环六亚甲基双乙酰胺对小鼠畸胎癌B7-2克隆细胞的诱导分化

近年来,有不少研究工作者报道了用化学物质诱导恶性癌细胞进行有限的分化。这类物质主要有维生素A酸(RA),丁酸钠(Na-butyrare),二甲基亚砜(DM-SO),环腺嘌呤核苷酸(c-AMP)以及环六亚甲基双乙酰胺(hexamethylene bisaceta-mide,HMBA)等,它们能使癌细胞恶性表型受到抑制,并向一定类型的体细胞分化。HMBA最早用于研究小鼠红白血病细胞的诱导分化,并为研究珠蛋白基因表达提供了很好的实验模型。随后,Jakob等     

B7-2胚胎性癌细胞与其分化细胞的周期特性

本文用~3H-thymidine标记B7-2EC细胞及其经HMBA诱导的分化细胞。根据连续标记和脉冲标记核百分率,计算和分析这两种细胞的细胞周期各时相特点。结果表明,未分化EC细胞的周期是18小时,其中G_1期1.7小时,S期13.6小时;分化细胞的周期是30小时,G_1期8.6小时,S期17.1小时。因此,B7-2分化细胞与未分化的相比,主要是G_1期和S期时相相应拉长。     

吸烟对大鼠肺组织B7-1/B7-2及其相关配体表达的影响

目的通过研究吸烟对大鼠肺组织B7-1/B7-2及其相关配体表达的影响,探讨专职抗原提呈细胞（APC）在吸烟所致肺部慢性炎症发生发展中的作用。方法将30只健康雄性Wistar大鼠随机分为不吸烟组、吸烟6周组和吸烟12周组,每组10只。采用免疫组化半定量法测定大鼠气道周围肺间质中慢性炎症细胞胞膜B7-1、B7-2、CD28和CTLA-4的表达水平。结果吸烟6周组与吸烟12周组大鼠肺组织B7-1、B7-2、CD28和CTLA-4表达量较不吸烟组均显著增高（P〈0.01）,吸烟12周组较吸烟6周组表达量也均增高（P〈0.01）,随吸烟时间的延长各指标表达量均呈上升趋势。结论吸烟可引起大鼠肺组织B7/CD28/CTLA-4表达水平的增高,提示APC可能在吸烟所致肺部慢性炎症发生发展中起重要作用。     

B7-2胚胎性癌细胞诱导分化过程中的表型转变

胚胎性癌细胞(简称EC细胞)作为一类肿瘤(畸胎瘤)的干细胞近年受到广泛的重视,从胚胎学、肿瘤学和分子生物学等许多学科领域都应用它作为实验材料,离体诱导分化研究是其中的一个方面。B 7-2 EC细胞是我们从129品系小鼠的自发睾丸畸胎瘤中分离克隆得到的一株多能EC细胞,它在同种同基因小鼠     

人B7—1和B7—2cDNA的克隆及鉴定

目的：为探索性构建全新型重组人B7－PE40绿脓杆菌外毒素融合蛋白以长期诱导免疫耐受,本研究从急性B淋巴细胞白血病细胞株Raji中隆N－末端分别缺失34和16个氨基酸的人B7－1和B7－2基因胞外区,并构建含此基因的重组质粒。方法：根据B7－1和B7－2基因序列设计合成可增B7－1和B7－2cDNA的特异性引物,用RT－PCR的方法从Raji细胞总RNA中扩增B7－1和B7－2cDNA,并克隆至pGEM－T载体中,经酶切鉴定后再进行序列分析。结果和结论：从Raji细胞中扩增出预期 的624和675bp的B7－1和B7－2cDNA,将其克隆至pGEM-T载体中,分别经EcoRI/HindⅢ和BamHI/SphI双酶切电泳和序列分析确证,为进一步构建人B7－PE40外毒素融合蛋白奠定了基础。     

克隆的小鼠白细胞介素-7对B细胞前体有刺激作用

目前对淋巴细胞发育了解较少,本文作者借助长效培养系统检定到一种能刺激淋巴细胞前体增殖的新生长因子,并获得编码该因子的cDNA克隆。这种新的造血细胞生长因子被命名为白细胞介素-7(IL-7)。以从小鼠骨髓衍生的细胞系IXN/A6制备cDNA文库,经过筛选表达于COS-7细胞中的cDNA文库的约720000重组体,最后得到一编码IL-7的cDNA克隆(即克隆104(?)),并测定了克隆1046的核苷酸顺序。该克隆(插入基因)有1607碱基对(bp)长,仅含一个462bp的开放阅读框架(ORF)。在ORF之前存     

miR-505-3p对GT1-7细胞株基因表达谱的影响

目的了解微小RNA 505-3p(miR-505-3p)对下丘脑GnRH神经元GT1-7稳转细胞株表达谱的影响。方法用慢病毒转染GT1-7细胞获得稳定表达miR-505-3p的细胞株,感染实验分为3组:空白对照组(未经处理的GT1-7细胞),阴性对照组(感染pLenti6.3-nc空病毒),实验组(感染pLenti6.3-miR-505-3p病毒)。采用实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)技术检测稳定细胞株中miR-505-3p的表达丰度,并进一步利用芯片检测对照组和实验组细胞的表达谱结合生物信息学方法探寻差异表达基因。采用GO分析和Pathway分析差异表达基因,解析miR-505-3p的功能。结果在稳定表达miR-505-3p的GT1-7细胞中,165个基因的表达量变化在2倍以上,这些基因主要参与细胞粘附、GTP分解代谢、神经系统发育等生物过程。结论 miR-505-3p可能通过影响下丘脑GnRH神经元中相应靶基因的表达调控细胞粘附、GTP分解代谢、神经系统发育等生物过程,和间隙连接、轴突导向和胃酸分泌等信号通路。     

hS100A6对人骨肉瘤细胞株143B的体内体外作用

为研究hS100A6对人骨肉瘤细胞系143B的体内体外作用,利用整合有S100A6基因和SiS100A6基因的腺病毒(AdS100A6和AdSiS100A6)作用于143B细胞,MTT法和台盼蓝染色法检测其对细胞的增殖作用,Hoechst染色法检测其对凋亡的作用,Transwell实验检测其对迁移的作用,同时以143B裸鼠皮下移植瘤为动物模型,检测S100A6对143B的体内作用,结果显示AdS100A6干预后出现细胞增殖活性的减弱、凋亡率增高、迁移率降低,在体内试验中瘤体体积明显较对照组减小,而AdsiS100A6干预后出现时间依赖性地细胞增殖活性的增强、凋亡率降低、迁移率增高,体内试验中瘤体体积较对照组明显增大.提示hS100A6能抑制人骨肉瘤细胞株143B细胞的增殖和迁移,并促进细胞凋亡,同时能抑制人骨肉瘤细胞株143B的裸鼠皮下移植瘤的生长.     

胆汁淤积性肝硬化来源的微环境因子对肝脏干细胞分化的影响

该研究探讨了胆汁淤积性肝硬化病理微环境来源的细胞因子在胆总管结扎小鼠不同时间点的表达变化,且在体外致力寻找最优的细胞因子组合高效诱导肝脏干细胞HP14-19分化为成熟肝细胞。以Balb/c小鼠胆总管结扎(bile duct ligation,BDL)模拟胆汁淤积性肝硬化病理微环境;免疫组织化学检测胆总管结扎小鼠肝组织中细胞因子EGF、HGF及TGF-α的表达;以小鼠胚胎肝干细胞HP14-19细胞为研究对象,以不同浓度在不同时间点进行荧光素酶报告基因检测ALB-Gluc活性;qRT-PCR、Western blot检测肝细胞相关标志物表达;吲哚菁绿(indocyanine green,ICG)及过碘酸–希夫(periodicacid-schiff,PAS)染色检测肝细胞的成熟功能。结果显示,小鼠胆总管结扎能成功模拟胆汁淤积性肝硬化,并随结扎时间延长肝硬化程度加重;与对照相比,在EGF(10 ng/mL)、HGF(20 ng/mL)、TGF-α(20 ng/mL)单独诱导HP14-19细胞能有效增强ALB-Gluc活性(P0.05);且在EGF(10 ng/mL)、HGF(20 ng/mL)、TGF-α(20 ng/mL)联合诱导HP14-19细胞时显著增强ALBGluc活性(P0.05);qRT-PCR、Western-blot显示,ALB、CK18表达随时间增加而增加,而AFP表达则相反。ICG摄取及PAS染色阳性细胞数显著增加(P0.05)。因此,胆汁淤积性肝硬化病理微环境来源的细胞因子能有效促进肝脏干细胞肝向分化,将对细胞因子联合肝脏干细胞移植治疗胆汁淤积性肝硬化有一定的指导意义。     

力学微环境影响间充质干细胞分化的研究现状

间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)具有很强的自我复制能力和多向分化潜能,是近年来热门研究的种子细胞。MSCs的生长微环境可以影响调控干细胞的生长、分化,力学刺激是MSCs分化的影响因素之一。细胞外基质硬度、机械应力(剪切力、静压力、牵张力)、微重力等因素对MSCs的分化作用是当前研究的热点。就细胞外基质硬度、机械应力以及机械应力作用于三维支架培养对MSCs分化的影响等方面进行综述。     

细胞原癌基因在小鼠胚胎癌细胞中的表达

近些年来,细胞原癌基因(cellular onco-gene)的发现和大量研究,使人们相信这类基因的产物在早期胚胎发育过程中有着十分重要的功能,因而它们在转录水平上的变化也特别受到注意。胚胎癌细胞(embryonal carci-noma cell,简称EC细胞)是一类与早期胚胎细胞相类似的恶性细胞,具有多种分化潜能,     

环六亚甲基双乙酰胺体外诱导胚胎性癌B7—2细胞分化对MS_3基因表达的影响

MS_3 cDNA是多潜能胚胎性癌细胞专一的顺序,HMBA可诱导B 7—2细胞分化为原始内胚层样细胞。用定量细胞质RNA点印迹杂交法分析了MS_3基因在小鼠胚胎性癌B 7—2细胞经HMBA诱导前和诱导后的表达水平。小鼠成纤维细胞NIH3T3被用作阴性对照,MS_3基因的表达水平在B 7—2细胞经HMBA诱导5天后下降了86％。鉴于HMBA对B 7—2细胞的诱导效率约为90％,这一实验结果表明在HMBA诱导分化中,MS_3基因的表达被抑制。     

分子佐剂C3d上调Raji细胞协同刺激分子B7-1和B7-2的表达(简报)

我们在以往研究中,引入选择性增强体液免疫效应的新型分子佐剂C3d,成功构建了重组避孕疫苗hCGB-C3d3,通过免疫Th2型优势的 BALB/c小鼠和,Th1型优势的C57BL/6小鼠,显示分子佐剂C3d在不同品系小鼠均使免疫效应从Th1型细胞免疫向Th2型体液免疫偏倚。     

小鼠对天花粉蛋白体内及体外免疫应答的基本特点

C 57 BL/6 J小鼠在应用弗氏全佐剂或铝矾为佐剂结合天花粉蛋白免疫后都能引起抗原特异的IgE类抗体的反应以及其它Ig类抗体的反应;IgE的滴度和总的抗天花粉蛋白抗体的滴度的动态变化趋势基本一致,但并不完全同步。IgE类上升得较IgG等类抗体为慢,但上升的速度要快。脾和肠系膜淋巴结细胞分泌抗体的动态变化也和血清并不完全一致。天花粉蛋白在一定浓度下能抑制小鼠T淋巴细胞在体外的抗原特异的增殖反应和ConA反应。这抑制并不限于增殖过程的启动。补充外源性的IL-2也不能消除这抑制作用。天花粉蛋白加热变性后丧失了对小鼠淋巴细胞的毒性,并能引起经未变性天花粉蛋白体内致敏的小鼠的T淋巴细胞在体外的明显增殖。应用微量的天花粉蛋白为抗原,以及少量的无凝集素的conA条件培液等能在体外诱发致敏的B淋巴细胞产生二次抗体应答。     

两种第二信使系统在人胃癌MGc80-3细胞增殖分化调节中的相互关系

两种第二信使系统的正负调控作用的假说与细胞增殖失控的癌变机理之间关系,日益引起人们的注意。为此本工作利用HMBA 诱导分化剂和信使通路的阻断剂研究了两种第二信使系统(DG-PKC,cAMP-PKA)在人胃癌MGc80-3细胞生长分化调控过程中的相互关系。人胃癌MGc 80-3细胞在诱导分化剂处理24 h 后,其DG 水平与PKC 活性分别下降了64.7%和28.7%,而cAMP 及其结合蛋白的含量分别上升了62%和32.6%(48 h 后结果更为显著)。PKA-RⅡ表达增强,并从胞质移向核内分布。当用PKC 抑制剂H_7取代HMBA,阻断PKC 通路,24 h 后,DG 水平及PKC 活性均下降,而cAMP 含量上升了1.04倍。反之在HMBA 诱导分化的同时加入PKA 抑制剂使其cAMP 通路受到阻断后,cAMP 及其结合蛋白含量下降。而DG 含量与PKC 活性均上升到与对照组水平相似。PKA-RⅡ又仅仅在胞质中出现。以上实验充分显示了cAMP-PKA 与DG-PKC 两种信使系统在细胞增殖分化中的正负调控作用占有重要地位。     

枯否细胞在实验性肝癌细胞凋亡中的作用研究

探讨Kupffer细胞在大鼠实验性肝癌细胞凋亡中的作用。应用免疫组化方法和TUNEL法对单用二乙基亚硝胺（DENA）诱发的肝癌及用氯化钆（GC）或酶母多糖（ZM）分别阻塞或激活Kupffer细胞后,给以DENA所引起的大鼠肝癌中的增殖细胞核抗原（PCNA）、bax、bcl-2蛋白表达和肝癌细胞的凋亡进行了对比研究,结果显示：肝癌组织的增殖指数在ZM＋DENA组、DENA组、GC＋DENA组依次增高,而凋亡指数在上述各组依次降低。Bax阳性率在ZM＋DENA组明显高于DENA组（P＜0.05）,而ZM＋DENA组bcl-2阳性率明显低于DENA组（P＜0.05）。结果提示：Kupffer细胞可促进实验性肝部细胞凋亡。     

卤虫(Artemia salina)孵化腺细胞分化时相的免疫细胞化学研究(简报)

动物孵化酶(hatching enzyme,HE)是早期胚胎在特定发育阶段由孵化腺细胞产生和分泌的,在动物早期胚胎孵化中具有关键性作用。孵化腺细胞(hatching gland cell,HGC)一般为单细胞腺体,是从胚胎发育到特定阶段(孵化前)出现、至胚胎孵出后的特定时期消失的一时性细胞(transient type ofcells)。完全分化的HGC内充满了低电子密度的酶原颗粒(孵化酶原颗粒),在鱼胚中的分布因物种而异。在大多数鱼中,HGC分布在胚体的外表面和/或卵黄囊中,一般为外胚层来源。如在虹蹲鱼HGC分布在胚体的前表面、卵黄囊、咽部、鳃的内表面及外表面,属于外胚层来源。而日本鳉鱼HGC