流感病毒与细胞凋亡

流感病毒与细胞凋亡的相关研究近年来一直是流感研究的热点,流感病毒可使MDCK细胞,呼吸道细支气管细胞,淋巴细胞以及绒毛膜细胞和胎膜细胞发生凋亡,弄清楚流感病毒与细胞凋亡相互间的关系无疑对流感病毒的致病机制及抗感染免疫的研究有着积极的促进作用,本文仅对近几年来,流感病毒与MDCK细胞以及其它相关细胞的凋亡情况或关系的研究作一综述。     

人外周血T淋巴细胞凋亡与胀亡研究及氨茶碱的诱导作用

目的:在前期研究的基础上进一步观察氨茶碱对人外周血T淋巴细胞凋亡与胀亡的诱导作用。方法:密度梯度离心法及尼龙棉柱法分离健康成年人外周血T淋巴细胞,分空白组及氨茶碱组,培养后观察细胞光镜及电镜形态学、FDA/PI荧光染色,并用流式细胞仪检测凋亡和胀亡细胞比例变化。结果:①人外周血T淋巴细胞经体外培养,可自然出现典型的细胞凋亡与胀亡形态学改变。②人外周血T淋巴细胞在氨茶碱诱导作用下,凋亡率有显著增高,但胀亡率相对无显著增高。结论:人外周血T淋巴细胞存在凋亡与胀亡现象,氨茶碱可诱导人外周血T淋巴细胞凋亡,但不能有效的诱导健康人外周血T淋巴细胞胀亡。     

人外周血T淋巴细胞凋亡与胀亡研究及地塞米松的诱导作用

目的:观察分离培养的人外周血T淋巴细胞的调亡与胀亡.方法:密度梯度离心法及尼龙棉柱法分离健康成年人外周血T淋巴细胞,分空白组及地塞米松(DXM)组,培养后观察细胞光镜及电镜形态学、FDA/P1荧光染色,并用流式细胞仪检测凋亡和胀亡细胞比例变化.结果:①人外周血T淋巴细胞经体外培养,可自然出现典型的细胞凋亡与胀亡形态学改变.②人外周血T淋巴细胞在地塞米松诱导作用下,凋亡率与胀亡率皆有显著增高.③随着培养时间的增加人T淋巴细胞凋亡与胀亡率亦有升高.结论:人外周血T淋巴细胞存在凋亡与胀亡现象,DXM可诱导人外周血T淋巴细胞凋亡与胀亡.     

T、B淋巴细胞的凋亡及其与疾病的关系

细胞凋亡是免疫系统的一个重要的事件,它凋控着淋巴细胞的成熟、受体组分的选择及内环境的稳定。其中T、B淋巴细胞在各自的发育过程中都发生大量的细胞凋亡。Fas/FasL信号途径、NoTCH信号途径是免疫系统细胞凋亡的两条最主要的途径。此外,一些共刺激分子（如CD40）在T、B淋巴细胞存活及凋亡的选择上也发挥着重要作用。凋亡同细胞的生长、分化一样,对免疫细胞发挥正常功能是必不可少的。因此,免疫系统细胞凋亡的脱轨势必会给机体带来严重的影响,导致一系列相关疾病的发生。     

高原低氧免疫损伤及其干预措施的研究

目的:探讨高原低氧损伤免疫系统的特征及其可能机制,研究高原低氧免疫损伤的干预措施。方法:测定低氧暴露不同时间小鼠免疫器官指数、外周血和免疫器官T淋巴细胞亚群的变化;观察小鼠免疫器官淋巴细胞凋亡率及小鼠肺脏和肾脏病理学改变。采用预防给药方式,研究中药组方对低氧免疫损伤小鼠的干预作用。结果:①模拟海拔8000m低氧暴露8h后,小鼠胸腺CD4+CD8+细胞数显著下降,CD4+CD8-、CD4-CD8+细胞数显著增加(P0.01);低氧暴露3d后,外周血CD4+细胞明显减少(P0.05),CD4+/CD8+比值显著降低(P0.05),胸腺CD4+CD8+细胞数进一步下降,CD4+CD8-、CD4-CD8+细胞数进一步增加,小鼠脾脏、胸腺淋巴细胞晚期凋亡和坏死率均显著增加(P0.05);低氧暴露6d后,小鼠脾指数显著性增加(P0.01);胸腺指数显著性降低(P0.01),脾CD4+、CD8+细胞数显著降低(P0.01),脾脏和胸腺淋巴细胞晚期凋亡率和坏死率进一步增加(P0.01),活细胞率显著降低(P0.01),脾脏淋巴细胞早期凋亡率显著增加(P0.01)。整个低氧暴露过程中外周血CD8+无显著性变化。②新复方党参、香杞多糖、二者联合应用均能显著增加低氧免疫损伤小鼠外周血CD3+、CD4+、脾脏CD4+的细胞水平(P0.01,P0.05),对脾脏CD8+细胞水平没有显著影响。香杞多糖及其与新复方党参联合应用均能进一步降低胸腺CD4+CD8+,进一步增加CD4+CD8-的细胞水平(P0.01),未见对CD4-CD8+细胞水平的影响;新复方党参对低氧免疫损伤小鼠胸腺没有显著性影响。结论:模拟海拔8000m低氧暴露后小鼠外周发挥免疫作用的淋巴细胞数减少可能与低氧暴露早期淋巴细胞凋亡率和坏死率增加和肺脏淋巴细胞分布增多有关。新复方党参和香杞多糖作为低氧免疫损伤干预措施,具有一定发展前景。     

Fas与FasL的分子及细胞生物学研究进展

Ｆａｓ是Ｉ型膜蛋白,属ＴＮＦ受体家庭成员,许多细胞表达Ｆａｓ。而Ｆａｓ配体（ＦａｓＬ）只在激活Ｔ淋巴细胞表达,是Ⅱ型膜蛋白,属ＴＮＦ家庭成员,当ＦａｓＬ与Ｆａｓ结合时,Ｆａｓ可向细胞传递“死亡信号”,细胞在数小时内凋亡,Ｆａｓ－ＦａｓＬ介导的细胞凋亡在免疫调失及免疫病理中,可能有重要作用。     

猪圆环病毒2型通过外泌体miR-125a-5p靶向Bcl-2诱导淋巴细胞凋亡

为研究miR-125a-5p在猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)诱导淋巴细胞凋亡中的作用及其作用机制,以PCV2感染PK-15细胞外泌体孵育的淋巴细胞为研究对象,采用流式细胞术、蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)和实时荧光定量PCR,检测淋巴细胞凋亡率及凋亡相关miRNA表达;合成miR-125a-5p模拟物和抑制物转染PK-15细胞,检测miR-125a-5p过表达或抑制表达后细胞凋亡率;采用生物信息学方法预测miR-125a-5p的靶基因,双荧光素酶报告基因检测miR-125a-5p对靶基因的调控;Western blotting检测外泌体孵育淋巴细胞的线粒体凋亡信号通路相关蛋白Bcl-2、Bax、细胞色素C和caspase-3的表达。结果显示,感染PCV2的PK-15细胞分泌的外泌体极显著提高淋巴细胞凋亡率,在一定浓度范围内呈剂量依赖性;与PCV2诱导细胞凋亡相关的miRNA中,miR-125a-5p表达量极显著升高,miR-125a-5p模拟物转染细胞后极显著提高细胞凋亡率;利用TargetScan预测发现,miR-125a-5p与Bcl-2 3''UTR区有结合位点,miR-125a-5p模拟物极显著抑制pmir-Bcl-2 3''UTR-WT荧光素酶活性,对pmir-Bcl-2 3''UTR-MuT的荧光素酶活性无明显改变;外泌体孵育的淋巴细胞Bcl-2表达量显著降低,Bax、细胞色素C的释放和caspase-3表达量显著升高,Bcl-2/Bax的比值极显著降低。这表明,PCV2通过外泌体诱导淋巴细胞上调miR-125a-5p的表达,进而抑制Bcl-2 mRNA和蛋白表达,激活淋巴细胞线粒体凋亡通路诱导细胞凋亡。     

与CD95相关的细胞凋亡和免疫调节

细胞凋亡是一个十分复杂的过程,就目前研究结果来看,CD95系统的调控起到了很重要的作用。它与免疫杀伤、肿瘤免疫和自身免疫疾病密切相关。CD95系统不仅能够维持免疫系统的自身稳定,同时也能发挥免疫反应的作用。在特异性的细胞毒效应作用中,CD95通路是细胞毒性T淋巴细胞（CTL）杀伤靶细胞的一种方式;CD95通路在肿瘤中的失效使之逃避免疫监视和削弱免疫反应;活化的T细胞和B细胞增殖后所出现的细胞凋亡,主要是通过CD95／CD95L诱导的凋亡途径产生。一旦CD95－CD95L体系功能紊乱,就会造成严重的自身免疫疾病。     

巨噬细胞凋亡及其调控

巨噬细胞通过介导和调控自身及其他细胞凋亡而实现其免疫调节和效应细胞功能.引起巨噬细胞凋亡的原因有生物、化学、病理、自身等因素.不仅巨噬细胞自身凋亡和凋亡调控有其特点,更为有趣的是,巨噬细胞可根据需要：介导或抑制自身凋亡;介导或抑制其他细胞凋亡;抑制自身凋亡,介导其他细胞凋亡.这可能是巨噬细胞在免疫调节,特别是肿瘤免疫中发挥重要作用的基础.     

氢化可的松诱导特发性血小板减少性紫癜淋巴细胞凋亡和增殖抑制

探讨氢化可的松对儿童急性特发性血小板减少性紫癜（AITP）外周血淋巴细胞增殖和凋亡的影响,对12例确诊的儿童AITP外周血淋巴细胞进行体外培养,用流式细胞术观察糖皮质激素处理后外周血淋巴细胞凋亡数量的变化,并用Wst-1（四氮唑盐）测定代表增殖的活细胞数。结果显示,激素处理组淋巴细胞凋亡率明显高于对照组,而活细胞数则明显低于对照组;激素处理后的外周血淋巴细胞凋亡率明显高于对照组,而活细胞数则明显低于对照组;激素处理后的外周血淋巴细胞凋亡率也明显高于处理前和正常对照组,均具有显性差异。结果表明,氢化可的松具有明显的诱导淋巴细胞凋亡和增殖抑制作用,说明糖皮质激素可通过诱导AITP外血淋巴细胞凋亡和增殖抑制发探治疗作用。     

H1N1亚型流感病毒诱导外周血单个核细胞凋亡研究

A型流感病毒能诱导淋巴细胞、单核巨噬细胞的凋亡,为进一步探讨淋巴细胞和单核巨噬细胞在凋亡中可能存在的相互作用,用H1N1亚型流感病毒诱导人外周血淋巴细胞和单核巨噬细胞的凋亡．结果显示,前48 h,H1N1流感病毒能诱导淋巴细胞和单核巨噬细胞的凋亡,但在培养48 h后,流感病毒对单核巨噬细胞表现为凋亡抑制作用,同时流感病毒对淋巴细胞吸附不同时间后,荧光染色和流式细胞术检测凋亡未见明显差异,说明细胞凋亡与病毒吸附时间长短并无相关性．检测p53抑制剂Pifithrin-α(PFT-α)加入前后淋巴细胞和单核巨噬细胞的凋亡情况,结果显示,淋巴细胞和单核巨噬细胞的凋亡均被抑制, 提示通过p53诱导的凋亡可能是流感病毒诱导细胞凋亡的一条重要途径．     

牙龈卟啉单胞菌诱导T淋巴细胞活化、凋亡的体外研究

目的检测牙龈卟啉单胞菌对人外周血中T淋巴细胞活化及凋亡的作用,并检测Fas/FasL在牙龈卟啉单胞菌(Porphyrom onas gingivalis,Pg)诱导的T淋巴细胞凋亡中的表达。方法选取10例全身及牙周组织健康受试者,分离外周血中T淋巴细胞,在有/无Pg情况下培养0~96 h,用荧光探针(Annexin V-FITC、PI、CD69)及特殊的单克隆抗体(Fas、FasL)进行标记,并进行流式细胞仪检测。结果 CD69+淋巴细胞+Pg组Annexin V+/PI-细胞百分数在各个时间点上都明显高于T淋巴细胞+Pg组(P0.01)。Fas和FasL的表达量明显上调。用抗Fas单克隆抗体阻滞Fas-FasL相互作用导致T细胞凋亡的明显减少,百分比为(20.56±2.43)%,未加抗体的为(50.41±2.68)%。但残余的细胞凋亡活动与阴性对照相比仍高。结论 Pg能够诱导人外周血中T淋巴细胞活化,并且能够通过活化促进其凋亡,Pg诱导T淋巴细胞凋亡主要通过Fas-FasL途径,并具有时间依赖性。     

颗粒酶B：有力的细胞免疫杀伤因子

丝氨酸蛋白酶家族成员颗粒酶B是细胞毒淋巴细胞介导的颗粒胞吐免疫效应中有力的杀伤因子。近年来,颗粒酶B与穿孔素协同作用的靶细胞摄取机制受到质疑,“受体内化”及“静电交换”等新模型被相继提出。颗粒酶B在靶细胞内能够诱导caspase依赖及非依赖性的凋亡,还能直接作用于死亡底物发挥细胞毒作用,同时具有基质重塑等重要的细胞外功能。颗粒酶B与自身免疫疾病及抗病毒感染密切相关,在恶性肿瘤细胞杀伤方面的应用价值正日益受到关注。     

Api6/AIM/Spα调节免疫和脂质代谢的生物学功能研究

凋亡抑制因子6（apoptosis inhibitor 6,Api6）,又称作AIM/Spα,是清道夫受体富含半胱氨酸残基超家族新成员。Api6/AIM/Spα由巨噬细胞特异性表达,具有抑制CD4＋/CD8＋双阳性胸腺细胞、T淋巴细胞、NKT淋巴细胞和巨噬细胞凋亡的作用。作为模式识别受体,Api6/AIM/Spα直接与病原体相关分子模式LPS/LTA结合,在机体固有免疫和适应性免疫中发挥重要的作用。近年研究发现,Api6/AIM/Spα可以通过抑制动脉粥样硬化斑块部位巨噬细胞凋亡加重动脉粥样硬化早期斑块的进展,也可以通过抑制脂肪酸合成酶（FAS）的生物学活性提高脂肪细胞的脂解作用,在肥胖的进展中发挥重要作用。重点综述了Api6/AIM/Spα调节免疫和脂质代谢等生物学功能的研究进展。     

肿瘤免疫逃逸与T淋巴细胞关系的研究进展

阐明肿瘤免疫逃逸是防止肿瘤发生、诊断肿瘤发展以及治愈肿瘤的关键。肿瘤逃避免疫监视(immunosurveillance)已知与宿主免疫低下、T细胞无能,和肿瘤抗原缺失和调变、肿瘤漏逸、缺乏共刺激通路信号等相关,总结了近期研究进展,围绕肿瘤和T淋巴细胞相互关系,从T细胞对肿瘤识别和耐受、肿瘤下调识别分子导致活化T细胞丧失识别能力、肿瘤抵抗凋亡助其逃逸免疫、肿瘤通过抑制性受体和分子诱导T细胞无能耐受和凋亡、肿瘤细胞攻击T细胞逃避免疫、和肿瘤依赖Treg和MDSC抑制免疫等方面总结了理解思路,对肿瘤免疫消除(elimination)、免疫相持(equilibrium)和免疫逃逸(escape)三个阶段对抗T细胞免疫监视的机理提供参考,对肿瘤治疗具有重要意义。     

几种免疫分子对Fas介导细胞凋亡的调节

Fas/APO-1介导的细胞凋亡在免疫自稳,免疫调控,免疫逃逸,免疫赦免等各个免疫生理,病理过程中均发挥着至关重要的作用。它可使免疫细胞的活化增殖和机体的免疫应答维持在一定的限度,从而避免发生过度免疫反应损伤机体。使机体的免疫系统处于一平衡状态。免疫分子。凋亡基因及抗凋亡基因表达的蛋白,以及多种药物均可调节Fas介导的细胞凋亡。本主要对几种免疫分子对Fas介导细胞凋亡的调节机制的研究进展做一论述。     

人FasL基因转染成熟树突状细胞对T淋巴细胞增殖和凋亡的影响

探讨转染人FasL基因的成熟树突状细胞(DC)对异体T淋巴细胞增殖和凋亡的影响,为实现临床器官移植免疫耐受提供初步实验依据.从健康成年人外周静脉血中获得成熟树突状细胞.将人FasL基因成功转染成熟树突状细胞,检测其表面分子的表达和自身凋亡情况,并对其抗原递呈功能进行分析.从异体健康成人外周血中获取T淋巴细胞,将转染成功的树突状细胞与T淋巴细胞混合培养,检测其对T淋巴细胞增殖和凋亡的影响.结果表明:人FasL基因转染没有明显影响成熟树突状细胞表面分子CD40、CD80、CD86和HLA-DR的表达;没有诱导树突状细胞自身发生凋亡;没有影响DC的抗原递呈功能.转染FasL基因后的树突状细胞使异体T淋巴细胞刺激指数明显下降,凋亡增加.因此认为,人FasL基因转染对成熟树突状细胞的表面分子表达、自身凋亡、抗原递呈等生物学性状无影响;转染FasL基因的树突状细胞使异体T淋巴细胞的增殖能力减弱,并能明显诱导T淋巴细胞凋亡.     

天府肉鸭胸腺发育中Fas、Fas-L和P53蛋白表达的动态研究

凋亡相关因子(Fas)、凋亡相关因子配体(FasL)和磷蛋白53(P53)是细胞发生凋亡的重要调控因素。本文研究了天府肉鸭(Anas platyrhynchos domestica)胸腺发育过程中Fas、FasL和P53蛋白的动态表达,旨在更深入地认识胸腺细胞自然凋亡的调控机制。将65羽天府肉鸭分为13组,即22、24、26天胚龄,胚后0(新生雏)、3、5、8、14、17、20、26、29、32周龄。分别采取各组鸭的胸腺组织,4%多聚甲醛固定,常规石蜡切片,Fas、Fas L及P53蛋白免疫组织化学染色,镜检并进行阳性细胞计量分析。结果显示,Fas阳性反应见于胸腺淋巴细胞,其阳性率在22~26天胚龄无明显变化;新生雏显著升高,随后趋于恒定,直到17周龄,20周龄以后呈上升趋势。Fas L阳性反应见于胸腺淋巴细胞及上皮细胞,在胚胎及胚后发育过程中,其淋巴细胞阳性率无明显变化。P53阳性反应见于胸腺皮质淋巴细胞和胸腺上皮细胞,其淋巴细胞阳性率在各组中无显著性差异。结果说明Fas,Fas L和P53蛋白在天府肉鸭胸腺发育中呈现出不同表达规律。     

冠状病毒感染调控细胞凋亡机制研究进展

冠状病毒是常见的感染人类和动物并造成健康危害的主要病原性微生物之一,冠状病毒感染细胞后,细胞产生免疫应答,病毒为了在细胞内转录翻译和装配下一代,应对细胞免疫应答的同时,还参与到许多细胞活动中,当细胞特定受体与病毒蛋白结合后,细胞即启动凋亡程序。冠状病毒的许多蛋白在细胞凋亡程序中起促进或抑制凋亡的不同作用,如病毒S蛋白与细胞膜死亡受体作用诱导细胞启动外在凋亡途径,病毒感染细胞后产生的M、S蛋白引起细胞内质网应激、Ca2+失衡,诱导细胞启动内在凋亡途径,而E蛋白则抑制细胞凋亡的发生。本文综述了冠状病毒对侵染细胞的促凋亡或抑制凋亡作用及其作用机制,通过了解病毒不同蛋白在各种凋亡途径中的不同作用,希望为人工干预调控细胞研究提供思路,为冠状病毒感染防控提供理论支持。     

外周血淋巴细胞凋亡依赖于细胞周期运行

目的以培养的人类正常外周血淋巴细胞（peripheral blood lymphocytes,PBLs）为模型,模拟细胞周期运行的不同状态,研究细胞凋亡与细胞周期运行的关系。方法将PHA及咖啡因处理前后的PBLs,分别用喜树碱（CPT）、X-射线、抗Fas抗体和肿瘤坏死因子TNF-α诱导,流式细胞术方法对细胞凋亡进行定量检测。结果PBLs经PHA刺激后进入细胞周期并发生凋亡,在凋亡因子打击作用下凋亡明显增加,用咖啡因废除细胞周期检测点后对凋亡打击敏感性降低。未经PHA刺激的PBLs对凋亡打击无应答。结论细胞进入细胞周期总是伴随细胞凋亡的发生,细胞不进入周期,则不会发生凋亡,细胞周期不停止,也不会凋亡。细胞周期检测点是联结细胞周期和细胞凋亡的重要位点。