的突变检出率随DNA序列不同而变化,一般只能达到70%～80%.这主要是有的碱基突变对单链DNA的构象影响较小,不能通过SSCP检测出来.将计算机对DNA二级结构的预测结果和实验结果作了对比,发现二者有很高的一致性.这一结果表明计算机的DNA单链二级结构预测分析可用于PCR-SSCP分析的辅助设计,提高SSCP的突变检出率.     

γ射线辐射诱导质粒DNA单链断裂:与DNA和自由基清除剂浓度的关系

凝胶电脉扫描法研究表明,γ射线辐照下,超螺旋ｐＢＲ３３２ＤＮＡ分子的残余率随剂量的增大而按指数规律减小,而辐射诱导单链断鲜明（ＳＳＢ）数则与剂量线性相关,由于ＯＨ与ＤＮＡ反应遵循非均一动力学过程,平均引起一个ＳＳＢ所需的剂量Ｄ０随自由基清除力的增加而非线性地增大,对含一定浓度甘露醇的ＤＮＡ溶液,Ｇ（ＳＳＢ）与Ｃ（ＤＮＡ）的双倒数具有线性关系,并以二级动力学描述了ＤＮＡ和甘露醇分子对ＯＨ的竞争反应,     

用异丙醇沉淀法快速提取质粒DNA

质粒 (plasmid)是 1种染色体外的稳定遗传因子 ,大小在 1～ 2 0 0 kb之间 ,具有双链闭合环状的 DNA分子 ,主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中。它可将有用的外源基因通过基因工程的手段送入细胞中进行繁殖和表达 ,是分子生物学实验中常用的工具。制备质粒 DNA的方法有许多 ,但大多需要苯酚、氯仿抽提以除去蛋白 ,而饱和酚的配制及氯仿等有机溶剂的挥发性气味给以学生为主体的教学实验带来了诸多不便。我们经过实验 ,提出了一种快速提取质粒的方法 ,该方法避免了上述不便并可提取足够量的较纯的质粒 ,在限制性内切酶酶切、DNA转接中可以…     

一种高纯度、高得率的质粒DNA纯化法

一种高纯度、高得率的质粒ＤＮＡ纯化法汤乃梅,王晓民,韩济生（北京医科大学神经科学研究中心,北京１０００８３）关键词质粒ＤＮＡ纯化本文介绍一种方法,它不仅可以得到高纯度质粒ＤＮＡ,而且在同等纯度下的得率也高于其它方法,其操作流程如下：１．５００ｍｌ菌液...