脱钙对鼠颅骨标本中肥大细胞组织化学与免疫组织化学染色的影响

目的:探讨脱钙对鼠颅骨标本中肥大细胞组织化学与免疫组织化学染色影响.方法:用不同脱钙液处理小鼠颅骨标本,组织切片后进行苏木素一伊红染色、甲苯胺蓝染色、醛品红染色以及免疫组织化学染色.结果:经过不同脱钙液处理后的颅骨组织切片组织结构保存完好,肥大细胞的组织化学染色(甲苯胺蓝和醛品红染色),及肥大细胞中胰蛋白酶的免疫组织化学染色清晰.结论:不同脱钙液(8%盐酸脱钙液、EDTA脱钙液、混合酸脱钙液)处理不影响鼻腔粘膜中肥大细胞的组织化学和免疫组织化学染色.     

DMD的ATP酶组织化学研究

目的观察DMD(Duchenne muscular dystrophy)患者病变肌肉的酶组织化学病理改变,加深对其发病机制和预后的认识.方法对5例Duchenne型肌营养不良症患者进行肌肉活检,标本经处理,分别在HE染色、改良Gomori三色染色以及ATP酶染色(pH9.4和pH4.3)下进行观察,研究病变肌肉酶组织化学的病变特征及其意义.结果在DMD组织中肌纤维大小不等,肌纤维圆形化,炎性细胞浸润,并可见到不透光纤维.在再生肌纤维中可见到IIc型纤维.结论 DMD病变组织中纤维坏死显著,伴有不同程度的再生,故临床症状严重,病程短,预后较差.     

ATP酶组织化学染色孵育方法比较

目的比较经典的ATP酶组织化学染色法中几种孵育方法优缺点,以用于临床诊断中肌纤维分型研究和肌肉疾病病理诊断。方法新鲜的肌肉组织用异戊烷-液氮冷冻,冰冻切片厚度7μm,组织化学染色采用ATP酶滴染法和浸染法两种,采用的两种孵育条件分别为37℃恒温箱(120~180)min和4℃冰箱过夜。结果 4℃过夜滴染的染色效果比37℃滴染的效果好;37℃浸染比4℃过夜浸染效果好。浸染过夜虽然容易有沉淀,但是使用前过滤ATP酶孵育液,染色效果仍然好。结论各种方法和实验条件的改变导致染色结果的不同,临床工作者可根据实际情况,在减少人力和试剂成本前提下,选择使用不同的ATP酶组织化学染色技术,使其得到更广泛的应用。     

病理冷冻切片组织速冻与解冻方法的优化

目的优化病理冷冻切片组织速冻与解冻的方法,以期提高冷冻组织制片的效率和切片质量。方法随机抽取50例术中快速冷冻切片诊断为乳腺浸润性导管癌病例,每例取3块组织,分3组进行速冻处理:不加盖冰锤组,冰冻切片机配置冰锤组,专利冰锤组。分析比较3组的速冻时间和冷冻切片HE染色质量。将冷冻制片后剩余的组织用不同的方法分两组进行解冻处理:固定剂融冰组,流水融冰组;将解冻处理后的组织与新鲜标本直接固定的组织行人表皮因子受体(HER-2)免疫组织化学染色,比较3组在免疫组织化学染色效果方面的差异。结果运用专利冰锤组件速冻,冷冻速度快,运用专利冰锤组件制出的冷冻切片组织结构形态良好,冰晶、褶皱现象少。三组不同方式处理的组织HER-2免疫组织化学染色阳性率一致,但组织新鲜固定组和固定液融冰组在阳性细胞定位和阳性染色强度方面均强于流水融冰组。结论推荐运用专利冰锤组件速冻组织,速度快且冷冻切片质量佳;冷冻制片后剩余组织的解冻处理,推荐在固定液中解冻,边溶化边退冰,最大限度的保存组织抗原以利于后续的工作。     

改良高锰酸钾-草酸脱黑色素法在黑色素瘤苏木素-伊红染色和免疫组织化学检测中的应用

目的通过比较不同条件下高锰酸钾-草酸脱黑色素法在苏木素-伊红染色(hematoxylin-eosin,HE)和免疫组织化学检测中的应用,探讨最佳脱色条件。方法取富含黑色素的黑色素瘤组织切片,分别在40℃、45℃、50℃、55℃的0.5%高锰酸钾中脱色,每种温度下分别孵育2min、4min、6min、8min,然后1%草酸溶液处理30s×3次,水洗1min,比较HE染色效果,选取效果最好的高锰酸钾脱色条件(温度、时间)。基于HE最佳染色条件,将高锰酸钾处理时间减少2min,1%草酸溶液处理30s×3次,观察免疫组化染色效果。结果标本经0.5%高锰酸钾溶液,55℃水浴加热4min,1%草酸溶液处理30s×3次,HE染色效果最好;在此基础上,将处理时间减少到2min,免疫组织化学染色效果更好。结论改良后的高锰酸钾-草酸脱黑色素法既能彻底脱去组织内的色素颗粒,又能较完整的保留组织的抗原性,满足了临床病理对恶性黑色素瘤的诊断及鉴别诊断的需求。     

淋巴组织H.E染色"发灰"现象的纠正方法

在常规病理制片技术工作中 ,经常发现淋巴组织 (如淋巴结、鼻咽部组织及扁桃体等 )由于处理不当 ,造成切片染色后组织中间出现发灰现象 ,即镜下核浆染色模糊不清或组织成片不着色。这样将给临床病理诊断带来很大困难。为此 ,我们经大量实验 ,对原组织蜡块再切片后采用下述方法进行处理 ,收到了较好的染色效果。材料和方法1.标本来源 :选取 2 5例 H.E染色切片发灰的淋巴组织原蜡块再进行切片 ,切片厚 5μm。2 .切片的处理方法 :(1)将原蜡块所制切片浸入二甲苯 、 脱蜡各 5 min;(2 )无水酒精 、 浸洗各 2 min;(2 )用无水酒精乙醚等量 (1∶…     

不同的抗原修复方法和染色条件对P53蛋白免疫组织化学方法结果的影响

用免疫组织化学技术检测肿瘤组织中Ｐ53 基因蛋白产物的表达 ,是探讨Ｐ53 基因与多种肿瘤的相关性研究的主要手段之一。在免疫组织化学检测中 ,不同的抗原修复方法对Ｐ53 蛋白检测结果的阳性率和染色强度有不同的影响。本文在免疫组织化学检测Ｐ53 蛋白时对不同的抗原修复方法和染色条件进行了探讨 ,摸索出能较佳地显示Ｐ53 蛋白的免疫组织化学方法条件。介绍如下 :1.材料和方法1 1材料 :经临床病理诊断为恶性肿瘤如肺癌、乳腺癌、宫颈癌、卵巢癌和大肠癌等福尔马林固定、石蜡包埋的组织 ;单克隆抗体Ｐ53 ＤＯ - 7和ＬＳＡＢ试剂盒为ＤＡＫ…     

丽春红2R—亮绿染色法在显示神经髓鞘中的应用

任何因素所致的神经损伤 ,均可导致髓鞘的变性、髓鞘的脱失程度。常规髓鞘染色多采用传统的苏木素及锇酸染色法。苏木素法染色时间过长 (约 2 4h) ,染色步骤复杂 ,温度需控制在 5 0～ 5 5℃ ,分化时由于分化液作用速度较快 ,不便于掌握 ,易造成染色失败 ;而锇酸价格昂贵 ,浸透性差。这样将使神经组织的病理诊断及研究受到很大影响。为此 ,我们根据神经髓鞘的组织结构特点及染色原理 ,采用丽春红 2 R-亮绿组织化学染色方法 ,收到了满意的效果。材料和方法1.标本来源 :活检、尸检及动物正常或病变的脑组织、脊髓和周围神经组织 ,均经福尔马林…     

酶组织化学最佳染色方法的探讨

酶组织化学用来显示酶在组织或细胞内的活性及定位,酶组织化学能否成功很大程度取决于材料的制备,固定液能很好的保存组织的形态结构,使酶的活动保持在生活时的位置,定位准确。但实验室常用固定液可导致酶部分或完全失活。故酶组织化学染色几乎全使用冰冻切片。但冰冻切片存在三方面不足：①损伤结构的完整性,使酶不能很好定位,②可溶性酶可因弥散而失活,③不能做回归性研究。且作经多年研究发现：因各种酶有其特定的生物学特性,对化学试剂的敏感性不同,一种实验方案不能适用于所有的酶。     

应用VAN-Clear与低甲醛的病理组织处理改良方法的评价

目的探索一种可靠、稳定、高效、环保、可替代传统病理组织处理与制片方法的改良方法。方法选取10只实验大鼠,每只大鼠选取14种组织,每个组织均匀切成3块,第一块采用4%中性甲醛固定(改良中性甲醛组),第二块采用4%多聚甲醛固定(改良多聚甲醛组),第三块采用4%中性甲醛固定(传统中性甲醛组);两个改良组的组织经相应固定液固定后均用流水及75%酒精祛除组织的固定液,然后进入梯度酒精及VAN-Clear进行脱水透明;传统中性甲醛组在固定后不进行祛除固定液处理而直接入梯度酒精及二甲苯进行脱水透明。对比3组实验的HE、Masson、PAS及免疫组织化学染色效果和HE染色评分;比较取材室及技术室的甲醛、二甲苯及噪声污染的数据。结果两个改良组与传统组的HE、Masson、PAS及免疫组织化学染色效果及HE染色评分基本一致,3组HE切片的优良率均为100%,优级率均大于85%;甲醛及二甲苯检测结果远远低于我国的最高容许浓度,噪声监测优于中国环境噪声容许的夜间噪声标准。结论采用VAN-Clear以及低甲醛的病理组织处理改良方法可靠、稳定、高效、环保,可替代传统病理组织处理方法。     

玉米Ubi-1启动子在可育转基因玉米植株中的表达活性

本工作将玉米泛素基因-1启动子(Ubi-1)与大肠杆菌β-葡糖苷酸酶基因(gus,uidA)的编码区融合,通过基因枪粒子轰击方法转化来自玉米未成熟胚盾片组织的I-型愈伤组织,经PPT选择获得可育的玉米转基因植株,并采用组织化学方法分析了Ubi-1启动子驱动的gus基因在不同组织、细胞中的表达活性,发现gus基因在除花药壁以外的其它所试组织中均可以有效表达.UbiGUS在花粉、卵细胞和T1代转基因植株未成熟胚中的表达显示该启动子在植株发育的早期阶段即具有活性.对T0代转基因植株的花粉进行GUS组织化学染色,gus基因呈11分离,显示外源基因在转基因植株中以孟德尔方式遗传.同时发现,使用玉米本身的启动子Ubi-1可以降低外源基因在转基因玉米中的拷贝数,进而避免基因沉默现象的发生.目前已得到第二代转基因种子.     

他莫昔芬诱导的Cre重组酶在hGfapCreERT2转基因鼠小脑中的表达研究

目的探讨他莫昔芬诱导的hGfapCreERT2转基因鼠小脑中表达Cre重组酶的细胞类型。方法 hGfapCre-ERT2/Rosa26R转基因小鼠在胚胎晚期和出生早期用他莫昔芬诱导Cre重组酶表达,对小脑组织切片行X-gal染色,然后用细胞种类特异性抗体进行免疫组织化学染色,并和X-gal染色双重标记。结果在出生后第7天(P7)、第14天(P14)和第60天(P60),X-gal阳性染色和胶质细胞抗体Blbp阳性染色共标记,和神经元抗体Neun、浦肯野细胞抗体Calbindin及少突胶质细胞前体细胞抗体NG2不共标。结论自胚胎晚期第17.5天(E17.5)后用他莫昔芬诱导hGfapCreERT2转基因鼠,发现Cre重组酶特异性在小脑星形胶质细胞中表达,不在神经元、浦肯野细胞、少突胶质细胞前体细胞中表达。     

超声快速石蜡切片在脱落细胞学诊断中的应用

目的 探讨新型环保超声处理试剂配合超声快速组织处理仪应用于脱落细胞学诊断中的可行性.方法 收集湖北省中西医结合医院病理科2020年3月到2021年3月之间临床送检的胸水、腹水的脱落细胞学标本各30例.每例标本取材2块,同时进行超声快速石蜡处理(快蜡组)和常规石蜡处理(常规组).分别将其石蜡切片进行HE染色、免疫组织化学...     

植物酶的组织和细胞化学定位研究方法

酶是参与植物体内生化反应的特殊蛋白质。在保持活组织和细胞结构完整性的条件下,利用组织化学、细胞化学、免疫学和显微检测等技术研究酶的即位定位,是了解酶在组织、细胞和亚细胞中的分布、活性动态与定量及酶功能等的重要途径。对植物体中酶定位的组织化学和细胞化学方法的概念、原理与研究进展进行了综述,并根据国际酶化学分类编号顺序,分别介绍了25种酶的组织化学染色定位所用的反应介质和染色方法及46种酶的细胞化学定位方法的参考文献。     

双氧水快速氧化法在Mallory磷钨酸-苏木素染色中的应用

在日常病理诊断、鉴别诊断及科研工作中,观察横纹肌的基本病理变化,以及对横纹肌肉瘤与许多未分化的间叶性肿瘤的鉴别诊断,多采用Mal-lory磷钨酸—苏木素染色法。但在应用过程中,我们发现该法染色时间长(12—48h),所配染液成熟周期长(数周-数月),从而使临床病理诊断和鉴别诊断受到很大影响。我们根据染色的基本原理,经反复实验,对染色步骤进行了改进;同时采用双氧水快速氧化法,加速染液成熟,收到了理想的染色效果。材料和方法1.材料本科活检及尸检的正常肌肉及横纹肌肿瘤组织,经Zenker氏液固定,常规石蜡切片,切片厚4μm。2.仪器YWY781B医…     

皮肤损伤后SDF-1分泌量的变化及其受体CXCR4在表皮组织中分布表达的实验研究

目的:研究皮肤受损后不同时间点伤口液和皮肤组织中基质细胞衍生因子-1(SDF-1)的含量变化,同时验证SDF-1受体CXCR4在表皮组织内的分布.方法:分别在伤后即刻、12小时、24小时、36小时、48小时、60小时、72小时、96小时留取Ⅱ°烧伤患者的大疱液,用ELISA法检测伤口液中SDF-1的含量;用免疫组织化学染色的方法检测伤后1天、3天、7天创缘表皮内SDF-1的表达水平和其受体CXCR4在表皮组织上的分布.结果:用ELLSA法检测发现在受伤后几小时内大疱液中SDF-1的含量开始升高,1天后达到最高水平,伤后的3天SDF-1分泌量逐渐下降,而免疫组织化学染色结果显示创缘表皮层和真皮层上有散在的SDF-1分泌,且分泌量随创面愈合时间的推移逐渐增多;表皮细胞表达有CXCR4,且越靠近表皮基底层细胞膜的阳性越强.结论:SDF-1在皮肤损伤后表达量的增多可能对皮肤组织创伤修复起一定的调节作用.     

快速褪黑色素方法在免疫组织化学染色中的应用

目的 探讨在恶性黑色素瘤组织中如何快速褪除黑色素,便于进行免疫组织化学检测和观察.方法 选取20例恶性黑色素瘤组织石蜡切片,分别应用0.5％高锰酸钾水浴法、0.25％高锰酸钾溶液滴入法、15％过氧化氢浸泡法和传统过氧化氢脱色法进行褪黑色素处理,处理过的切片分别进行免疫组织化学和HE染色,比较染色结果.结果 以0.25％...     

甘草酸二铵脂质配位体抑制内毒素引起的急性肺损伤中炎性细胞浸润及细胞间连接蛋白的降解

目的探讨甘草有效成分甘草酸二铵脂质配位体(diammonium glycyrrhizinate lipid ligand,DGLL)对内毒素(lipopolysaccharide,LPS)诱发的肺损伤和肺水肿的改善作用及其机制。方法本研究利用腹腔给入LPS(10mg/kg)建立大鼠急性肺损伤(acute lung injury,ALI)模型,在LPS诱导前1小时灌胃给入DGLL(30、60、120mg/k g)。在LPS诱导6小时后,用HE组织学染色方法评价肺损伤,用肺湿干重比、肺泡灌洗液蛋白含量检测和肺组织伊文思蓝渗出法综合评价肺水肿,用ELISA方法检测肺组织中炎性因子和粘附分子含量,用免疫组织化学染色方法检测肺组织白细胞浸润标志物髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)的表达,用Western blot方法检测炎症相关蛋白以及肺微血管通透性相关蛋白水平。结果 DGLL前给药可以显著抑制LPS诱导的肺组织损伤,降低LPS诱导的MPO免疫反应性增强,降低肺组织中炎性因子TNF-α、IL-6和粘附分子ICAM-1的表达;同时,DGLL可以抑制LPS诱导的肺水肿、降低肺泡灌洗液中的蛋白含量以及肺组织伊文思蓝的渗出;抑制血管内皮钙黏蛋白(vascular endothelial cadherin,VE-cadherin)和ZO-1、Occludin、JAM-1等紧密连接蛋白的降解。结论 DGLL对LPS诱导的大鼠ALI具有明显的抑制作用,其作用机制与抑制炎性细胞的浸润以及细胞间连接蛋白的降解相关。该结果为D GLL在临床治疗ALI提供了新的理论依据。     

大鼠附睾上皮细胞的原代培养及纯化鉴定

目的建立大鼠附睾上皮细胞原代培养及纯化方法。方法利用酶消化法和组织块法对大鼠附睾上皮细胞进行原代培养,然后用胰酶两步消化法进一步纯化附睾上皮细胞,最后分别利用免疫荧光和免疫组织化学染色对原代培养的细胞及相关蛋白表达情况进行鉴定。结果酶消化法较组织块法得到的附睾上皮细胞纯度高,免疫荧光染色结果证明所得附睾上皮细胞主要是主细胞,免疫组织化学结果证明培养的附睾上皮细胞中有雄激素受体和雌激素受体α的表达。结论利用酶消化法对大鼠附睾上皮细胞进行体外培养,方法简单易行,成功率高。     

改良固定方式以提高淋巴瘤组织的制片质量

目的通过改良两种时段接收淋巴结的固定方式,提高淋巴瘤诊断的制片质量。方法随机收集上午10时左右及下午4时左右接收的132例淋巴结标本,每例各切取2块组织,上午切取的组织随机分为2组,分别行短时间固定处理程序(上午短时间组)和延长固定时间处理程序(上午长时间组)进行固定,下午切取的组织也随机分为2组,也分别行短时间固定处理程序(下午短时间组)和延长固定时间处理程序(下午长时间组)进行固定。回顾性分析并筛选出病理诊断为弥漫大B细胞淋巴瘤的58例,其中包括上午10时左右接收的26例及下午4时左右接收的32例。脱水处理后的4组组织进行包埋后,按常规进行切片、HE染色、CD79a免疫组织化学检测、C-MYC双色分离荧光原位杂交实验(fluorescence in situ hybridization, FISH)。通过比较4组切片出现肉眼可见裂隙、皱折及破碎不全发生率、HE染色质量、免疫组织化学检测阳性率、荧光原位杂交成功率,探讨最佳的淋巴结固定方法。结果上午长时间组制片CD79a免疫组织化学检测阳性率、荧光原位杂交成功率均不如上午短时间组,切片不完整发生率及HE染色质量与上午短时间组无明显差异;下午短时间组制片切片不完整发生率高且HE染色质量、CD79a免疫组织化学检测阳性率、荧光原位杂交成功率明显不如上午短时间组;下午长时间组切片以上指标均与上午短时间组无明显差异。结论上午接收的淋巴结标本应剖开于当天进行隔夜常规脱水,下午接收的淋巴结标本必须剖开后行延长固定程序进行脱水,随后得到的淋巴结组织在切片完整性、HE染色、免疫组织化学检测及FISH检测中能更好地提高淋巴瘤诊断的制片质量。