大麦黄矮病毒分子生物学的研究进展

大麦黄矮病毒（ＢａｒｌｅｙＹｅｌｏｗＤｗａｒｆＶｉｒｕｓ,ＢＹＤＶ）是黄矮病毒组（Ｌｕｔｅｏｖｉｒｕｓ）中的一员。它只能通过蚜虫传播,广泛流行于北美、欧洲、东亚的大麦产区。大麦黄矮病主要引起大麦矮化,抑制分蘖,减少穗数,造成不孕以至不能结实。除大麦外...     

侵染莜麦的大麦黄矮病毒的分离及提纯

用液氮或低温冷冻染病组织及差速离心和葡聚糖凝胶过滤的方法,提纯了自然侵染莜麦的大麦黄矮病毒(BYDV)。电镜照片中病毒呈多面体结构,大小均一,平均直径为23.66±1.2nm,且聚集较多。将提纯的病毒以三种无毒蚜为介体,经薄膜饲毒法回接到华北二号莜麦上,表明提纯的病毒能引起类似田间病株的症状。     

大麦黄矮病毒GAV基因组全序列测定及其结构分析

测定了在中国分离得到由麦二叉蚜和麦长管蚜传播的大麦黄矮病毒GAV的基因组核苷酸全序列, 该病毒分离物的RNA由5685个核苷酸组成, 内含6个开放阅读框架(ORF)和4个非编码区(UTR), 基因组大小和结构与黄症病毒属(Luteovirus)的大麦黄矮病毒PAV(BYDV-PAV)和MAV(BYDV-MAV)相似. 序列分析表明, 它与BYDV-MAV的PS1分离物基因组序列的同源性最高. 在6个开放阅读框架中, 除ORF6核苷酸序列同源性为72.0%外, 其他ORF的核苷酸序列同源性均大于90%. 两者全基因组的同源性为90.4%. 推导的编码产物氨基酸序列同源性除P6和通读蛋白(RTP)分别为67.4%和87.4%外, 其他均大于90%, 其中外壳蛋白(CP)为95.5%. 根据与BYDV-MAV的相似性, BYDV-GAV应是一种与BYDV-MAV类似的病毒.     

光敏生物素和DIG标记Orf病毒DNA探针的研究

目的：是用于Orf病毒病的诊断和相应重组菌的检测,将HCE DNAHindⅢ/A,B片断及重组质粒pGRL-4A中消化的A片断用光敏生物素和地高辛进行标记,对不同病毒分离株DNA进行检测,并对不同重组质粒进行了Dot-blotting和Southem-blotting检测。结果：用光敏生物素标记的探针最低可检出12pg的DNA,地高辛标记的探针最低可检出0.1pg的DNA,且有极强的特异性。     

生物素标记庆大霉素耐药基因探针

采用低熔点琼脂糖挖块法回收源自澳大利亚的pDG0103的2．0kb的BamHI—HindIII片段(携带2”-0-腺苷转移酶[ANT(2”)]基因)和自建的pBY102的4．9kb的Pst1-EcoRI片段。以缺口平移法,用生物素-7-dATP进行标记,制备成探针。通过southern印迹杂交和菌落原位杂交,证明澳源的Gm—DNA探针与美国的探针同源,而与作者构建的Gm-DNA探针不同源。再以菌落原位杂交法,用生物素标记的上述两种探针分别检测1 06株庆大霉素(Gm)耐药的细菌,结果表明这些菌株携带的Gm钝化酶基因的类型不止一种。     

RT-PCR-RFLP在大麦黄矮病毒检测中的应用

The universal primer of Luteovirus was designed and synthesized.An experimental system of RT PCR RFLP was developed in barley yellow dwarf virus (BYDVs).BYDVs can be distinguished qualitatively by RT PCR method.It was seen that different serotypes of BYDVs have critical different RFLP patters when the PCR producs were digested by restriction enzyme HinfI.The RFLP patterns of 7 isolates of PAV serotype were greatly different.These results indicate there existed sequence variations among different serotypes of BYDVs and vector phenotypes of PAV serotype.There is no difference between MAV serotypes in RFLP analysis.The slight distinction in the segment of coat protein gene of BYDVs can be revealed by RT PCR RFLP system.     

生物素标记DNA探针杂交条件探讨

DNA探针技术正越来越广泛地应用于医学基础研究和临床检测.生物素标记探针已在某些领域部分取代同位素标记探针而发挥作用。杂交是DNA探针技术中重要一环.各种杂交条件的变化均会对杂交结果并最终对检测结果产生影响。文献中关于杂交条     

大麦黄矮病毒GAV株系外壳蛋白基因的克隆和序列分析

The Barley yellow dwarf virus (BYDV) GAV isolate was preserved at the Institute of Plant Protection of the Chinese Academy of Agricultural Sciences. The cDNA of BYDV GAV coat protein (CP) gene was amplified from the extracted RNA of BYDV GAV by using the polymerase chain reaction (PCR), and cloned into pGEM-7zf(+). Its complete nucleotide sequence has been determined by means of Sanger's dideoxy-mediated chain-termination method. The result showed that BYDV GAV CP gene has 600nt. It shares 97.5% and 96.5% identity with CP gene of BYDV MAV-PS1 in terms of nucleotide and amino acid sequences respectively.     

应用聚合酶链式反应扩增和光敏生物素标记的cDNA探针检测马铃薯纺锤块茎类病毒

以含马铃薯纺锤块茎类病毒(potato spindle tuber viroid,PSTV)RNA的总核酸为模板,加入人工合成的互补DNA引物,用反转录酶合成PSTV cDNA;在聚合酶链式反应系统中,用两个PSTV特异性引物进行cDNA扩增,用以制备光敏生物素标记的PSTV cDNA探针。用此探针进行斑点杂交检测含PSTV的马铃薯核酸提取液和汁液均出现阳性杂交信号,而健康马铃薯的核酸提取液和汁液的结果均为阴性。光敏生物素标记探针检测纯化PSTV的灵敏度可达5pg;检测感染PSTV的马铃薯块茎汁液的可测出最高稀释度为1:400。     

利用交换接头技术构建大麦条纹花叶病毒新疆株RNA_2的全长cDNA克隆

本文采用双股交换接头(Crossover linker)技术对已建立的大麦条纹花叶病毒新疆株(BSMV-XJ)RNA_2 cDNA重组质粒pUBS_(112)进行修饰。使cDNA两端不必要的poly(dG):poly(dC)尾准确地缺失,同时补上了cDNA中相对于RNA_2 5’端区缺少的三个核苷酸TAA,并在cDNA末端插入了预定的限制酶切顺序。通过原位杂交筛选、酶切图谱分析、cDNA两端序列测定等手段,证明已获得BSMV-XJ RNA_2组分的全长cDNA克隆。     

大麦条纹花叶病毒新疆株(BSMV-XJ)RNA_2的cDNA克隆及5′端序列分析

分离了大麦条纹花叶病毒(BSMV)新疆株基因组的3个RNA组份。以RNA2为模板,3′端互补寡核苷酸为引物,合成了第一条cDNA链和第二条cDNA链,将ds-cDNA重组在pUC9质粒中,转化大肠杆菌细胞,获得含RNA3′端的克隆,并证明所选克隆的cDNA含有新疆株几近全长的RNA2组份。对于插入片段为3.3kbp的112号克隆进行了酶谱分析,得到了与国外典型株类似的结果;用双脱氧终止法分析了相当于RNA 2 5′端250bp的cDNA酶切片段,表明与国外典型株有十分相似的一级结构。