真核生物细胞中无终止密码mRNA的降解

2002年,Frischmeyer和Hoof等人发现真核生物细胞中具有一种新的mRNA监视机制——无终止密码mRNA降解途径,与正常mRNA和无义mRNA降解途径不同,无终止密码mRNA是在外切酶体介导作用下快速脱腺苷并进行3’→5’方向的水解。本对无终止密码mRNA降解途径的研究现状做一简要介绍。     

原位杂交组织化学及其在神经科学中的应用

原位杂交组织化学是近年来新发展起来的一项能特异地显示组织细胞内mRNA 的技术,它把重组 DNA 技术和组织化学方法结合起来,用于对已知的神经激素、神经肽及其受体的 mRNA 的细胞定位,观察特异的 mRNA 在体内表达的部位;观察单个细胞内 mRNA 量的变化,研究 mRNA 代谢的调节;半定量地测定细胞内 mRNA 的含量。     

真核生物mRNA非翻译区结构特征与mRNA翻译

真核生物中蛋白质合成通常在翻译水平受到调控,而mRNA非翻译区与mRNA翻译之间关系密切。真核生物mRNA非翻译区长度、mRNA二级结构、GC含量、顺式作用元件与反式作用因子、mRNA帽端结构和多聚腺苷酸尾等结构对翻译具有重要的调控作用。本文就真核生物mRNA非翻译区结构特征对其翻译的影响做一综述。     

用改进的Mg^＋＋沉淀多聚核糖体法分离胞质mRNA

本文报道一种用改进的Palmiter的方法分离纯化胞质mRNA。即利用镁离子沉淀核糖体,提取细胞质总RNA,进而纯化胞质mRNA的方法。该方法得到的mRNA是正在翻译的成熟的胞质mRNA。所得mRNA得率和质量都优于其他方法,便于常规检测,并可用于cDNA的合成和PCR扩增。     

mRNA疫苗在疾病预防与治疗中的研究进展与展望

基于信使RNA(messenger RNA, mRNA)的核酸疫苗是近年来兴起的一种mRNA技术。mRNA疫苗比传统疫苗有许多优点,能够实现快速、经济、高效的生产。单个mRNA疫苗可以编码多种抗原,增强对特定病原体的免疫反应,提高疾病的治疗效率,以单一配方针对多种病原微生物或疾病。mRNA疫苗相关技术在新型冠状病毒肺炎疫情防控中被视作一种革命性的疫苗技术,以创纪录的速度完成研发并成功应用。由于mRNA自身稳定性差,新型递送系统的开发与应用至关重要。随着mRNA相关药理学的深入研究,mRNA疫苗的临床应用进入了一个崭新的阶段。近年来。mRNA疫苗在传染性疾病预防、肿瘤治疗等方面获得充分发展并取得了一定的研究成果,对其进行概述并进行一定程度的展望。     

信使核糖核酸3′端多聚腺苷酸链的作用

原核生物如细菌,其原始RNA转录物就是信使核糖核酸(mRNA),新RNA分子一生成就与核糖体结合,并开始合成蛋白质。真核生物的细胞,原始转录物并不被直接用作mRNA,而是mRNA的前身——核不均核糖核酸(hnRNA),它要经过一系列的转录后加工,其中包括5‘端的“戴帽”——增加一甲基化的低聚核苷酸结构,以及3’端的多腺苷酰化作用——接上一条长长的多聚腺苷酸尾链(以下简称多聚(A))才具有mRNA作用。近年还有证据表明,比mRNA大的原始转录物要经核酸内切酶裂解后,其某些片段再连接在一起才成为有功能的mRNA。本文重点讨论mRNA     

mRNA药物研究进展及市场应用分析

信使RNA(messenger RNA,mRNA)是一段编码蛋白质的核糖核苷酸序列,因为其进入细胞经翻译修饰后可以表达目的蛋白,所以mRNA分子可以作为药物治疗相应的疾病。mRNA药物用于治疗多种疾病,包括感染性疾病、肿瘤,以及由于缺少某种蛋白质或者某种蛋白质机能异常所引起的疾病,甚至作为基因编辑的工具参与基因治疗。mRNA分子作为疫苗用于预防感染性疾病已经在市场上取得了巨大的成功,因此其应用潜力得到了广泛的关注。由于mRNA药物应用方向广泛,且mRNA药物具有研发生产过程快、生产成本较低等优势,目前多种mRNA药物的相关研究正在进行中。就mRNA的基础结构、mRNA的递送系统、国内外mRNA药物的研究及临床进程进行综述,并对进一步广泛应用mRNA药物所面临的问题进行探讨。     

mRNA技术应对病毒传染病的研究进展

信使核糖核酸(messenger RNA,mRNA)疫苗和抗体是近年来兴起的一种新型疫苗和抗体技术。与传统疫苗相比,mRNA疫苗具有安全性高、均衡免疫性好、研发周期短、生产成本低等优势,mRNA抗体比其他形式递送的抗体在体内发挥生物学效应的时间更早也更持久。随着mRNA修饰与递送技术的快速发展,mRNA技术迅速走向成熟,在肿瘤治疗、病毒传染疾病的预防和治疗等方面展现出广阔的应用前景,特别是新型冠状病毒mRNA疫苗以创纪录的速度完成研发并成功应用,为未来mRNA技术的推广铺平了道路。本文综述了mRNA技术领域的重要突破,重点关注mRNA疫苗和抗体在应对病毒传染病中的重大进展,并展望了未来该技术在抗病毒感染领域的研究趋势。     

介绍一种快速印迹杂交法

本文介绍一种快速的细胞mRNA及DNA印迹法。本方法以细胞数为单位,将细胞破碎后在高浓度NaI存在的条件下直接点样于硝酸纤维滤膜上用于核酸的杂交。用本方法可以检测细胞中特异mRNA和DNA的含量,主要用于细胞中特异mRNA的半定量分析和不同细胞之间特异mRNA表达的比较,也适用于分析比较细胞接受各种刺激前后特异mRNA含量的变化。     

依赖细胞骨架的 mRNA 定位

mRNA定位是产生细胞极性的一种重要机制,在卵母细胞发生、早期胚胎发育及某些细胞特定功能的建立和维持中起重要作用。沿细胞骨架进行mRNA的主动转运是mRNA定位的主要机制之一,在mRNA的运输和锚定过程中,定位元件、特异的RNA结合蛋白、发动蛋白和细胞骨架分别起着重要的作用。     

染色质结构与mRNA可变剪接

mRNA的可变剪接(alternative splicing)是一种由一个mRNA前体(pre-mRNA)通过不同的剪接方式产生多个mRNA变异体(variants)的RNA加工过程。在过去很长一段时间里,人们认为mRNA剪接过程是独立于转录过程的一个转录后RNA加工过程。然而,越来越多的实验证明mRNA剪接在很大程度上是与转录偶联发生的。因此,剪接调控会受到与转录相关因素的调控。本文将对染色质与mRNA剪接调控的相关性和染色质结构调控可变剪接的分子机制进行阐述。     

mRNA疫苗的开发及临床研究进展

随着mRNA稳定性和安全高效的递送系统的研究日渐成熟,近年来,mRNA疫苗在肿瘤个体化疫苗中取得了较大进展,因其生产工艺简单、在细胞内表达抗原、安全性优于DNA疫苗等特点,是一种很有前途的新型疫苗。为了解全球mRNA疫苗的开发与研究现状,在此重点对mRNA疫苗的分子设计、递送系统、临床研究现状进行了分析和综述,为后续mRNA疫苗的开发和研究提供参考依据。     

信使核糖核酸5′末端帽状结构和功能

信使核糖核酸(mRNA)5′末端帽状结构是病毒mRNA和真核细胞mRNA的重要修饰之一。1974年Reddy在研究Novikoff肝瘤细胞时首先发现细胞核的一种低分子量RNA5′末端具有封闭的帽状结构,其特点是2,2,7-三甲基鸟苷由5′-5′焦磷酸连接于2′-邻甲基腺苷。此后,陆续证实帽状结构存在于多种病毒mRNA和真核细胞mRNA中,并对其结构、功能和合成进行了大量研究。     

非洲爪蟾xenopus laevis卵母细胞中的Vgl mRNA——一种重要的母体RNA

爪蟾Vgl mRNA,为一种由卵母细胞产生并集中分布于成熟卵母细胞植物半球的母体 mRNA,它编码类似于TGF-β的蛋白,受精后,Vgl mRNA分布于胚胎预定内胚层细胞中,它在中胚层的形成中,可能具有一定的作用。     

细菌mRNA的提取方法

mRNA提取技术不仅是分子生物学技术的重要组成部分 ,也是功能基因组学科研技术的重要基础。随着细菌的后基因组时代的到来 ,寻求一种有效的提取细菌mRNA的方法成为迫切需要解决的问题。介绍细菌mRNA的特点、提取方法、标记和稳定性问题。     

拟南芥m6A甲基化组的系统鉴定和功能分析

作为mRNA上最丰富的一种甲基化修饰,N⁶-甲基腺苷(N⁶-methyl-adenosine,m⁶A)广泛存在于酵母以及动植物中。然而多年来由于缺乏有效的技术手段,这些甲基化修饰发生在mRNA的什么位置,以及如何行使其生物学功能,却长时间没有定论。近年来,随着mRNA去甲基酶FTO和ALKBH5的发现,m⁶A被证明是一种动态可逆的甲基化修饰。人们意识到,mRNA上的m⁶A可能和多种生物学功能相关。最近,研究人员利用高通量测序的方法,系统鉴定出人和小鼠mRNA上m⁶A的修饰情况,揭示出这一修饰具有潜在的调控功能。随后,对YTH蛋白家族的研究表明,这类蛋白特异性的结合m⁶A位点,并介导mRNA的降解。     

日本结缕草总RNA提取和mRNA分离方法的优化

介绍了分别以日本结缕草根部、叶部、匍匐茎等为材料的总RNA提取的改良步骤,质量和浓度检测及其注意事项,并采用Promega公司的Poly ATract Systems Ⅲ(Z5300)试剂盒进行mRNA分离,尽管这一方法成熟可行,但仍存在洗脱体积较大,常需先沉淀浓缩后才能进行后续试验(如cDNA合成),在制备少量mRNA时回收率较低等问题。据此,对mRNA分离方法作了改良,介绍了mRNA分离的优化步骤,通过增加体系形成了一种更适合于日本结缕草mRNA分离的方法,从而为日本结缕草的分子生物学研究提供基础资料。结果证明所提取的总RNA和mRNA完整,质量较高,并应用到日本结缕草cD-NA文库的构建。     

用Tip column法分离纯化mRNA

鉴于大多数真核生物的mRNA具有3′端poly(A)的特征,目前,分离mRNA广泛采田oligo(dT)纤维素层析法。尽管这一方法成熟可行,但存在以下问题;流速较慢;柱床易发生堵塞;操作费时;洗脱体积较大。常需先沉淀浓缩后才能进行后续实验(如cDNA合成);在制备少量mRNA时,回收率较低等。据此,我们对mRNA分离方法作了改良,利用oligo(dT)纤维素吸附mRNA容量大的特点,尽可能缩小层析柱床     

基因的转录都必须是连续的吗?

蛋白质的一级结构是由 mRNA 决定的,而 mRNA 是在基因组的一段 DNA 上合成的。通常认为一段连续不断的 DNA 为一分子蛋白质的编码,亦即 mRNA 是直接从这一段 DNA的顺序连接地转录下来的。这段 DNA 就是这个要被翻译出的蛋白质的基因。原核生物方面的实验无疑是支持这种看法的,不过真核生物方面的一些实验结果却很不相同。