核酸疫苗研究进展

本文就核酸疫苗的定义、有效性、优越性及安全性方面的研究作了较为详细的综述并对其发展方向作了探讨。     

预防SARS病毒核酸疫苗的构建

本研究通过反转录-PCR获得了SARS冠状病毒辐条样蛋白、核衣壳蛋白和膜蛋白基因,将所获得的可能与免疫保护相关的基因克隆至核酸疫苗表达载体pcDNA-ThyA中,酶切及序列分析结果均表明载体构建正确,该候选DNA疫苗已用于动物免疫实验。     

肽疫苗的研究进展

肽疫苗可分为3大类,即抗病毒相关肽疫苗、抗肿瘤相关肽疫苗、抗细菌及寄生虫感染的肽疫苗。肽疫苗具有安全、廉价、特异性强、易于保存和应用等特点。本主要介绍有关肽疫苗的设计、提高免疫原性及体内的稳定性、复合肽疫苗、临床评价等方面的研究和应用进展。     

一类新型疫苗—核酸疫苗

核酸疫苗是将编码某种抗原蛋白的外源基因（DNA或RNA）直接导入动物细胞内,并通过宿主细胞的转录系统合成抗原蛋白,诱导宿主产生对该抗原蛋白的免疫应答,以达到预防和治疗疾病的目的。因此,核酸疫苗又称基因疫苗或基因免疫。但目前研究最多的是DNA疫苗,由于其不需要任何化学载体,因此也称为裸DNA疫苗。1核酸疫苗的发现裸DNA疫苗最早是由沃尔夫（WOllf）等人于1990年在一次基因治疗的实验研究中意外发现的。他们用化学试剂处理小鼠骨骼肌细胞,以提高其摄入质粒DNA的能力。结果发现,未作任何处理的对照动物,其骨骼肌细胞也吸…     

西方马脑炎核酸疫苗表达载体构建及免疫原性研究

为构建西方马脑炎病毒(western equine encephalomyelitis virus,WEEV)结构基因C-E3-E2-6k-E1重组真核表达载体,并研究其作为核酸疫苗的免疫原性.采用PCR方法扩增目的基因,酶切之后连接到pcDNA3.1上构建真核表达载体pcDNA3.1-C-E,用酶切和测序分析方法鉴定正确后,重组质粒被转染到293T细胞,经电镜检测和间接免疫荧光方法证明基因可以表达后,用该重组质粒免疫小鼠,免疫后检测实验组小鼠外周血中CD4+T细胞/CD8+T细胞比例和血清中细胞因子IL-2、IL-4及IFN-γ浓度,以上实验组各项免疫指标与对照组相比差异均显著(P＜ 0.05);ELISA方法检测实验组小鼠血清中WEEV的IgG抗体效价是1∶16.研究结果表明重组质粒pcDNA3.1-C-E可在细胞中获得瞬时表达,并且重组质粒作为核酸疫苗能够刺激小鼠产生免疫反应,具有较强免疫原性,为今后WEEV核酸疫苗研制奠定了良好基础.     

核酸疫苗制备工艺研究进展

核酸疫苗是指被用作疫苗的带有编码外源蛋白抗原基因的真核表达质粒,它能较安全地表达目的蛋白,是具有较大发展潜力的一类生物制品。研究核酸疫苗的制备工艺,对于规模化生产成本低、免疫效果好的疫苗具有重要的现实意义。核酸疫苗规模化生产工艺的流程主要包括核酸疫苗的构建、工程菌的发酵、菌体裂解、分离纯化及产品检验等关键环节,而每个环节对核酸疫苗的质量都有较大的影响。     

核酸疫苗与基因免疫

随着生命科学和高新技术的发展,新的疫苗不断研制和开发,核酸疫苗是其中之一。现概述核酸疫苗的发展简史,制备及应用、优点和现存的主要问题。     

核酸疫苗初免-蛋白疫苗加强的免疫策略提高日本血吸虫核酸疫苗免疫效果

为研制抗血吸虫疫苗提供实验依据,探讨了抗血吸虫SjGST-32核酸疫苗与蛋白疫苗联合免疫的免疫增强效应及免疫应答特征。将日本血吸虫DNA疫苗VR1012-SjGST-32与重组蛋白疫苗rSjGST-32分别在第0、2和4周免疫小鼠,在第6周攻击感染日本血吸虫尾蚴,攻击感染45 d后剖杀小鼠,计算减虫率、检卵率以及检测肝脏病理变化,观察免疫保护效果;检测小鼠血清中特异性IgG抗体滴度,T细胞增殖反应和抗原特异性CD4+IFN-γ+、CD4+IL-4+和CD4+IL-10+的数量,探讨免疫应答特征。结果显示,DNA初免-蛋白加强的联合免疫组的保护作用优于单独免疫组,显著提高了减虫率(42.3%)和减卵率(59.6%),并且能够显著减轻血吸虫虫卵对肝脏的病理损害;进一步发现,DNA疫苗和蛋白疫苗联合应用增强了机体T淋巴细胞增殖反应、抗体IgG滴度以及抗原特异性CD4+IFN-γ+的产生。这些研究为新型血吸虫疫苗的优化设计和合理应用提供了依据。     

核酸疫苗--一种新型疫苗

核酸疫苗是指将含有编码某种抗原蛋白基因序列的质粒载体作为疫苗,直接导入动物细胞内,从而通过宿主细胞的转录系统合成抗原蛋白,诱导宿主产生对该抗原蛋白的免疫应答,达到免疫的目的.核酸疫苗又称为基因疫苗或裸DNA疫苗,这种免疫称为核酸免疫、基因免疫、DNA介导的免疫以及遗传免疫等.     

艾滋病核酸疫苗研究进展与前景

艾滋病肆虐全球,已成为世界上危害人类健康和生命最严重的病毒性疾病之一。疫苗在预防和控制艾滋病中具有重要意义,理想的HIV疫苗必须能够产生广泛的交叉反应性中和抗体、有效的抗病毒细胞毒性T细胞(CTL)反应。近年来,核酸疫苗的研究已经取得了可喜的进展,科学家正不断努力研制更有效、更强大、更广谱的新型疫苗。综述了艾滋病核酸疫苗的载体改造、抗原选择、免疫策略等方面的研究进展,并对其今后的研究发展方向进行了阐述。     

核酸试纸条检测方法研究进展*

凝胶电泳、实时荧光PCR等常规核酸检测方法存在操作繁琐、设备昂贵、反应时间长等局限性。随着核酸检测市场规模的大幅提升,常规检测方法已无法满足临床诊断、检验检疫的需求。核酸试纸条(nucleic acid detection strip,NADS)是一种新兴的核酸检测方法,具有灵敏度高、操作便捷、结果可视化、成本低且耗时短等优势,在基础研究与临床诊断等领域受到广泛关注。综述近年来NADS的检测方法及研究进展,系统总结该技术的原理、应用及临床潜在转化价值,以期为NADS的进一步开发、利用提供借鉴。     

猪细小病毒核酸疫苗的构建及其对小鼠免疫原性的研究

将猪细小病毒VP2基因克隆至pCI-neo真核表达载体中,构建了pCIneo-VP2重组质粒,转染至PK-15细胞中,利用免疫荧光方法检测在体外表达情况;并以小鼠为动物模型,将pCIneo-VP2、pCI-neo重组质粒、猪细小病毒活疫苗和对照组通过肌肉注射进行免疫,检测免疫小鼠的淋巴细胞转化功能,特异性CTL杀伤活性和血清抗体滴度。结果显示,pCIneo-VP2在体外能够诱导PK-15细胞表达VP2蛋白,小鼠注射pCIneo-VP2质粒 1周后能够诱导机体产生抗体,4周时达到峰值,与活疫苗对照组产生的抗体滴度、诱导T淋巴细胞增殖和诱导强的细胞毒性基本一致。试验表明,构建的pCIneo-VP2能够有效诱导机体产生体液免疫和细胞免疫,为研制出高效、新型猪细小病毒疫苗提供了科学依据和试验依据。     

核酸体外扩增技术

核酸体外扩增是分子生物学研究的基础。随着生物技术的发展 ,出现了越来越多的核酸体外扩增技术。根据其特点可分为两类 :一类是靶核酸的直接扩增 ,如聚合酶链式反应、链替代扩增、连接酶链式反应、核酸依赖的扩增、Qβ复制、转录介导的扩增和滚环扩增等 ;另一类是信号放大扩增 ,如支链DNA、侵染探针等。就现有的核酸扩增技术的原理、特点及应用进行介绍。     

杆菌JSM1601发酵产核酸的研究

确定了杆菌（Brevibacterium ammoniagenes）JMS1601发酵产核酸的最佳发酵培养基：葡萄糖12％,酵母浸膏1．5％,磷酸二氢钾0．3％。最佳摇瓶培养条件：温度32℃,摇床转速160r／min,接种量（v／v）5％,装液量100ml／500ml。     

乳酸菌用作口服疫苗传递载体的研究

乳酸菌是食品级安全菌,利用乳酸菌为表达载体制成的口服疫苗安全无毒,能诱导机体产生有效的免疫应答和免疫耐受。乳酸菌口服疫苗通过胃肠粘膜进行抗原呈递,使用方便,而且较传统注射途径的免疫效果和依从性好,是理想的疫苗,有广阔的发展前景。     

简化核酸提取过程在病原体核酸检测中的应用现状和发展趋势

简化核酸提取过程相较于经典的试剂盒法和全自动核酸提取技术,凭借其简便的操作步骤、便携易用的仪器设备和简单的人员培训等优势在病原体核酸检测中得到广泛应用,为实现病原体核酸的快速检测和现场检测(Point-of-care testing,POCT)奠定了良好的基础。本文比较了不同的核酸提取方法,对简化核酸提取过程的方法学进行综述,讨论其在病原体核酸检测领域中的应用现状,并展望其发展趋势。     

Efficient Search on Energy Minima for Structure Prediction of Nucleic Acid Motifs

Abstract

Structure prediction of non-canonical motifs such as mismatches, extra unmatched nucleotides or internal and hairpin loop structures in nucleic acids is of great importance for understanding the function and design of nucleic acid structures. Systematic conformational analysis of such motifs typically involves the generation of many possible combinations of backbone dihedral torsion angles for a given motif and subsequent energy minimization (EM) and evaluation. Such approach is limited due to the number of dihedral angle combinations that grows very rapidly with the size of the motif. Two conformational search approaches have been developed that allow both an effective crossing of barriers during con-formational searches and the computational demand grows much less with system size then search methods that explore all combinations of backbone dihedral torsion angles. In the first search protocol single torsion angles are flipped into favorable states using constraint EM and subsequent relaxation without constraints. The approach is repeated in an iterative manner along the backbone of the structural motif until no further energy improvement is obtained. In case of two test systems, a DNA-trinucleotide loop (sequence: GCA) and a RNA tetraloop (sequence: UUCG), the approach successfully identified low energy states close to experiment for two out of five start structures. In the second method randomly selected combinations of up to six backbone torsion angles are simultaneously flipped into preset ranges by a short constraint EM followed by unconstraint EM and acceptance according to a Metropolis acceptance criterion. This combined stochastic/EM search was even more effective than the single torsion flip approach and selected low energy states for the two test cases in between two and four cases out of five start structures.     

末端脱氧核苷酸转移酶在生物传感及核酸合成领域的应用*

末端脱氧核苷酸转移酶(terminal deoxynucleotidyl transferase, TdT)是聚合酶X家族中的一员,与典型的DNA聚合酶不同,TdT以恒温的无模板依赖的方式催化脱氧核糖核苷三磷酸(dNTP)聚合到寡核苷酸的3'羟基端来合成DNA。并且TdT对底物的耐受性高具有聚合修饰型dNTP的能力,如荧光修饰的dNTP、生物素修饰的dNTP,甚至人工碱基均可作为其良好底物。TdT的这些生化特性使其被广泛的应用在生物传感和核酸合成领域中,促进了许多基于核酸的工具和方法的发展,并为酶促从头合成DNA技术的发展奠定基础。介绍了TdT的性质,重点总结了它在其介导的生物检测技术、核酸的修饰技术以及酶促合成DNA技术三个方面的核心作用、目前面临的挑战以及未来研究的方向,以期促进TdT在生物传感器和核酸合成中的进一步应用。