沉默胃泌素基因抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭

胃癌细胞分泌的胃泌素与胃癌的发生、发展密切相关.为了探讨胃泌素对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响,本文构建靶向胃泌素基因的siRNA表达载体, 转染胃癌细胞AGS, 成功获得沉默胃泌素基因的稳转胃癌细胞株AGS/Gas-siRNA. 用MTT实验、软琼脂集落形成实验、细胞伤愈实验、Transwell实验及ELISA检测沉默胃泌素基因后细胞的增殖、迁移、侵袭及转移相关蛋白基质金属蛋白酶-2（MMP-2）和血管内皮生长因子（VEGF）的含量. 结果显示: 与空载体转染的对照细胞比较, 沉默胃泌素基因的细胞, 其增殖率和克隆形成率显著降低,迁移和侵袭到Transwell下室的细胞数分别降低了31.6 %和34 %. 培养上清液中MMP-2和VEGF含量也低于对照细胞. 结果提示,沉默胃泌素基因的胃癌细胞,通过降低MMP 2和VEGF分泌,抑制了细胞的增殖、迁移和侵袭, 这可能是胃泌素促进胃癌侵袭转移的机制之一.     

下调lincRNA HOTAIR对胃癌细胞迁移及增殖抑制作用的研究

通过下调人胃癌细胞BGC823中linc RNA HOTAIR基因的表达,该文探讨了linc RNA HOTAIR低表达对胃癌细胞迁移、侵袭及增殖能力的影响。该文构建针对人linc RNA HOTAIR基因的干扰质粒sh HOTAIR,稳定转染入胃癌细胞BGC823、筛选稳转株,q PCR检测linc RNA HOTAIR在胃癌细胞中表达水平。采用划痕试验、侵袭试验、MTT法分别检测转染胃癌细胞迁移、侵袭及增殖能力。结果表明,稳定转染干扰质粒sh HOTAIR后下调linc RNA HOTAIR表达的胃癌细胞株细胞迁移、侵袭及增殖能力较阴性对照组明显减弱。下调胃癌细胞中linc RNA HOTAIR的表达,可降低胃癌细胞的迁移力、侵袭性、抑制其增殖能力,提示linc RNA HOTAIR可作为分子靶点用于胃癌的分子靶向治疗。     

ALKBH5对人胃癌AGS细胞迁移和侵袭的影响

该研究探讨了6-甲基腺嘌呤(N6-methyladenosine,m~6A)去甲基酶ALKBH5(alk B homolog5)对人胃癌AGS细胞迁移和侵袭的影响。通过数据库分析ALKBH5在胃癌组织中的表达水平;Real-time PCR和Western blot检测ALKBH5在胃癌细胞中表达水平;用sh-EGFP和sh-ALKBH5质粒转染人胃腺癌AGS细胞,Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭能力,细胞划痕实验进一步检测细胞的迁移能力;用Western blot检测上皮–间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白质的变化。结果显示,弥漫性胃腺癌中ALKBH5的m RNA水平明显低于正常胃组织和其他类型的胃癌组织,且其基因拷贝数也明显低于正常胃组织。在胃癌细胞系中,AGS细胞ALKBH5蛋白质和m RNA水平最高,sh-ALKBH5干扰能明显促进AGS细胞迁移和侵袭能力,且下调其上皮指标水平,而上调间质指标水平。上述结果提示,ALKBH5在胃癌组织中可能是一个抑癌基因,与胃癌细胞的迁移和侵袭能力负相关。     

LncRNA MIR4435-2HG调控miR-138-5p/HMGA1轴对胃癌细胞的增殖、侵袭和迁移的影响

目的 探讨LncRNA MIR4435-2HG对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及作用机制.方法 培养正常人胃黏膜上皮细胞GES-1和胃癌细胞系AGS、SGC7901、BGC823和BGC803,AGS细胞分为对照组(正常培养细胞)、si-con组(转染乱序无意义阴性序列)、si-MIR4435-2HG组(转染MIR44...     

TGFBI对胃癌MGC-803细胞侵袭转移及血管生成的影响

目的 探讨转化生长因子β诱导物（transforming growth factor β induced, TGFBI）在胃癌中的表达及其对胃癌细胞MGC-803侵袭转移及血管生成的影响和分子机制。方法 RT-q PCR和免疫组织化学检测人胃癌组织及胃癌细胞株中TGFBI的表达。转染小干扰RNA(si-TGFBI)构建人胃癌MGC-803细胞TGFBI敲减模型,MTT实验测定细胞增殖,划痕实验及Transwell侵袭实验评估侵袭转移;Matrigel体外成管实验观察血管生成;免疫荧光及Western blot评估相关目的蛋白的表达及PI3K/AKT/mTOR信号通路的活性。结果 胃癌组织及胃癌细胞株中TGFBI的表达均显著升高。转染si-TGFBI可抑制胃癌MGC-803细胞增殖、血管生成以及侵袭转移,同时上调E-cadherin表达,并下调N-cadherin、Snail以及Vimentin的表达,抑制上皮-间充质转化进程。此外,转染si-TGFBI可显著抑制胃癌MGC-803细胞PI3K/AKT/mTOR信号通路的活性。结论 TGFBI在胃癌中高表达,高表达的TGFBI可能通过激活...     

中药组方黄芩汤抑制胃癌细胞增殖的实验研究

目的探讨黄芩汤对胃癌细胞生长增殖及干细胞标志物表达的影响。 方法采用体外优化培养的胃癌细胞株SGC-7901模型,分别加入生理盐水、5-FU、黄岑汤和5-FU+黄芪汤干预,MTT法检测胃癌细胞增殖情况,Real-time PCR检测胃癌干细胞相关表面标志物CD44、EpCAM、CD90的表达情况;并进一步利用胃癌细胞裸鼠荷瘤模型,观察黄岑汤协同5-FU对体内肿瘤生长的抑制效果。细胞增殖曲线多组间数据比较采用重复测量数据方差分析,单时间点多组数据采用单因素方差分析,组间比较采用Tukey法。 结果优化培养的胃癌细胞SGC- 7901呈球形生长,细胞活性染色显示良好的活性状态;MTT结果显示,黄岑汤组（0.44±0.04）能够抑制胃癌细胞的增殖,从第4天起与对照组（0.59±0.02）相比,差异具有统计学意义（F = 39.550,P < 0.01）;黄岑汤联合5-FU组（0.36±0.04）加强5-FU对肿瘤细胞的抑制作用,从第3天起与对照组（0.50±0.01）相比,差异具有统计学意义（F = 10.670,P < 0.01）,与5-FU组（0.42±0.03）对比,差异具有统计学意义（F = 10.670,P < 0.05）;Real-time PCR结果显示黄岑汤联合5-FU可抑制胃癌细胞中肿瘤干细胞相关表面标志物CD44、EpCAM、CD90表达（P < 0.01）;移植瘤生长抑制实验发现黄芪汤组对荷瘤鼠移植瘤的生长具有抑制作用,与对照组相比移植瘤体积减小,差异具有统计学意义（P < 0.01）,黄岑汤联合5-FU组与5-FU组相比对移植瘤抑制效果更明显,差异具有统计学意义（P < 0.01）。 结论黄芪汤能抑制胃癌细胞的生长和增殖,并能协同5-FU产生抗肿瘤作用。     

成纤维细胞生长因子23在胃癌中的表达及作用研究

目的:探讨成纤维细胞生长因子23(Fibroblast growth factor 23, FGF23)在胃癌中的表达,并研究其对胃癌细胞增殖和侵袭的作用。方法:收集2014年7月-2017年12月来我院手术治疗的胃癌患者,免疫组化检测FGF-23和Ki-67的表达;采用Transwell小室进行胃癌细胞侵袭实验;MTT实验检测胃癌细胞的增殖情况。结果:免疫组化的结果显示胃癌组FGF-23的平均光密度是477.5,对照组为46.65(t=10.53,P0.0001),相关性分析的结果显示胃癌组织中FGF-23与Ki-67增殖指数具有正相关性(r=0.6489,P=0.0020);Transwell侵袭实验的结果显示低浓度的FGF-23具有一定的促进胃细胞侵袭的作用,高浓度的FGF-23能够显著的促进胃癌细胞侵袭,相对于对照组和低浓度组,侵袭的细胞数目分别上升了2.19倍和74.77%,结果差异明显(t=16.24,P0.0001;t=9.811,P0.0001);MTT实验的结果显示低浓度的FGF-23具有一定的促进胃细胞增殖的作用,高浓度的FGF-23能够显著的促进胃癌细胞增殖,相对于对照组和低浓度组,吸光度分别上升了1.70倍和37.37%倍,结果差异明显(t=13.81,P0.0001;t=4.227,P=0.0018)。结论:我们的研究发现FGF-23在胃癌组织中高表达,其能促进胃癌细胞的增殖和侵袭,我们的研究为胃癌的诊断和精准治疗提供了一个新的靶点。     

lncRNA CEBPA-AS1靶向miR-455-3p调控胃癌细胞生物学行为的分子机制研究

摘要 目的：探讨lncRNA CEBPA-AS1对胃癌细胞生物学行为的影响及其可能作用机制。方法：qRT-PCR法检测胃癌组织、癌旁组织与正常人胃上皮GES1细胞和人胃癌SNU-1、AGS、HS-746T细胞系中lncRNA CEBPA-AS1、miR-455-3p的表达量。si-NC、si-lncRNA CEBPA-AS1、miR-NC、miR-455-3p mimics、si-lncRNA CEBPA-AS1与anti-miR-NC、si-lncRNA CEBPA-AS1与anti-miR-455-3p分别转染至SNU-1细胞（分别命名为si-NC组、si-lncRNA CEBPA-AS1组、miR-NC组、miR-455-3p组、si-lncRNA CEBPA-AS1+anti-miR-NC组和si-lncRNA CEBPA-AS1+anti-miR-455-3p组）后,MTT实验与平板克隆形成实验分别检测细胞增殖及克隆形成能力,Transwell小室实验检测细胞迁移及侵袭能力,双荧光素酶报告基因实验与qRT-PCR实验验证lncRNA CEBPA-AS1与miR-455-3p的靶向调控关系,Western blot法检测MMP2、MMP9蛋白表达情况。结果：与癌旁组织比较,胃癌组织中lncRNA CEBPA-AS1的表达量显著升高,miR-455-3p的表达量显著降低,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。与GES1细胞比较,SNU-1、AGS、HS-746T细胞中lncRNA CEBPA-AS1的表达量显著升高,miR-455-3p的表达量显著降低,其中SNU-1细胞的lncRNA CEBPA-AS1表达量最高,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。与si-NC组比较,si-lncRNA CEBPA-AS1组细胞活力降低,细胞克隆形成数、迁移及侵袭细胞数减少,MMP2、MMP9蛋白表达水平降低,差异均有统计学意义（P＜0.05）。与miR-NC组比较,miR-455-3p组细胞活力降低,细胞克隆形成数、迁移及侵袭细胞数减少,MMP2、MMP9蛋白表达水平降低,差异均有统计学意义（P＜0.05）。lncRNA CEBPA-AS1可靶向结合miR-455-3p,并可负调控miR-455-3p的表达。与si-lncRNA CEBPA-AS1+anti-miR-NC组比较,si-lncRNA CEBPA-AS1+anti-miR-455-3p组细胞活力升高,细胞克隆形成数、迁移及侵袭细胞数增多,MMP2、MMP9蛋白表达水平升高,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论：干扰lncRNA CEBPA-AS1表达可通过靶向调控miR-455-3p而抑制胃癌细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭。     

硫氧还蛋白还原酶1(TrxR1)在胃癌中的表达及对胃癌细胞生长的影响*

目的: 探讨胃癌组织硫氧还蛋白还原酶1(TrxR1)表达与生存时间的关系及其对胃癌细胞生长的影响。方法: 用Real-time PCR法检测76例胃癌组织及癌旁TrxR1 mRNA表达,并分析其与胃癌患者临床病理特征及预后的关系;随机选取3例胃癌组织及癌旁组织,采用免疫组化法、Western blot法检测TrxR1蛋白表达。采用Western blot法和Real-time PCR法检测胃癌细胞系及人胃粘膜上皮细胞中TrxR1的表达。采用小RNA干扰序列(siRNA)处理AGS细胞,根据处理方法不同将AGS细胞分为3组:阴性对照组:转染NC-siRNA、TRXR1 siRNA干扰1组:转染TRXR1-siRNA1、TRXR1 siRNA干扰2组:转染TRXR1-siRNA2。使用Real-time PCR法检测各组AGS细胞中TrxR1 mRNA的表达,克隆形成试验和MTT法检测AGS细胞生长情况。结果: 胃癌组织中TrxR1 mRNA和蛋白表达量均显著性上调,TrxR1主要定位于细胞质中。TrxR1高表达与患者TNM分期及淋巴结转移有关,且TrxR1高表达组患者的中位生存时间短于低表达组(P＜0.05)。胃癌细胞中TrxR1表达量高于人胃粘膜上皮细胞系中的表达。TRXR1-siRNA1组AGS细胞和TRXR1-siRNA2组AGS细胞中TrxR1 mRNA和蛋白与NC-siRNA组相比均显著性降低(P＜0.05),且AGS细胞克隆形成与增殖能力均降低(P＜0.05)。结论: 胃癌组织中TrxR1高表达提示患者预后不良,沉默TrxR1能抑制胃癌细胞的增殖。     

miR-596在胃癌组织中的表达和临床意义

为了研究micro RNA-596(miR-596)在人胃癌组织中的表达情况和临床意义。本研究选用80例癌症患者,通过实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测技术,比较miR-596在胃癌组织以及相对应的癌旁组织中的miR-596含量差异,并分析其表达水平与胃癌患者临床病例特征的相关性。此外还通过CCK-8实验和Transwell穿孔实验比较正常胃癌细胞系AGS和转染过表达miR-596的AGS细胞的增殖水平和侵袭能力。发现通过CCK-8实验检测细胞的增殖水平,使用Transwell穿孔实验检测细胞的侵袭能力。相比于癌旁组织,miR-596在胃癌组织中的表达量显著降低(p0.05)。miR-596的表达量与患者的淋巴结是否转移(p0.05)、癌组织大小和TNM分期这几个因素具有显著相关,而与患者的年龄、性别、分化程度这几个因素无显著相关性。与阴性对照组细胞相比,AGS转染了miR-596 mimics后,细胞增殖能力显著下降(p0.01),同时细胞的侵袭能力显著降低(p0.01)。说明miR-596在胃癌组织中具有非常重要的作用,且与患者的不良临床病理特征相关。过表达miR-596可以抑制胃癌细胞的增殖和侵袭能力,从而达到抑制胃癌发展的效果,该发现对于胃癌的早期诊断和预后估计以及制定更加有效的手术方案均具有较大的临床意义,此外还可为进一步研究miR-596靶向药物的研究与开发奠定理论基础。     

人间充质干细胞对乳腺癌细胞生长的影响研究

目的通过构建间充质干细胞(MSC)与乳腺癌细胞间相互作用的共培养模型,探讨MSC对乳腺癌细胞生长的影响。方法用含荧光基因第三代自身失活慢病毒载体感染人类脐带分离提取的MSC和乳腺癌细胞MDA-MB-231、MCF-7,以单独培养的乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7分别设立对照,2种乳腺癌细胞分别与MSC共培养,检测乳腺癌细胞在MSC作用下增生能力的改变,流式细胞术检测共培养后细胞表面标记物表达。两组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析,多重比较采用Dunnet-t检验。结果MSC在与乳腺癌细胞共培养过程中促进肿瘤细胞生长,第3天共培养组乳腺癌MDA-MB-231细胞数高于单独MDA-MB-231培养组[(5.50±0.71)×10^3个比(1.63±0.41)×10^3个],培养至第7天,两组间MDA-MB-231细胞数差异进一步增大[(81.25±7.40)×10^3个比(26.25±4.15)×10^3个],差异具有统计学意义(P均<0.001);共培养后MSC促进乳腺癌细胞表达干细胞特有标记物CD90,MCF-7从共培养第2天CD90表达率(1.38±0.30)﹪升高至第9天(92.45±2.04)﹪。在共培养中MSC围绕肿瘤细胞集落方式生长,在形态上变长,并发现一种新型混合细胞(hybrid融合细胞)同时表达绿色和红色荧光,且对化疗药物更敏感。结论MSC促进乳腺癌细胞的生长,伴随MSC形态学改变和hybrid融合细胞出现,乳腺癌细胞获得MSC特有CD90表达。     

外泌体MicroRNA-1246促进星形胶质瘤细胞增殖与侵袭的研究

目的探讨星形胶质瘤细胞来源的外泌体中microRNA-1246（miRNA-1246）是否作用于星形胶质瘤细胞,促进其增殖与侵袭。 方法实验分为对照组、miRNA-1246抑制剂组与miRNA-1246模拟物组,各组设6个复孔。首先从患者血液中分离外泌体并鉴定其成分。通过基质胶包被的Transwell小室实验检测星形胶质瘤细胞在miRNA-1246作用下侵袭能力的变化,CCK-8实验检测细胞增殖能力。利用荧光素酶报告基因验证miRNA-1246是否靶向细胞黏附分子1（CADM1）基因。最后通过Western Blot实验与RT-qPCR实验检测癌症组织中CADM1蛋白水平的含量并分析其与胶质瘤的关系。采用方差分析和t检验进行统计学分析。 结果恶性胶质瘤患者血液循环外泌体中miRNA-1246的含量为2.83±1.70,高于对照组1.00±0.50,差异具有统计学意义（t?=?6.044,P?=?0.026）。转染miRNA-1246抑制剂后细胞CADM1蛋白水平为1.79±0.17,高于对照组1.00±0.09（t?=?4.576,P?=?0.017）,细胞侵袭数量为（48.40±5.90）个,低于对照组96.50±6.70,而转染miRNA-1246模拟物后细胞侵袭数量为（123.20±9.80）个,高于对照组（96.50±6.70）个（t?=?5.258,P?=?0.002）。CCK-8实验中转染miRNA-1246抑制剂组A450值为0.49±0.08,低于对照组0.76±0.06,而转染miRNA-1246模拟物组A450值为1.03±0.09,显著升高（F?=?33.82,P?=?0.005）。荧光素酶报告实验表明细胞转染miR-?1246模拟物后荧光强度为4.98±1.86,低于对照组10.34±2.60（t?=?7.235,P?=?0.006）,而CADM1-Mut组内之间比较差异无统计学意义。 结论胶质瘤细胞外泌体中的miRNA-1246可通过靶向CADM1基因抑制蛋白表达,促进胶质瘤细胞的增殖与转移,提示循环外泌体中的miRNA-1246可作为恶性胶质瘤诊断与治疗的潜在靶点。     

Downregulation of lncRNA HCP5 has inhibitory effects on gastric cancer cells by regulating DDX21 expression

LncRNA HCP5 has been confirmed to play crucial roles in many types of cancers. However, the role of lncRNA HCP5 in regulating the occurrence and development of gastric cancer (GC) remains unknown. In the current study, we aimed to investigate the precise effects of lncRNA HCP5 on cell proliferation, migration and invasion and molecular mechanisms in gastric cancer. Using RT-qPCR analysis, we found that lncRNA HCP5 was differentially expressed in GC cell lines. CCK-8, wound healing and transwell assay indicated that the proliferation, migration and invasion of gastric cancer cells were inhibited by downregulation of lncRNA HCP5 and lncRNA HCP5 overexpression exhibited the opposite effects in gastric cancer cells. Mechanistically, RNA binding protein immunoprecipitation and dual luciferase reporter assay confirmed the interaction between lncRNA HCP5 and DDX21. The effects of lncRNA HCP5 overexpression the proliferation, migration and invasion of GC cells were partly rescued by DDX21 silencing. Taken together, downregulation of lncRNA HCP5 exerted inhibitory effects on GC cell proliferation, migration and invasion through modulation of DDX21 expression, demonstrating the function of lncRNA HCP5 and DDX21 in GC progression.     

miR-491-5p靶向调控SHOC2对食管鳞癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的探讨miR-491-5p对食管鳞癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响及作用机制。 方法培养永生化食管上皮细胞株HET-1A和人食管癌细胞株EC109,EC9706,KYSE510,qRT-PCR检测细胞中miR-491-5p和富含亮氨酸重复蛋白SHOC2 （SHOC2） mRNA水平。EC109细胞分为空白对照组、miR- 491-5p组、miR-NC组、miR-491-5p+pcDNA-SHOC2组和miR-491-5p+pcDNA组,MTT检测细胞增殖,Transwell检测细胞迁移和侵袭,Western Blot法检测CyclinD1、Vimentin、E-cadherin以及MAPK/ERK信号通路相关蛋白水平。双荧光素酶报告基因实验验证miR- 491- 5p与SHOC2之间调控关系。两组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用SNK-q检验。 结果食管鳞癌细胞EC109、EC9706和KYSE510中miR-491-5p表达水平低于HET-1A细胞（0.32±0.06、0.62±0.10、0.61±0.08比1.00±0.08）,差异具有统计学意义（F = 106.340,P < 0.001）;SHOC2 mRNA表达水平高于HET- 1A细胞（2.85±0.16、1.73±0.10、1.45±0.06比1.02±0.09）,差异具有统计学意义（F = 464.949,P < 0.001）。miR-491-5p组EC109细胞培养72 h后的OD值、细胞迁移数、侵袭数及CyclinD1、Vimentin、p-MEK和p-ERK蛋白水平均低于miR-NC组（0.70±0.06比1.42±0.08,65.01±10.36比150.01±12.48,70.03±10.26比140.02±11.85,0.30±0.03比0.93±0.16,0.41±0.05比0.86±0.08,0.32±0.06比0.95±0.11,0.40±0.06比0.92±0.13）,差异具有统计学意义（F = 236.565、159.440、120.706、101.071、98.619、130.766、77.046,P均< 0.001）,E-cadherin蛋白水平高于miR-NC组（0.89±0.13比0.48±0.08）,差异具有统计学意义（F = 816.432,P < 0.001）。miR-491-5p在EC109细胞中负调控SHOC2表达,SHOC2过表达逆转了miR-491-5p过表达对EC109细胞增殖、迁移和侵袭及MAPK/ERK信号通路的影响。 结论miR-491-5p可抑制食管鳞癌细胞的增殖、迁移和侵袭,其作用机制可能与下调SHOC2表达抑制MAPK/ERK信号通路活性有关。     

长非编码RNA SNHG18对人胃癌细胞BGC823增殖和凋亡的影响

目的:探究长非编码RNA SNHG18对胃癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:采用实时定量PCR(qRT-PCR)技术检测人胃癌组织及癌旁组织和胃癌细胞系中lncRNA SNHG18的表达;采用MTT和克隆形成试验观察转染SNHG18过表达质粒后胃癌细胞BGC823增殖活力的变化;通过流式细胞术检测lncRNA SNHG18对胃癌细胞BGC823凋亡的影响。结果:相较于癌旁组织和胃正常粘膜上皮细胞系GSE-1,胃癌组织及胃癌细胞系中SNHG18的表达水平显著降低(P0.05);胃癌细胞过表达SNHG18增殖活力以及克隆形成的能力均显著降低(P0.05),而细胞凋亡率明显升高(P0.05)。结论:胃癌组织中长非编码RNA SNHG18呈低表达,可促进胃癌细胞增殖并抑制其凋亡,可能在胃癌发生发展过程中发挥重要作用。