一种新的逆转录病毒载体—HIV载体

一种新的逆转录病毒载体——ＨＩＶ载体赖冠华陈诗书（上海第二医科大学人类基因治疗研究中心,上海２０００２５）关键词逆转录病毒载体ＨＩＶ载体逆转录病毒载体具有能有效地将外源基因整合进靶细胞基因组、长期表达外源基因以及病毒包装过程简单的特点,因此成为基因治...     

逆转录病毒及对生物制品污染的安全问题

自80年代发现引起人类淋巴细胞白血病和艾滋病等疾病的病源体都属于逆转录病毒以来,大量文献对逆转录病毒及其逆转录酶的研究进行了报道.随着人们越来越重视生物制品的外来因子污染问题[1],而对于生物制品如疫苗等的生产用动物源细胞基质逆转录病毒的安全检测一直是WHO以及药品监管部门关注的重点.本文就这方面的研究进展作一综述.     

逆转录病毒的复制

逆转录病毒含有由核心蛋白包裹着的(+)RNA基因组。这个球形的核蛋白核心又被宿主质膜衍生的脂双层被膜围绕着,其中含有病毒编码的糖蛋白分子。逆转录病毒粒子的直径约为100nm。     

中国猕猴逆转录病毒的分离

国内首次从捕自中国三个地区的猕猴分离到三株逆转录病毒,经ELISA、免疫荧光检查与SRV-1呈阳性反应。免疫蛋白印迹试验加以证实,血清抗体与SRV-1呈阳性反应,其中有一株与SRV-1和STLV血清抗体有交叉反应。电子显微镜下见有大量病毒颗粒,具有典型逆转录病毒结构。     

逆转录病毒载体用于基因治疗的安全性

有复制能力的逆转录病毒感染,插入突变,无关序列进入靶细胞是基因治疗潜在的危险,但造成实际危害的可能性极小,完善逆转录病毒载体系统的设计,提高检测有复制能力的病毒的灵敏度将进一步保证基因治疗的安全性。     

逆转录病毒及逆转录酶检测方法研究评述

逆转录病毒常被作为载体,用于目的蛋白的表达或目的基因的嵌合。尽管,实验室选用的都是非感染性病毒,但并不能排除这些病毒不会对人类造成伤害。逆转录病毒的监督和检测具有非常重要的意义。逆转录酶活性又是逆转录病毒存在活性的重要标志。因此,本文将有关逆转录病毒及逆转录酶检测的方法做一综述,望对研究者有参考意义。     

逆转录病毒与转基因鸡

摘要：随着生物制药业的迅速发展,转基因鸡输卵管生物反应器正逐渐成为人们关注的焦点,转基因鸡以其卓越的优势必将成为科学研究的热点和生物制药领域的新兴产业之一。目前,转基因鸡最成功的制备方法即逆转录病毒介导法,并已成功制备出表达标记基因的转基因鸡。本文主要综述了逆转录病毒载体制备转基因鸡的优势,逆转录病毒制备转基因鸡的方法和转基因鸡的研究进展,同时也讨论了转基因鸡的意义和存在问题。     

细胞培养物中的逆转录病毒检测

本文用非放射性法测定了K562,SP2/0,L-02,SPC-A-1,SMMC-7721和Hut-102等6个细胞培养液超离心沉淀物逆转录酶的含量,间接证明细胞培养物中逆转录病毒的存在。结果表明,Hut-102细胞为阳性,其它5个细胞系为阴性。     

重组逆转录病毒的制备、浓缩及保存研究

选择含有新霉素磷酸转移酶Ⅱ(Neo^R)的重组逆转录病毒载体,用包装细胞进行包装,得到了含有重组逆转录病毒粒子的病毒上清,该病毒上清经差速离心法浓缩后,－80℃无任何添加物的情况下保存3个月,体外感染靶细胞NIH3T3以测定其滴度,冻存前后的浓缩病毒上清的感染滴度无明显降低,经过冻存的浓缩病毒上清的感染滴度仍可达到10^6cfu/ml,具有理想的感染靶细胞的能力。     

利用微生物及微生物农药杀灭钉螺的初步研究

从洞庭湖血吸虫疫区土壤中分离出两种微生物 :紫红链霉菌Streptomycesviolaceoruber和自养黄色杆菌Xan thobacterautotrophics,将两菌进行培养 ,用稀释 10 0 0倍的培养液杀螺 ,结果表明 :处理 72h后 ,对钉螺的杀螺率分别为90 %、85 % ;BT生物杀虫剂、科诺特杀螟 5 5 %杀苏可性湿粉剂、科诺蔬丹 1.5 %苏阿可湿性粉剂、科诺千胜BT杀虫剂、华戎号 1.5 %甲胺基阿维菌素苯甲酸乳液 ,均稀释 10 0 0倍进行杀螺实验 ,结果发现含阿维菌素的微生物农药杀螺效果较好 (95 %— 10 0 % ) ,华戎号在 4 8— 72h之间其杀螺率均为 10 0 % ,而含BT的微生物农药杀螺效果相对较差(70 %— 95 % )。将微生物农药喷洒土壤进行的杀螺实验。结果表明 ,华戎号的杀螺效果较好 ,处理 4 8h后 ,杀螺率为 10 0 % ,千分之一的五酚钠溶液为对照杀螺剂 ,其杀螺率为 10 0 %。清水对照液的杀螺率为 0 %。     

四川山鹧鸪基因组中内源性逆转录病毒的分析

内源性逆转录病毒(ERV)是插入到宿主基因组中的、可以稳定遗传的病毒基因组,能够在宿主体内表达和复制,调节插入位点附近的基因表达,以及抑制同源病毒的感染。从四川山鹧鸪Arborophila rufipectus基因组中确定了3 962个全长ERV拷贝,其中4个具有完整的结构,72个具有自我复制的能力,554个含有gag、pol或env基因所编码的蛋白质结构域。根据逆转录酶序列的相似性,确定了7个ERV家族,并依据与其他物种的相似性对家族进行了命名。其中,AruERV-L包含122个ERV拷贝,为拷贝数最多的家族。7个ERV家族的年龄分布在0～12百万年,其中AruERV-K1是最年轻的家族,其约86%的拷贝年龄在1百万年以内。     

逆转录病毒载体在血友病A基因治疗中的研究进展

基因治疗是彻底治愈血友病A的最理想方法,逆转录病毒是最为常用的载体之一,本文对逆转录病毒在血友病A基因治疗中的研究进展作一综述。     

EGFP—pBABE逆转录病毒载体的构建及鉴定

目的构建表达增强绿色荧光蛋白（enhancedgreenfluorescentprotein,EGFP）的EGFP—pBABE逆转录病毒载体并对其表达进行鉴定。方法从pEGFP—N3质粒上切下EGFP片段,连接到pBABE载体,构建EGFP—pBABE重组质粒;将该重组质粒转染到Fr67细胞后,荧光显微镜下观察EGFP的表达;收集逆转录病毒感染宫颈癌SiHa细胞后荧光显微镜下观察EGFP的表达。结果成功构建EGFP—pBABE重组质粒。该质粒转染PT67细胞24h后,荧光显微镜下可观察到EGFP的表达;用该重组质粒包装的逆转录病毒感染宫颈癌SiHa细胞36h后,在荧光显微镜下可观察到明显的EGFP表达。结论成功构建表达EGFP的EGFP—pBABE逆转录病毒载体,为进一步利用该载体制备逆转录病毒并观测逆转录病毒感染细胞的效率奠定了良好的实验基础。     

接受高效抗逆转录病毒治疗的 HIV/AIDS患者血浆IL 35及其受体水平的动态变化

目的 检测接受高效抗逆转录病毒治疗(HAART)的人类免疫缺陷病毒(HIV)感染者/艾滋病(AIDS)患者血浆中白介素(IL) 35及其受体IL12rβ2、糖蛋白130(gp130)水平的动态变化及意义。 方法 选择我院2017年1月至2018年3月收治的41例HIV感染者/AIDS患者为研究对象,选择45例同期健康体检者为对照组。分别采集HIV/AIDS患者接受HAART药物0、1、6、12个月时的外周静脉血,检测血浆中的IL 35及其受体IL12rβ2、gp130水平,同时检测血浆HIV 1 RNA载量,分析IL 35与IL12rβ2、gp130、HIV 1 RNA以及IL12rβ2、gp130与HIV 1 RNA病毒载量的相关性。 结果 与对照组相比,接受HAART(0、1、6个月)时患者血浆中IL 35、IL12rβ2、gp130水平降低(均P结论 接受HAART的HIV/AIDS患者血浆IL 35及其受体IL12rβ2、gp130水平随着接受HAART时间的延长而逐渐升高,且与HIV 1 RNA载量关系密切。血浆IL 35及其受体IL12rβ2、gp130在抗HIV感染中可能发挥一定作用。     

基因治疗所用的逆转录病毒载体系统

基因治疗所用的逆转录病毒载体系统徐铿,陈诗书（上海第二医科大学生物化学教研组,２０００２５）关键词基因治疗,逆转录病毒载体,包装细胞八十年代初发展的以逆转录病毒为基础的基因转移系统对今天基因治疗的实现起了关键性的作用。目前近５０个基因治疗计划绝大部分...