数种底物同时存在时的血管紧张素转换酶的酶促反应

数种底物同时存在时的血管紧张素转换酶的酶促反应任维栋（潍坊医学院,山东潍坊２６１０４２）关键词血管紧张素转换酶,底物,动力学方程血管紧张素转换酶（Ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ－ｃｏｎｖｅｒｔｉｎｇｅｎｚｙｍｅ,简称ＡＣＥ）（ＥＣ３,４,１５．１）,又称肽酰...     

猪肺血管紧张素转换酶的提纯

本文报道了猪肺血管紧张素转换酶(ACE)的提纯方法及其鉴定,并讨论了方法的改进。肺匀浆经1.6—2.6mol/L硫酸铵沉淀,Sephadex G-200凝胶过滤,DEAE-Sephaeel及羟基磷灰石柱层析步骤,从168克肺中获得4.5毫克酶蛋白纯品。活力回收45.2％,比活力15.6单位/毫克蛋白;和匀浆上清比较,提纯390倍。经聚丙烯酰胺凝胶电泳(pH8.3)鉴定为一条带。按SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)测得其分子量为132,000道尔顿。酶蛋白在-30℃貯存10月,比活力丢失30％。     

血管紧张素转换酶2-血管紧张素1-7-Mas轴对血管作用的研究进展

血管紧张素转换酶2（ACE2）和Mas受体的发现使人们对肾素-血管紧张素（RAS）有了更全面的认识。ACE2可水解血管紧张素Ⅰ和血管紧张素Ⅱ直接或间接生成血管紧张素1-7（Ang 1-7）,并与高血压的形成密切相关。Ang 1-7主要通过Mas受体引起血管舒张、抑制细胞增殖。ACE2-Ang1-7-Mas轴的发现为RAS的研究、高血压等心血管疾病的防治和新药开发提供了新的思路和方向。     

血管紧张素转换酶2对心脏作用的研究进展

血管紧张素转换酶2作为肾素—血管紧张素系统的新成员,对心脏功能及心脏节律发挥着重要的调节作用。缺乏ACE2会造成心功能的下降,原因可能是心肌慢性缺氧、血管紧张素Ⅱ水平的提高、血管紧张素(1-7)对心脏保护作用的缺失以及其他肽类底物的增加。但同时ACE2的过度表达又会引起心脏传导紊乱和致死性的心律失常。因此,ACE2精确的生理作用有待进一步明确,但调节ACE2的活性可能为心血管疾病的治疗提出了新的思路。本文主要介绍了ACE2的分布与特性,及其对心功能及心脏节律的影响。     

血管紧张素转换酶的克隆及序列分析

根据GenBank上公布的小鼠血管紧张素转换酶(ACE)基因序列,经多重比较设计1对特异性引物,从小鼠Balb/c肺部组织中提取总RNA,进行RT-PCR。产物经纯化回收,克隆到pMD-18T载体,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,检测阳性克隆、测序并进行序列分析。测序结果显示,该片段全长4 023 bp,开放阅读框(ORF)包含3 985 bp,编码1 328个氨基酸,相对分子质量为152.77 kD,等电点6.35。此序列与GenBank已登录的小鼠ACE同源性达99%,差异的5个碱基位于基因的非关键部位,说明小鼠ACE成功克隆。经同源性比较分析,达50%以上相同性的物种有17个,且符合种属之间的进化关系。因此,该序列可于研究物种亲缘关系或遗传距离的理想标记,为下一步研究其在酵母中的表达、生物活性和应用奠定了一定的基础。     

血管紧张素转换酶2的功能和应用

人血管紧张素转换酶2（ACE2）是肾素-血管紧张素系统（RAS）的重要调节分子,它在控制心血管和血压的正常生理活动中具有重要的作用。此外,ACE2作为SARS病毒的受体,对于病毒的入侵起关键作用。目前ACE2已经被用于高血压和心血管相关疾病的药物靶标设计和基因治疗,随着研究的深入,ACE2在临床上的应用将更加广泛。     

血管紧张素转换酶纯化与性质研究

为了深入了解猪肺血管紧张素转换酶 (angiotensin converting enzyme,ACE)的性质和功能 ,对猪肺 ACE的分离纯化以及部分酶学性质进行了研究 .猪肺组织匀浆经 1 .6～ 2 .6mol/L硫酸铵分级沉淀等步骤后 ,利用亲和胶进行亲和层析分离 .2 0 0 g猪肺组织中提纯出 0 .79mg ACE,比活力 38.8U/mg,SDS- PAGE电泳鉴定为一条带 ,分子量约 1 80 k D,等电点 (p I)为 p H4.5,糖含量约 2 3.6% ,氨基酸组成分析发现猪肺 ACE分子中含有 1 346个氨基酸 ,其中酸性氨基酸含量较高 ,碘乙酸的修饰结果表明猪肺 ACE中巯基基团未参与酶的催化反应 .酶反应动力学结果显示 ,ACE催化 Fa PGG底物反应时的最适 p H大约为 p H 7.6,反应活化能 Ea=4.37× 1 0 4 J/mol,酶活性部位附近的组氨酸和具有类似 α-氨基性质的氨基酸可能参与了 ACE催化反应 .有关猪肺 ACE的基本生化性质、氨基酸组成以及酶学性质的结果 ,为今后深入研究奠定了基础 .     

血管紧张素转换酶2在心血管疾病中的调控作用

血管紧张素转换酶2(angiotensin-converting enzyme 2,ACE2)是肾素-血管紧张素系统(renin-angio-tensin system,RAS)的重要成员,广泛分布于肺、心血管系统、肠道、肾脏、中枢神经系统和脂肪组织中.ACE2具有多种生理功能,在防止高血压、动脉粥样硬化、心力衰竭、肺...     

作为肾素-血管紧张素系统调节器和SARS病毒受体的人血管紧张素转换酶2

人血管紧张素转换酶2(ACE2)是目前已知的惟一的人血管紧张素转换酶(ACE)的同源物,是一种新型的金属羧肽酶,很多特性与ACE截然不同.ACE2在肾素-血管紧张素系统(RAS)中具有独特的作用,调节心脏功能和机体血压.最近ACE2被鉴定为SARS病毒的功能受体.ACE2已经成为目前药物研发的新靶点.对ACE2的认识才刚刚开始,有待进-步深入研究.     

从米糠中提取降血管紧张素转换酶抑制剂

采用盐析法提取米糠蛋白,分别选用胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶等单独或联合水解米糠蛋白,以从酶解米糠蛋白中分离获得具有血管紧张素转换酶（ACE）抑制活性的短肽组分。经Sephadex G-15凝胶层析和SP—Sephadex C-25离子交换层析分离各酶解组分,并检测各组分的ACE抑制活性。结果表明,米糠蛋白的酶解分离产物中含有较强ACE抑制活性的组分,其中经胃蛋白酶和胰蛋白酶共同水解时得到的小分子量寡肽组分的抑制活性最强,为后续对其进行结构分析奠定了基础。     

亲和层析法分离纯化猪肺血管紧张素转换酶

亲和胶合成实验以双环氧化合物1,4-丁二醇-2-缩水甘油醚(1,4-butanediol diglycidyl ether)为活化体及连接臂,在硼氢化钠(NaBH)存在的碱性条件下,将载体Sepharose CL―4B与雷诺普利(lisinopril)共价连接在一起,成功合成亲和层析胶,并利用亲和层析胶对猪肺血管紧张素转换酶（angiotensin converting enzyme, ACE）进行分离提纯.猪肺组织匀浆经1.6～2.6 mol/L硫酸铵分级沉淀、透析平衡、亲和柱分离等步骤,从200 g猪肺中提纯得到0.79 mg ACE蛋白,酶活力回收11.9％,比活力38.8 U/mg.与层析前的酶液比较,亲和层析一步提纯可达264倍;与肺匀浆液比较提纯达808倍.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳可见,提纯的猪肺ACE为一条带,分子质量约为180 ku.     

汉族人群中血管紧张素转换酶抑制剂所致咳嗽与血管紧张素转换酶基因及缓激肽β2受体基因多态性的关系

目的:探讨汉族人群中血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)所致咳嗽与血管紧张素转换酶(ACE)基因及缓激肽β2受体(BDK-RB2)基因多态性的关系。方法:应用聚合酶链反应(PCR)方法,检测汉族人群中151例由于服用ACEI引起的咳嗽患者及151例未发生咳嗽的患者的ACE I/D及BDKRB2 C/T的多态性,并采用紫外法检测ACE活性。结果:发现ACE基因分布在咳嗽组中II型为47.0%,ID型为42.4%,DD型为10.6%;无咳嗽组分别为39.7%、47.0%、13.3%,两组相比其差异具有统计学意义(P<0.01);BDKRB2基因分布在咳嗽组中CC型为21.3%,CT型为50.0%,TT型为28.7%,无咳嗽组分别为22.5%、47.7%、29.8%,两组相比其差异无统计学意义(P>0.05);咳嗽组ACE活性水平为([28.3±10.1)U/L]明显低于无咳嗽组([40.2±9.4)U/L],两组相比其差异具有统计学意义(P<0.01)。结论:汉族人群中ACEI所致咳嗽与ACE基因多态性及血清ACE水平有关,BDKRB2 C/T与咳嗽间未发现有统计学意义的关联。     

汉族人群中血管紧张素转换酶抑制剂所致咳嗽与血管紧张素转换酶基因及缓激肽β2受体基因多态性的关系冰

目的：探讨汉族人群中血管紧张素转换酶抑制剂（ACEI）所致咳嗽与血管紧张素转换酶（ACE）基因及缓激肽β2受体（BDK-RB2）基因多态性的关系。方法：应用聚合酶链反应（PCR）方法。检测汉族人群中151例由于服用ACEI引起的咳嗽患者及151例未发生咳嗽的患者的ACEI／D及BDKRB2C／T的多态性,并采用紫外法检测ACE活性。结果：发现ACE基因分布在咳嗽组中II型为47．0％,ID型为42．4％,DD型为10．6％;无咳嗽组分别为39．7％、47．0％、13.3％,两组相比其差异具有统计学意义（P〈0．01）;BDKRB2基因分布在咳嗽组中CC型为21．3％,CT型为50．0％,TT型为28．7％,无咳嗽组分别为22．5％、47．7％、29．8％。两组相比其差异无统计学意义（P〉0．05）;咳嗽组ACE活性水平为[（28．3±10．1）U／L]明显低于无咳嗽组[（40．2±9．4）U／L],两组相比其差异具有统计学意义（P〈0．01）。结论：汉族人群中ACEI所致咳嗽与ACE基因多态性及血清ACE水平有关,BDKRB2C／T与咳嗽间未发现有统计学意义的关联。     

猪骨胶原蛋白酶解物中血管紧张素转换酶抑制剂的提纯

将猪骨胶原蛋白粗提物用胰蛋白酶水解,经阳离子交换树脂层析,Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－２５柱凝胶过滤,以及数次反相高效液相层析,最终获得一具有抑制血管紧张素转换酶活性的单一峰值的多肽。     

具有血管紧张素转化酶抑制活性益生菌筛选的研究

经体外血管紧张素转换酶（ACE）抑制活性实验,从保存的40株菌中筛选到7株具有降压活性的益生菌,其中菌株DM8319粗提样品经初步凝胶层析纯化后其IC50值从0．038mg／ml降到0．016mg／ml,达到了初步分离效果。后依据益生菌筛选标准,对上述菌株抗氧化性、耐酸、耐胆盐、抑菌和耐药性能进行考察。结果显示,菌株DM84013最适用于益生菌降压产品的研究,经初步鉴定该菌种为长双歧杆菌。     

内蒙古地区达斡尔族血管紧张素转换酶基因多态性分布

目的:研究内蒙古地区达斡尔族血管紧张素转换酶基因(ACE)多态性分布。方法:采用聚合酶链反应检测198例北方汉族和198例达斡尔族中血管紧张素转换酶基因插入/缺失(I/D)多态性分布。结果:ACE基因多态性,达斡尔族人群ID、DD基因频率高于北方汉族,II基因频率低于北方汉族,二组间比较均存在明显差异(P<0.05)。结论:北方汉族与达斡尔族间ACE基因多态性和等位基因频率分布存在差异。     

肾素—血管紧张素系统——应激激素反应系统

各种急性与慢性庆激时,循环血中及脑、心血管、肾上腺等组织中血管紧张素Ⅱ（ＡⅡ）显著增多;人剧烈运动后血浆ＡⅡ与皮质醇一样均剧烈增加,在慢性应激性高血压动物循环及组织中,ＡⅡ含量持续地增高。还发现高浓度ＡⅡ对肾上腺糖皮质激素的分泌有直接的刺激作用,而组织ＡⅡ含量增多又受肾上腺素能β受体的激发。根据近年来的系列工作,并结合文献,我们认为ＡⅡ是一种重要的应激激素;肾素－血管紧张素系统是一个应激激素反应系     

肾素是酶血管紧张素是激素

肾素是酶血管紧张素是激素潘敬运（广州中山医科大学生理学教研室,广州５１００８９）编者按姜德才同志提出的“肾素是酶不是激素”的问题值得阐明。为此,我们邀请全国统编《生理学》第四版肾脏一章的编写人潘敬运教授对此问题作一答复。《生理科学进展》编辑部来函要我...     

血清中血管紧张素转换酶活性测定与临床应用

1　试剂和材料电泳缓冲液 :2 0ｍｍｏｌ/ＬｐＨ 9 0硼酸 硼酸盐溶液 (含5 0ｍｍｏｌ/ＬＳＤＳ) .底物反应液 :8 7ｍｍｏｌ/Ｌ马尿酸 组氨酸 亮氨酸溶液(ＨＨＬ ,Ｓｉｇｍａ公司 .以含 5 0 0ｍｍｏｌ/ＬＮａＣｌ、 10 0ｍｍｏｌ/ＬｐＨ 8 3硼酸 硼酸盐溶液溶解ＨＨＬ) .马尿酸标准液 :3 0ｍｍｏｌ/Ｌ (Ｈｉｐ ,Ｓｉｇｍａ公司 .以蒸馏水溶解Ｈｉｐ) .病人血清 .2　仪器Ｐ/ＡＣＥ5 0 10毛细管电泳仪 (Ｂｅｃｋｍａｎ公司 ) ,石英毛细管 75 μｍ× 37ｃｍ ,ｐＨＳ 3Ｃ酸度计 ,电热恒温水箱 .3　实验方法压力进样 3Ｓ ,电压 16ｋＶ ,电泳时间…     

猪骨胶原蛋白酶解物中血管紧张素转换酶抑制剂的提纯

将猪骨胶原蛋白粗提物用胰蛋白酶水解,经阳离子交换树脂层析,ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２５柱凝胶过滤,以及数次反相高效液相层析,最终获得一具有抑制血管紧张素转换酶（ＡＣＥ）活性的单一峰值的多肽。其氨基酸组成为Ｉｌｅ,Ｈｉｓ,Ｓｅｒ,Ｇｌｙ,Ａｌａ,Ｐｒｏ,Ｔｙｒ,Ｌｅｕ,Ａｓｐ．以Ｈｉｐ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ为底物,在ｐＨ为７．１的条件下,此肽对猪肺ＡＣＥ的Ｉ＿（５０）值为２６μｍｏｌ／Ｌ。