NGX6基因单核苷酸多肽及与鼻咽癌的相关性

NGX6基因是本研究室在鼻咽癌9p最小共同缺失区内新克隆的鼻咽癌候选抑瘤基因,通过采用病例－对照研究方法,利用动态等位基因杂交（DASH）技术对105例鼻咽癌患者和183例正常人NGX6基因的2个单核苷酸多态（SNP）进行了分型,经相关分析发现,位于NGX6基因上游调控区的SNP rs879284与鼻咽癌发病存在显著相关性,基因型CT和TT的相对危险度分别为3．93和2．27,实验结果进一步支持了NGX6基因与鼻咽癌的发生发展可能存在密切关系,SNP rs879284由于处在NGX6基因上游调控区域,其多态类型可能在某种程度上影响NGX6基因的表达调控,从而与鼻咽癌发病相关。     

鼻咽癌相关基因NGX6对鼻咽癌细胞周期的影响

为了探讨鼻咽癌（NPC）候选抑瘤基因NGX6对NPC细胞的细胞周期进程及细胞周期素的影响,阐明它的作用机制,通过建立稳定表达NGX6的鼻咽癌HNE1细胞株,采用细胞免疫组织化学,流式细胞仪检测与分析细胞周期及细胞周期素的改变,用western blot验证它对细胞周期的影响。结果显示稳定表达NGX6的HNE1细胞较对照组细胞周期中G0/G1期比值明显增加,而S期比例减少。细胞凋亡率无明显变化。流式细胞仪检测发现cyclinD1、A和E的表达明显减少,以cyclinD1的改变最为明显。Western blot检测也发现cyclinD1的表达明显下调。以上结果说明NGX6主要通过下调cyclinD1的表达,延缓细胞周期的G1→S的进程,从而抑制NPC细胞的过度增殖。     

人鼻咽癌相关基因NGX6在大肠杆菌中的诱导表达及纯化

NGX6是一个新克隆的鼻咽癌抑瘤基因候选者,为了进一步制备抗NGX6编码蛋白质的抗体和研究它的功能,本研究拟在原核表达系统中表达并纯化出NGX6蛋白．采用多聚酶链式反应(PCR)方法扩增出NGX6基因蛋白编码序列,构建该基因的融合表达质粒pGEX3X/NGX6,导入大肠杆菌中,IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳．Western hlot鉴定．用GST融合蛋白纯化试剂盒纯化融合蛋白．结果显示构建的融合表达质粒酶切和测序鉴定阅读框架正确,导入大肠杆菌中诱导后出现一条42kDa的新蛋白带,主要存在于细菌沉淀中,占总蛋白的26％,Western blot鉴定其为GST/NGX6融合蛋白,并进一步纯化出融合蛋白．研究表明NGX6基因编码蛋白质能够在原核细胞中表达,并能纯化出该种蛋白,为进一步深入研究该蛋白质的结构与功能打下了基础．     

NGX6基因转染对鼻咽癌细胞基因表达谱的影响

鼻咽癌是我国南方的常见肿瘤 .NGX6是新近克隆的定位于 9p2 1 2 2 ,在鼻咽癌组织中表达下调的基因 .初步的研究结果显示 ,NGX6基因转染鼻咽癌细胞HNE1能够延缓其生长速度 ,使肿瘤细胞更多地停留在G0 G1期 .为探索NGX6基因在鼻咽癌发病机制中的作用 ,建立了高表达NGX6的鼻咽癌细胞系 .利用包含 14 0 0 0个基因的cDNA微阵列分析了NGX6基因转染对HNE1细胞基因表达谱的影响 ,发现NGX6基因的转染能够上调p2 9、APC7、NEU1、RNasek6、αE catenin和TFⅡEα等基因的表达 ;同时也下调properdinP因子、G0S2、BAZ2B、ZHX1,OS4和PBX3等基因的表达 .研究结果提示 ,NGX6基因对鼻咽癌细胞的生物学行为的影响可能与它对一些细胞周期调控因子和转录调控因子的影响相关 .作为一种高通量的分析技术 ,cDNA微阵列为新基因的功能研究提供了重要的线索     

泛肽相关蛋白基因UBAP1单核苷酸多态及与鼻咽癌的相关研究

UBAP1基因是在鼻咽癌9p最小共同缺失区内新克隆的鼻咽癌候选抑瘤基因,通过采用病例-对照研究方法,对105例鼻咽癌患者和183例正常人UBAP1基因的5个单核苷酸多态(SNPs)用测序法进行了分型,在实验过程中,偶然发现了一个新的SNP位点,并已登录至dbSNP（登录号：rs3135929）.经相关分析发现,位于UBAP1基因第6外显子中的SNP rs1049557与鼻咽癌发病存在显著相关性,基因型GG和GC的相对危险度分别为1.64和1.31.实验结果进一步支持了UBAP1基因与鼻咽癌的发生发展可能存在密切关系,SNP rs1049557由于处在UBAP1基因下游3′非翻译区,其多态类型可能在某种程度上影响UBAP1基因的表达调控,从而与鼻咽癌发病相关.     

NGX6 基因对高转移鼻咽癌细胞株 5-8F 细胞的影响

NGX6 是一个新克隆的鼻咽癌候选抑瘤基因 . 为进一步研究其功能,在构建 NGX6 的真核表达载体 NGX6/pcDNA3.1(+) 基础上,通过脂质体转染方法将 NGX6 基因导入鼻咽癌细胞株 SUNE-1 的亚株 5-8F 细胞 ( 具高成瘤高转移潜能 ) 中,并用 RT-PCR 和 RNA 印迹鉴定,建立了稳定表达 NGX6 基因的 5-8F 细胞系 . 借助细胞生长曲线、软琼脂集落形成实验对转染细胞的生物学行为进行了检测,同时采用包含 1 176 个与肿瘤学相关的基因 cDNA 微阵列,分析了 NGX6 基因转染对 5-8F 细胞基因表达谱的影响 . 结果显示：转染了 NGX6 基因的 5-8F 细胞的生长速度明显减慢,在软琼脂中集落形成率较对照组显著下降 (P < 0.05) ,发现 NGX6 基因的转染能够上调 5-8F 细胞中 p19 、 catenin α 2 、 desmoglein 1 等基因的表达,同时下调 EphB4 、 TIE2 、 vitronectin 等基因的表达 . 综上所述, NGX6 基因可以抑制 5-8F 细胞的恶性生物学行为,并影响一些与细胞周期、细胞黏附和血管生成有关的基因的表达 . 上述结果为鼻咽癌转移分子机制的阐明提供了重要的线索 .     

一个新硝基还原酶基因NOR1编码区单核苷酸多态及与鼻咽癌的关联分析

NOR1基因是中南大学湘雅医学院肿瘤研究所克隆的一个鼻咽癌表达下调新基因,生物信息学预测NOR1基因含有硝基还原酶结构域,该基因可能参与亚硝胺类化学致癌物在体内的代谢过程,从而与鼻咽癌的发生密切相关.通过采用病例-对照的研究方法,利用测序技术对144名鼻咽癌患者和匹配的144名正常人NOR1基因编码区单核苷酸多态(coding region single nucleotide polymorphisms, cSNPs)进行基因分型,关联分析结果显示所检测到的两个cSNPs之间存在连锁不平衡,且均与鼻咽癌发病相关,两个cSNPs及它们所组成的单倍型相对危险度分别为1.36、1.64和1.37.两个cSNPs的多态性改变均使NOR1基因编码蛋白一级结构发生了变化,这种改变可能影响NOR1基因编码蛋白的结构和功能.研究进一步支持了NOR1基因与鼻咽癌的发生发展可能存在密切的关系.     

抑瘤基因NGX6对鼻咽癌细胞株HNE1细胞生长的影响(英文)

鼻咽癌是我国南方多发恶性肿瘤 ,它的发生发展与遗传因素密切相关 .采用定位候选克隆策略在 9p上克隆出一个候选抑瘤基因 ,命名为NGX6 .为了进一步研究它的功能 ,将NGX6基因的全长cDNA片段亚克隆至pcDNA3.1(+ )的表达载体中 ,通过脂质体转染入鼻咽癌细胞系HNE1中 ,Northern杂交方法筛选高效表达NGX6的细胞株 ,并借助细胞生长曲线、软琼脂糖集落形成实验、裸鼠体内接种实验和流式细胞仪对转染细胞的生物学行为进行了检测 .结果显示 ,转染了NGX6基因的HNE1细胞的生长速度明显减慢 ,在软琼脂中集落形成率较对照组显著下降 (P〈0 0 5 ) ,裸鼠体内成瘤的时间较对照组明显延长 ,瘤体的大小和重量较对照组明显减少 ,流式细胞仪检测发现细胞的凋亡率无明显变化 .为了明确NGX6蛋白在细胞中发挥作用的部位 ,进一步将NGX6的开放阅读框架完整正确地克隆到pEGFPC1的荧光载体中 ,转染到COS7细胞中 ,用荧光显微镜观察细胞中荧光的分布 ,发现荧光主要分布在细胞浆中 ,说明NGX6蛋白可能是一种胞浆蛋白 .该研究表明 ,NGX6在NPC的发生发展中起重要作用 ,为全面阐述NGX6的功能提供重要的信息 ,为进一步的功能研究打下基础     

NGX6基因抑制高转移鼻咽癌细胞的侵袭运动能力

 NGX6 基因是我室利用定位候选克隆策略,在鼻咽癌的高频杂合性缺失区9p21-22克隆的新基因.前期研究结果提示,它与鼻咽癌细胞的侵袭转移密切相关.为了进一步阐明其作用的结构基础,本研究成功构建了含NGX6基因及突变体的pCMV-myc瞬时和pcDNA3.1-his-myc(-)B稳定表达载体.通过脂质体转染技术,构建了NGX6及突变体的稳定表达细胞系5-8F.用免疫荧光试验和免疫电镜观察了NGX6在5-8F细胞中的亚细胞定位主要位于胞膜、核膜以及胞浆中的膜质结构,缺失突变的功能域对其定位没有明显的影响.基质胶侵袭试验和划痕试验研究了NGX6及突变体对细胞运动的影响.NGX6能抑制高转移潜能的鼻咽癌细胞5-8F的运动和侵袭能力,缺失胞内区（CYTO）后NGX6不能抑制5-8F细胞的运动和侵袭,提示CYTO可能是其发挥作用的重要功能域.     

梅花鹿生长激素基因单核苷酸多态与产茸量性状的相关性

以梅花鹿的生长激素基因(GH)作为候选基因, 分析该基因对梅花鹿产茸量性状的影响。以吉林农业大学鹿场提供的梅花鹿为实验群体, 采用单链构象多态性(PCR-SSCP)和DNA测序的方法检测了GH基因单核苷酸多态性(SNPs), 针对该群体的特点建立合适的统计分析模型, 并进行了GH基因多态性与产茸量的相关分析。结果表明, GH基因对梅花鹿的产茸量有一定影响。G→A突变产生的3种基因型间的第五锯产茸量存在一定的差异(P<0.2), BB基因型个体在第五锯的产茸量与AA基因型个体之间有一定的差异(P<0.2)。     

BRD7单核苷酸多态性及鼻咽癌易感性分析

为了探讨BRD7基因的遗传变异在鼻咽癌发生的作用,采用PCR-SSCP和直接测序方法对BRD7 基因的编码区进行单核苷酸多态性（coding-region single nucleotide polymorphism, cSNP）分析,并对两个鼻咽癌家系的高危成员、57个散发性鼻咽癌病人和50个正常人进行了BRD7等位基因分型.在BRD7基因的编码区发现了3个cSNP（C450T、A538C和A737G）,其中A538C颠换导致其编码蛋白的第162个氨基酸由Asp变为Ala;C450T改变与同义的A737C多态性偶联发生在87.7%的鼻咽癌活检组织和配对的外周血、所有的鼻咽癌家系的患者及8个易感成员,但是仅存在于22%的正常人血标本中.C450T多态性变化可以导致其编码蛋白在第133位氨基酸的翻译终止（G133Ter）.以上结果说明,C450T和A737C偶联的多态性改变是鼻咽癌发生和发展的重要遗传易感风险因子之一（P＜0.01）;BRD7基因有两种翻译方式,G133Ter可以导致另一种截断的翻译本（truncated isoform）.     

抑瘤基因NGX6启动子的克隆与功能鉴定

NGX6是一个结直肠癌候选抑瘤基因,其转录调控机制不明．采用生物信息学技术预测其启动子区,并构建NGX6启动子荧光素酶报告基因重组体pGL3/Enhancer/1126．荧光素酶活性检测结果表明该区域具有强启动子活性．应用PromoterInspector program,FistEF,CpGplot和MatInspector Professional软件分析发现,NGX6基因转录调控区为一个不含TATA盒,而含有CAAT盒的GC富集区．凝胶迁移阻滞实验确定NGX6基因启动子区域具有Sp1特异性结合位点,Sp1特异性阻断剂光神霉素(mithramycin A)能明显抑制NGX6启动子的活性和NGX6基因的表达;封闭内源性Sp1能下调NGX6基因mRNA表达水平．     

Identification of a New Seven-span Transmembrane Protein: NGX6a Is Downregulated in Nasopharyngeal Carcinoma and Is Associated With Tumor Metastasis

Nasopharyngeal carcinoma (NPC)-associated gene 6 (NGX6) is a novel candidate metastasis suppressor gene that can significantly decrease the growth, motility, and invasion of NPC cells. In this study, we generated a highly specific NGX6 polyclonal antibody and analyzed its distribution in the human fetus by Western blot and immunohistochemistry. The result of the Western blot showed the protein of NGX6 had two types of isoforms, isoform a (NGX6a) and isoform b (NGX6b). Isoform a is composed of 472 amino acids with a calculated molecular mass of 52 kDa, whereas isoform b is composed of 338 amino acids with a calculated molecular mass of 37 kDa. It is predicated that there is an epidermal growth factor domain in the N terminal of both a and b isoforms, and seven transmembrane domains in NGX6a, but only two transmembrane domains in NGX6b. The expression level of NGX6a was higher than that of NGX6b in human fetal tissue. Obvious high expression of NGX6a protein presents in the nervous system and epithelial tissues of the human fetus, but the NGX6b protein (37 kDa) is mainly expressed in the nervous system. We further analyzed the tissue microarray, which contained 154 NPC biopsies and 70 non-NPC biopsies, and found that NGX6a was significantly downregulated in NPC and associated with tumor metastasis. (J Histochem Cytochem 58:41–51, 2010)     

NGX6 gene inhibits cell proliferation and plays a negative role in EGFR pathway in nasopharyngeal carcinoma cells

Nasopharyngeal carcinoma (NPC) is a common cancer in South China but is rare in other parts of the world. A novel NPC-related gene was isolated by location candidate cloning strategy, whose expression was down-regulated in NPC. This gene was designated human NGX6 (Genbank accession AF188239) and encoded a predicted protein of 338 amino acids that harbors an EGF-like domain. The effects of NGX6 on cells from human NPC cell line HNE1 were investigated. The cells transfected with NGX6 had a markedly high expression of NGX6, leading to significant decrease in cell proliferation and the capability to form colonies in soft agar, delaying the G0-G1 cell cycle progression. Flow cytometry assay indicated that the expression of cyclin D1 significantly decreased in NGX6-transfected HNE1 cells as well as cyclin A and E. There was a delay in tumor formation and a dramatic reduction in tumor size when cells transfected with NGX6 were injected into nude mice. In another way, we found NGX6 played a negative role in EGFR Ras/Mek/MAPK pathway. We propose that NGX6, as an EGF-like domain gene, could delay cell cycle G0-G1 progression and thus inhibit cell proliferation by negatively regulating EGFR pathway in NPC cells and down-regulating the expression of cyclin D1 and E.