人红细胞NADH－细胞色素b5还原酶的分离纯化与鉴定

 人红细胞ＮＡＤＨ－细胞色素ｂ５还原酶的分离纯化与鉴定黄长晖,朱忠勇,唐玉钗（南京军区福州总院全军医学检验中心实验科,福州３５０００１）ＮＡＤＨ细胞色素ｂ５还原酶（Ｃｙｔｂ５Ｒ,Ｅ．Ｃ．１．６．２．２．）是红细胞内催化高铁血红蛋白还原为血红蛋白的关键酶...     

膜上斑点洁显示人红细胞b_5还原酶活性

人红细胞ＮＡＤＨ－细胞色素ｂ５还原酶是使高铁血红蛋白还原的主要酶类,其缺陷将导致遗传性高铁血红蛋白血症．目前,主要通过分光光度法测定ｂ５还原酶活性．我们将ｂ５还原酶抗体点于硝酸纤维膜上,以此捕获并富集红细胞胞浆ｂ５还原酶．有ｂ５还原酶活性的斑点用噻唑蓝染色．此法简单直观,可用于ｂ５还原酶的定性和半定量测定,为遗传性高铁血红蛋白血症的诊断提供了一种新的实验手段．     

硝基水杨酰胺抑制泛醌-细胞色素c还原酶的作用对氢醌的敏感性

泛醌－细胞色素ｃ还原酶（ＱＣＲ）是线粒体呼吸链的三个能量偶联部位之一,它起着将电子从还原型泛醌传递给细胞色素ｃ（Ｃｙｔ．ｃ）的作用,根据Ｋｉｎｇ和Ｙｕ提出的泛醌结合蛋白理论［１］,泛醌－细胞色素ｃ还原酶中含有泛醌结合蛋白ＱＰｃ．研究表明,泛醌－细胞色...     

氧化磷酸化中质子的转运机制介绍和讨论

氧化磷酸化过程中电子传递和磷酸化所伴随的质子（H＋）跨线粒体内膜转运,是生物化学教学中的一个重点和难点。该文介绍参与H＋跨膜（线粒体内膜或细菌质膜）转运的复合体Ⅰ（又称为NADH-Q还原酶或NADH脱氢酶）、复合体Ⅲ（又称为细胞色素还原酶或细胞色素bc1复合体）、复合体Ⅳ（又称为细胞色素氧化酶或细胞色素c氧化酶）和复合体Ⅴ（又称为F1F0-ATP合酶）跨膜转运H＋的机制。     

真菌一氧化氮还原酶细胞色素P—450nor 2 cDNA序列的测定

真菌一氧化氮还原酶细胞色素Ｐ４５０ｎｏｒ２ｃＤＮＡ序列的测定刘德立（华中师范大学生命科学学院武汉４３００７０）ＨｉｒｏｆｕｍｉＳＨＯＵＮ（筑波大学应用生物化学系日本）在真菌的反硝化作用中,一种细胞色素Ｐ４５０起着一氧化氮还原酶的作用,被称为细胞色...     

一枚恐龙蛋内细胞色素b基因片段的序列分析

用一对根据人线粒体细胞色素ｂ基因保守区序列设计的引物,以一枚恐龙蛋内ＤＮＡ为模板,在ＰＣＲ上扩增出大约１７０ｂｐ的基因片段。序列测定后经ＩＮＴＥＲＮＥＴ联网的ＢＬＡＳＴ数据库类似性检索,结果表明,该序列与人类线粒体细胞色素ｂ基因的序列完全相同（９６－１００％相似）。因此,可以肯定实验材料本身有严重污染。     

脂对泛醌细胞色素c还原酶的影响

用羟基磷灰石柱亲和层析法制备了高纯度的缺脂泛醌细胞色素c还原酶．脂的缺失使该酶活力丢失,部分细胞色素（约52.8％细胞色素b和82.5％细胞色素c₁）呈现还原状态．将缺脂泛醌细胞色素。还原酶与磷脂重组,可恢复其活性,同时那些呈还原状态的细胞色素也恢复到氧化态.此结果表明如此制备的缺脂泛醌细胞色素c还原酶仍保持着活力所必需的构象状态,细胞色素氧化还原状态随脂缺失的变化反映了脂与蛋白的相互作用.     

催乳素对大鼠前腺上皮细胞内雄激素受体和5a—还原酶活性…

一实验建立了无血清培养的大鼠前列腺上皮细胞内雄激素受体（ＡＲ）的测定方法,并研究究了催乳素（ＰＲＬ０对细胞ＡＲ数量和５ａ－还原酶活性的影响。结果表明：ＰＲＬ使前列腺上皮细胞内ＡＲ数量显著增加,其中１０ｎｇ／ｍｌＰＲＬ的作用最强,但高剂量的ＰＲＬ则失去对ＡＲ的刺激作用。ＰＲＬ还能拮抗雄引起的其自身受体的下调作用,使受体的数量回升至对照组水平。对５ａ－还原酶的催化产物双氢睾酮（ＤＨＴ）的测定结果显示Ｐ     

巯基修饰对中华仓鼠二氢叶酸还原酶的激活

脊椎动物二氢叶酸还原酶（ＤＨＦＲ,Ｅ．Ｃ．１．５．１．３）可被多种因素激活,如中性无机盐［１］、蛋白质变性剂［１～４］、巯基修饰剂［１,４～７］等．来源于鸡肝［５］、猪肝［６］、鼠肝［７］及鼠Ｌ１２１０细胞［４］二氢叶酸还原酶的巯基修饰激活已有报道．...     

氰戊菊酯和苯巴比妥钠对敏感和抗性棉铃虫中肠多功能氧化酶系的诱导作用

用苯巴比妥钠（2mg/g）和氰戊菊酯（0.2mg/g）拌饲料处理,对敏感品系棉铃虫Helicoverpa armigera中肠的细胞色素P450和细胞色素c还原酶含量均具有明显的诱导作用（两者都使细胞色素P450含量提高了2.24倍,使细胞色素c还原酶的含量分别提高1.33和1.40倍）,但对细胞色素b5诱导作用不显著（仅为对照的1.23和1.15倍）;此外,苯巴比妥钠对敏感棉铃虫中肠的艾氏剂环氧化酶活性和甲氧试卤灵-O-脱甲基酶活性也有显著的诱导作用（分别提高了2.75和2.66倍）,但对7-乙氧香豆素-O-脱乙基酶活性没有诱导作用,而氰戊菊酯对敏感棉铃虫中肠的艾氏剂环氧化酶活性则有2.02倍的诱导作用。同一浓度的苯巴比妥钠和氰戊菊酯使抗性品系棉铃虫中肠的细胞色素P450含量分别提高1.21和1.15倍,使细胞色素c还原酶含量分别提高1.48和1.86倍（差异显著）,但是细胞色素b₅含量没有明显变化（分别为对照的1.15和0.98倍）;此外,氰戊菊酯能使抗性棉铃虫中肠的艾氏剂环氧化酶活性提高1.53倍,但苯巴比妥钠对该酶活性则有明显抑制作用。     

脓青素促进叶绿体中细胞色素b－559的光还原

当脓青素存在时，可以观察到菠菜叶绿体中光诱导的５５９ｎｍ吸收增加。此反应可以被光（波长６５０ｎｍ）诱导，但远红光（波长７２０ｎｍ）则无作用．光暗差示光谱表明被还原的物质为细胞色素ｂ－５５９。脓青素的作用在１μｍｏｌ／Ｌ接近饱和．并且其作用与跨膜质子梯度无关．脓青素所促进的细胞色素ｂ－５５９光还原被抑制剂ＤＣＭＵ和ＤＢＭＩＢ所抑制，但在氰化钾处理过的叶绿体中，脓青素依然促进细胞色素ｂ－５５９的光还原．在ＣＣＣＰ处理的叶绿体中，可以看到低光强红光诱导的细胞色素ｂ－５５９氧化。脓青素可以逆转ＣＣＣＰ的作用；促进细胞色素ｂ－５５９在高光强或低光强下都为红光还原。我们推测脓青素通过质子化作用，影响了细胞色素ｂ－５５９的光氧化还原反应．     

膜脂对菠菜细胞色素b6f复合体电子传递活性的影响

利用从菠菜（Ｓｐｉｎａｃｉａ ｏｌｅｒａｃｅａ Ｌ．）叶绿体分离、纯化出的缺失膜脂的细胞色素ｂ６ｆ蛋白复合体（Ｃｙｔ ｂ６ｆ）制剂与从菠菜类囊体分离、纯化的膜脂进行体外重组,检测了不同膜脂对Ｃｙｔ ｂ６ｆ催化电子传递活性的影响。结果表明：被检测的５种膜脂,即单半乳糖基甘油二酯（ＭＧＤＧ）、双半乳糖基甘油二酯（ＤＧＤＧ）、磷脂酰胆碱（ＰＣ）、磷脂酰甘油（ＰＧ）和硫代异鼠李糖基甘油二酯（ＳＱＤＧ）对Ｃ     

催乳素对大鼠前列腺上皮细胞内雄激素受体和5α－还原酶活性的影响

本实验建立了无血清培养的大鼠前列腺上皮细胞内雄激素受体（ＡＲ）的测定方法,并研究了催乳素（ＰＲＬ）对细胞内ＡＲ数量和５α－还原酶活性的影响。结果表明：ＰＲＬ使前列腺上皮细胞内ＡＲ数量显著增加,其中１０ｎｇ／ｍｌＰＲＬ的作用最强,但高剂量的ＰＲＬ则失去对ＡＲ的刺激作用。ＰＲＬ还能拮抗雄激素引起的其自身受体的下调作用,使受体的数量回升至对照组水平。对５α－还原酶的催化产物双氢睾酮（ＤＨＴ）的测定结果显示ＰＲＬ对ＤＨＴ的产生无明显影响,提示ＰＲＬ对５α－还原酶的活性无显著影响。     

细胞凋亡过程中bcl-2基因的甲基化

为探讨凋亡过程中,ｂｃｌ－２基因下调与该基因甲基化状态的关系,用５－氟尿嘧啶（５－Ｆｕ）诱导小鼠成纤维细胞ＮＣ３Ｈ１０,ＴＣ３Ｈ１０及人乳腺癌细胞ＭＣＦ－７的凋亡,分别检测了这三种细胞凋亡过程中ｂｃｌ－２的表达变化,与其调控区及编码区的甲基化状况．我们曾观察到５－Ｆｕ作用２４～４８ｈ出现细胞存活率下降,ＤＮＡ梯状断裂及细胞周期凋亡峰显现等典型凋亡现象．Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交显示,在５－Ｆｕ作用１２ｈ时ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ水平已明显降低．由此,我们用小鼠ｂｃｌ－２（ｍｂｃｌ－２）及人ｂｃｌ－２（ｈｂｃｌ－２）基因调控区ＰＣＲ扩增片段及ｂｃｌ－２编码区（ｃＤＮＡ）片段作为探针,与５－Ｆｕ作用１２ｈ的细胞ＤＮＡ的ＭｓｐⅠ／ＨｐａⅡ酶切产物进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交,以未作用的细胞ＤＮＡ同样酶切杂交为对照．通过杂交带谱的变化,分析ｂｃｌ－２基因的甲基化状况．结果显示：ｍｂｃｌ－２及ｈｂｃｌ－２在５－Ｆｕ作用１２ｈ后调控区甲基化水平增高,但其编码区甲基化状态皆未出现可检出的变化．上述结果提示：ｂｃｌ－２基因调控区甲基化水平升高可能与该基因下调有关     

流感嗜血杆菌b型(Hib)分型血清研制

流感嗜血杆菌ｂ型（Ｈｉｂ）分型血清研制王秉翔虞雪梅亢叶子牛永桂（卫生部兰州生物制品研究所,兰州７３００４６）分类号Ｒ３７４．１３流感嗜血杆菌ｂ型（Ｈｉｂ）是引起２岁以下婴幼儿脑膜炎,以及肺炎、咽峡炎、中耳炎等的主要病原,其脑膜炎的病死率（５～９０％）...     

猪肝微粒体NADH—细胞色素b5还原酶的纯化及特性分析

采用硫酸铵分级分离,Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００凝胶过滤,ＤＥＡＥ－纤维素离子交换层析以及５＇－ＡＭＰ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４Ｂ亲和层析,从猪肝微粒体中纯化得到可溶性的ＮＡＤＨ－细胞色素ｂ５还原酶,提纯倍数为７５０－８００。总回收率为４０％左右。纯化的酶呈典型的黄素蛋白吸收光谱,Ａ２７３／Ａ４６０比值为５．８．在ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳板上呈单一的蛋白质区带,分子量为３２ｋｄ。ＮＡＤＨ和２,６－     

高山被孢霉ATCC 32222中细胞色素b5还原酶I的克隆、表达和功能鉴定

【目的】鉴定产油微生物高山被孢霉ATCC 32222中细胞色素b_5还原酶Ⅰ的功能。【方法】将高山被孢霉ATCC 32222中膜结合细胞色素b_5还原酶Ⅰ基因与人可溶性细胞色素b_5还原酶基因序列比对,去除该基因N端穿膜区域后,与人可溶性细胞色素b_5基因分别在大肠杆菌中异源表达;通过钴离子亲和层析、离子交换和分子排阻色谱等方法对表达产物进行纯化;以2,6-二氯靛酚钠(DCIP)为底物,测定细胞色素b_5还原酶Ⅰ的体外活性及其对NADH和NADPH的偏好性;在反应体系中存在NADH时,通过全波长扫描方法检测细胞色素b_5还原酶Ⅰ与细胞色素b_5的相互作用。【结果】高山被孢霉ATCC 32222中膜结合细胞色素b_5还原酶Ⅰ被成功可溶表达,经纯化后检测到体外活性:使用NADH时酶活为564.57 U,使用NADPH时为51.97 U;在NADH存在时,细胞色素b_5还原酶Ⅰ能够还原细胞色素b_5,其吸收峰从411 nm偏移至422 nm,并在521 nm和554 nm处吸光值增加。【结论】细胞色素b_5还原酶Ⅰ N端穿膜区域的去除增加了其可溶性,并保持了蛋白质活性;高山被孢霉ATCC 32222中细胞色素b_5还原酶Ⅰ基因编码的是一种NADH-细胞色素b_5还原酶,其在体外能与细胞色素b_5相互作用。     

闭锁繁育乌骨鸡群体的RAPD指纹分析

随机抽样测定了一个长期闭锁繁育和一个开放繁育雪峰乌骨鸡群体的早期生长和成活率,并藉ＲＡＰＤ分析比较了２个乌骨鸡群体的遗传学特征,结果表明：闭锁繁育群体ＲＡＰＤ标记的平均共带系数和平均带纹频率显著高于开放群体．标记效应估计结果表明随机引物Ｓ１０２扩增的ｂ４（１８２０ｂｐ）和ｂ５（１９３０ｂｐ）片段和Ｓ１０５扩增的ｂ９（１８４９ｂｐ）和ｂ１０（４１０４ｂｐ）片段作为遗传标记对于体重（尤其是３５日龄和７０日龄体重）具有很高的负向相关效应,因此,该４个ＲＡＰＤ标记可以作为近交衰退候选指示标记加以深入研究,最终结论有待于在大样本、多群体、多世代资料中验证．     

脑组织类固醇5α—还原酶的研究进展

脑组织类固醇５α┐还原酶的研究进展郭华北陈惠黎（上海医科大学生化教研室,上海２０００３２）关键词脑组织类固醇５α－还原酶脑组织中广泛分布类固醇５α－还原酶（ＥＣ１．３．９９．５）,与分布在依赖雄激素的组织（如前列腺）中的５α－还原酶不同,脑５α－还原...     

比克氏棉渐渗到陆地棉的花色基因的遗传分析

比克氏棉的红花大基斑性状渐渗到陆地棉,并选育出了稳定的红花大基斑陆地棉纯系（ＨＢＲＬ）。报道了这些红花（Ｒ~（ｂｉｃ）_３）大基斑（Ｒ~（ｂｉｃ）_２）陆地棉纯系的遗传连锁实验和连锁分析结果。大基斑（Ｒ~（ｂｉｃ）_２）对小基斑（Ｒ_２）和无基斑（ｒ_２）为显性,Ｒ~（ｂｉｃ）_２与Ｒ_２等位,Ｒ~（ｂｉｃ）_２、Ｒ_２和ｒ_２构成了复等位基因系列。Ｒ~（ｂｉｃ）_２与Ｌｃ_１连锁,Ｒ．Ｃ％＝３７．３１±２．４４．Ｒ~（ｂｉｃ）_２与Ｒ~（ｂｉｃ）_３紧密连锁,并且Ｒ~（ｂｉｃ）_３对Ｙ_１和ｙ_１具有显性上位作用。建议从比克氏棉渐渗到陆地棉的大基斑的基因符号定为Ｒ~（ｂｉｃ）_２,红花瓣的基因符号定为Ｒ~（ｂｉｃ）_３。