木糖异构酶突变体的研究—纯化与性质

纯化了ＡｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒＤ－木糖异构酶的三个突变体,Ｔ８９Ｓ,Ｖ１３４Ｉ的比尖（Ｕ／ｍｇ）分别为３．４２和６．１８,Ｗ１３６Ｅ没有生。Ｔ８９Ｓ和Ｖ１３４Ｉ的活性需要二价阳离子,对于Ｔ８９Ｓ,Ｍｇ＾２＾＋的作用强于Ｃｏ＾２＾＋。在以木糖为底物时,Ｔ８９Ｓ的Ｋｍ值为４９．８ｍｍｏｌ／Ｌ,Ｖ１３４Ｉ的Ｋｍ值为９．８ｍｍｏｌ／Ｌ,在以果糖为底物时,木糖醇对Ｔ８９Ｓ是竞争性抑制剂,山梨糖醇对Ｔ８９Ｓ和     

小鼠腹腔巨噬细胞不完全失活的外向K~+电流的基本特性

采用膜片钳技术以全细胞方式在小鼠腹腔渗出巨噬细胞（ＰＥＭ）中记录到一种不完全失活的外向Ｋ＋电流（Ｉｏ）,该电流在膜电位正于－１０ｍＶ时激活,对Ｋ＋具有高度特异性,其半值电导电位Ｖ１／２为７９．５ｍＶ,在膜电位正于３０ｍＶ时,该电流失活,在６０－１２０ｍＶ的膜电位范围内,其失活时间常数τｉ与膜电位无关．随着胞外Ｋ＋离子浓度（［Ｋ＋］ｏ）升高,该电流的失活过程减慢。在生理电压范围内（－８０－０ｍＶ）,该电流缺乏稳态失活,且其失活不具有频率依赖性。胞外４－ＡＰ（３ｍｍｏｌ／Ｌ）、Ｂａ２＋（３ｍｍｏｌ／Ｌ）及ＴＥＡ（５ｍｍｏｌ／Ｌ）可抑制该电流,抑制率分别为８５％,６６％及３１％。胞外Ｚｎ２＋（１ｍｍｏｌ／Ｌ）可影响该电流活性,对该电流的抑制具有电压依赖性     

乙肝病毒核衣壳启动子内三链DNA的形成

用电泳迁移分析方法研究了２１ｎｔ脱氧寡核苷酸Ｇ３ＴＧ２ＴＧＴ２Ｇ５ＴＧ２ＴＧＴ（ＣＰ１）与１２９ｂｐ的乙肝病毒（ＨＢＶ）核衣壳启动子（Ｃｐ）片段内一位点结合形成的三链ＤＮＡ的特异性及稳定性．在克隆有ＨＢＶ基因组的质粒ｐＣＰ１０的酶切产物中,ＣＰ１仅与含Ｃｐ的１２９ｂｐ片段结合．在２０ｍｍｏｌ／ＬＭｇ２＋溶液中其解离常数（Ｋｄ）为１．４×１０－７ｍｏｌ／Ｌ．不同离子稳定三链ＤＮＡ的效果依次为ｓｐ４＋（精胺）＞Ｍｇ２＋＞Ｚｎ２＋＞Ｎａ＋＞Ｋ＋,离子之间存在相互竞争作用．比ＣＰ１多一误配碱基的脱氧寡核苷酸Ｇ２ＴＧ２ＴＧＴＧ３ＴＧ２ＴＧ２ＴＧ２Ｔ（ＣＰ２）在２０ｍｍｏｌ／ＬＭｇ２＋溶液中与Ｃｐ结合的Ｋｄ值约为ＣＰ１的１／７,而在６０ｍｍｏｌ／ＬＫ＋或５ｍｍｏｌ／ＬＺｎ２＋溶液中检测不到它与Ｃｐ的结合,这进一步显示了三链ＤＮＡ形成的特异性．细胞的生理离子浓度被认为是：Ｓｐ４＋１ｍｍｏｌ／Ｌ,Ｍｇ２＋１０ｍｍｏｌ／Ｌ,Ｋ＋１４０ｍｍｏｌ／Ｌ,因此,ＣＰ１在细胞内将能特异地与Ｃｐ结合并具有较好的稳定性．     

6—BA诱导的带正电荷的葡萄叶过氧化物酶

河岸葡萄叶的带正电荷过氧化物酶可受６－ＢＡ诱导,但盐,Ｈ２Ｏ２或Ｆｅ＾２＋＋Ｈ２Ｏ２均使叶片ＣＯＰＤ活性明显下降,而高浓度的无机盐明显刺激纯ＣＯＰＤ活性增加。在以愈创木酚为底物时ＣＰＯＤ最适ｐＨ为４．６０－５．７５,对Ｈ２Ｏ２的表面Ｖｍａｘ和Ｋｍ值分别为１１０Ｕ／ｍｇ蛋白和１．１５ｍｍｏｌ／Ｌ。     

机械力对鼠脑微血管内皮细胞膜电流的影响

采用膜片钳技术以全细胞方式在鼠脑微血管内皮细胞中记录到一延迟外向电流,对Ｋ＾＋具有高度特异性,胞外施加２０ｍｍｏｌ／Ｌ的ＴＥＡ－Ｃｌ在明显抑制该电流。实验的保持电位定在－１００ｍＶ,测试电位从－１００ｍＶ至＋９０ｍＶ,每次增加１０ｍＶ,刺激波宽为２１００ｍｓ。该电流具有ＴＥＡ敏感,并有浓度依赖性,其ＩＣ５０约为２．０ｍｍｏｌ／Ｌ,类似延迟整流性钾电流特征（ＩＫｖ）。机械力作用下可引出一外向电流,膜     

大肠杆菌精氨酰－tRNA合成酶的变种ArgRS306KR的纯化和基本性质

本文从含ＡｒｇＲＳ３０６ＫＲ基因ａｒｇｓ３０６ＫＲ的ｐＵＣ１８重组质粒的大肠杆菌ＴＧ１转化子中经ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｃｅｌ和Ｂｌｕｅ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ两步柱层析,得到电泳一条带的ＡｒｇＲＳ３０６ＫＲ。纯酶的比活为２７９０单位／毫克。该酶氨酰化和ＡＴＰ～ＰＰｉ交换活力的最适ｐＨ分别为ｐＨ８．３和ｐＨ７．５。氨酰化活力对ＡＴＰ、Ａｒｇ和ｔＲＮＡ的Ｋｍ分别为２．６ｍｍｏｌ／Ｌ、１４．０μｍｏｌ／Ｌ和５．０μｍｏｌ／Ｌ：Ｖｍａｘ为７６３０单位／毫克;ｋｏａｔ为９Ｓ－１。ＡＴＰ～ＰＰｉ交换活力对ＡＴＰ和Ａｒｇ的Ｋｍ分别为８．３ｍｍｏｌ／Ｌ和９９μｍｏｌ／Ｌ;Ｖｍａｘ为１６３２０单位／毫克;ｋｃａｔ为１８Ｓ－１。     

兔血管平滑肌延迟整流钾通道研究及其与克隆Kv1.5通道的电生理特性比较

本文用膜片箝全细胞技术比较了研究了单个兔肺动脉血管平滑肌细胞上延迟整流钾通道与克隆Ｋｖ１．５通道的电生理及药理学特性。将平滑肌细胞箝制在－４０ｍＶ,以１０ｍＶ的步跨阶跃去极化（０￣６０ｍＶ）可产生一系列快速上升的外向电流,几无衰减,其激活曲线的Ｖ１／２为２７．２ｍＶ。灌流液中加入１００ｍｍｏｌ／Ｌ和ＴＥＡ １ｍｍｏｌ／Ｌ ４ＡＰ,电流幅度均明显减小,细胞外Ｃａ＾２＋水平由１．５ｍｍｏｌ／Ｌ降至０．     

细胞外Mn^2＋对内向整流钾通道（IRK1）的阻断作用

目的和方法：采用双微电极电压钳（ＴＥＶ）法研究细胞外Ｍｎ＾２＋对非洲爪蟾卵母细胞表达的内向整流钾通道（ＩＲＫ１）的阻断作用。结果：细胞外Ｍｎ＾２＋浓度分别为１、１．２５、２．５、５、１０和２０ｍｍｏｌ／Ｌ,Ｋ＾＋浓度为９０ｍｍｏｌ／Ｌ,可见Ｍｎ＾２＋对ＩＲＫ１的瞬间电流（旋加电压后２ｍｓ）具有Ｍｎ＾２＋浓度依赖性和电压依赖性阻断作用;细胞外加Ｍｎ＾２＋浓度较高时强;细胞外Ｋ＾＋浓度为９０ｍｍｏｌ／     

K^＋对大豆下胚轴质膜H^＋—ATPase水解与质子转运活力偶联的影响

以大豆（ Ｇｌｙｃｉｎｅ ｍａｘ Ｌ．） 下胚轴为材料, 采用二相法制得高纯度质膜微囊。实验发现,Ｋ＋ 对质膜Ｈ＋＿ＡＴＰａｓｅ水解活力和转运活力刺激差别显著,对转运活力刺激８５０％ , 对水解活力仅刺激２８ ．２％ 。动力学结果表明,有Ｋ＋时ＡＴＰ水解的Ｋｍ 值为０．７０ ｍｍｏｌ／Ｌ,Ｖｍａｘ 为３４４ ．８ ｎｍｏｌ Ｐｉ·ｍｇ－１ ｐｒｏｔｅｉｎ·ｍｉｎ－１ ; 无Ｋ＋ 时ＡＴＰ水解的Ｋｍ 值为１ ．１４ｍｍｏｌ／Ｌ, Ｖｍａｘ为２８５．７ ｎｍｏｌ Ｐｉ·ｍｇ－１ ｐｒｏｔｅｉｎ·ｍｉｎ－１ 。Ｋ＋ 对ＡＴＰ水解的最适ｐＨ 值也有影响,有Ｋ＋ 时为６ ．５ ,无Ｋ＋ 时降低到６．０ 。进一步实验发现,Ｋ＋ 对羟胺和钒酸钠的抑制作用影响较大,Ｋ＋ 可以提高质膜Ｈ＋＿ＡＴＰａｓｅ 对羟胺和钒酸钠的敏感性。结果表明,Ｋ＋ 可以调节大豆下胚轴质膜Ｈ＋＿ＡＴＰａｓｅ 水解与转运活力之间的偶联程度     

P物质对大鼠DRG神经元胞体膜的作用

本文在大鼠ＤＲＧ神经元标本上应用细胞内记录,以确定ＳＰ对ＤＲＧ细胞的膜反应及其可能的离子机制。实验所测ＤＲＧ细胞静息膜电位为－５８．９±８．２ｍＶ（Ｘ±ＳＥ,ｎ＝８１）。传导速度：Ａ_（α／β）细胞为２０．４±４．８ｍ／ｓ（Ｘ±ＳＥ）,范围１４．１－２８．７ｍ／ｓ（４７／６０）;Ａδ及Ｃ类细胞为９．８±５．２ｍ／ｓ,范围１．２－１３．７ｍ／ｓ（１３／６０）。浴槽滴加ＳＰ（１０￣（－７）－３×１０￣（－４）ｍｏｌ／Ｌ）在大多数细胞可引起明显的膜去极化反应（５６／６０）。少数细胞对ＳＰ无反应（４／６０）。在ＳＰ去极化期间膜电导值有所增加,从平均值２．７２×１０￣（－８）ｍｈｏ增加２４．６％（ｎ＝３）。所测逆转电位值在＋４０－＋５０ｍＶ之间（ｎ＝３）。浊流平衡液（ＢＳＳ）中ＮａＣｌ以氯化胆碱置代,或用含ＴＴＸ（１０￣（－５）ｍｏｌ／Ｌ）的ＢＳＳ灌流,可使ＳＰ－去极化幅值大大减小但不能完全消除。而高（２０ｍｍｏｌ／Ｌ）和低（０ｍｍｏｌ／Ｌ）Ｃａ￣（２＋）的ＢＳＳ灌流时,使ＳＰ－去极化幅值相应的增加和降低。用含１０￣（－４）ｍｏｌ／ＬＣｄ￣（２＋）及１０￣（－２）ｍｏｌ／ＬＴＥＡ的ＢＳＳ灌流,均使ＳＰ－去极化明显减小。     

6BA诱导的带正电荷的葡萄叶过氧化物酶

河岸葡萄叶的带正电荷过氧化物酶（ｃａｔｉｏｎｉｃ ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ, ＣＰＯＤ） 可受６ＢＡ 诱导,但盐、Ｈ２Ｏ２ 或Ｆｅ２＋＋ Ｈ２Ｏ２ 均使叶片ＣＰＯＤ 活性明显下降,而高浓度的无机盐明显刺激纯ＣＰＯＤ 活性增加。在以愈创木酚为底物时ＣＰＯＤ 最适ｐＨ 为４ ．６０ ～５ ．７５ ,对Ｈ２Ｏ２ 的表观Ｖｍａｘ 和Ｋｍ 值分别为１１０ Ｕ／ｍｇ 蛋白和１ ．１５ｍ ｍｏｌ／Ｌ。     

高渗震动对杜氏盐藻细胞跨膜K^＋运输的影响

杜氏盐藻细胞吸收Ｋ＾＋的Ｋｍ为２．８６ｍｍｏｌ／Ｌ,Ｖｍａｘ为１．３９μｍｏｌ／１０＾８ｃｅｌｌｓ．ｈ。钒酸钠和ＤＥＳ、ＣＣＣＰ、Ｌｉ＾＋抑制藻细胞对Ｋ＾＋的吸收。高渗震动促进藻细胞Ｈ＾＋的分泌,降低Ｋ＾＋的吸收速率,ＣＣＣＰ和Ｌｉ＾＋减弱了高渗震动对藻细胞Ｋ＾＋吸收的抑制。高渗震动对藻细胞Ｋ＾＋分泌有轻微的抑制作用。     

背角无齿蚌碱性碳酸酶的分离、纯化及其动力学研究

作者对背角无齿蚌外套膜的碱性磷酸酶（ＡＫＰ）进行了分离纯化,并对其动力学性质进行了初步研究。外套膜匀浆,经正丁醇抽提、盐析、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ—１００凝胶过滤等步骤,得到了比活力为１４９．６单位／ｍｇ蛋白的酶制品。通过动力学方法测得其最适ｐＨ值为９．５,最适温度为４０℃,以磷酸苯二钠作底物的Ｋｍ值为０．５７ｍｍｏｌ／Ｌ。Ｍｇ２＋、Ｃａ２＋对酶有激活作用,而Ｃｕ２＋、Ｚｎ２＋、ＫＨ２ＰＯ４、ＥＤＴＡ和巯基乙醇有抑制作用。     

豚鼠耳蜗外毛细胞的急性分离及钾离子通道的研究

本文对豚鼠耳蜗离体外毛细胞的细胞活性及底侧膜处电压依赖性钾离子通道进行了研究,结果表明：（１）离体外毛细胞悬液保存在４℃时,可延长存活时间达７ｈ以上。（２）外毛细胞的静息电位：应用电流钳方法,在刚形成全细胞方式时其细胞内静息电位为－７３．７±６．９ｍＶ,２ｍｉｎ后为－９４．８±４．１ｍＶ（ｘ±ｓ,ｎ＝１０）。（３）全细胞方式记录到的电压依赖性外向Ｋ＋电流是由快钾电流和延迟整流钾电流两部分组成,快钾电流的激活电位为－６０～－５０ｍＶ,延迟整流钾电流的激活电位为－４０～－３０ｍＶ,电流－电压关系曲线呈“Ｓ形上升”趋势。外向Ｋ＋电流被ＴＥＡ（２０ｍｍｏｌ／Ｌ）阻断后,可观察到一种电压依赖性内向电流     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇对K~＋刺激的小麦根质膜ATP酶活性、K~＋吸收、外渗及再分配的影响

１０－８ｍｏｌ／Ｌ的ＤＯＮ毒素加入小麦根质膜制剂中可促进Ｋ＋刺激的ＡＴＰ酶活力,１０－６ｍｏｌ／Ｌ开始呈抑制效应,抑制程度随ＤＯＮ浓度加大而提高。根尖（５ｃｍ）离体根段于０．５ｍｍｏｌ／Ｌ的ＫＣｌ中,１０－８ｍｏｌ／Ｌ的ＤＯＮ能促进根段Ｋ＋吸收,１０－６ｍｏｌ／Ｌ以上浓度则Ｋ＋吸收呈抑制,１０－２ｍｏｌ／Ｌ浓度下根段的净吸收为负值,表明组织中Ｋ＋大量外渗。根段置蒸馏水中６ｈ,４ｍｍｏｌ／Ｌ的ＤＯＮ即导致振段Ｋ＋渗漏。用ＤＯＮ处理整株小麦根,浓度在０．２５ｍｍｏｌ／Ｌ以上可促进Ｋ＋从植株其它部位向根运输,而浓度在８ｍｍｏｌ／Ｌ时即抑制Ｋ＋向根富集,且根内Ｋ＋明显渗漏。     

吉林省产5种百合的核型研究

报道了吉林省产５种百合科植物的染色体数目和核型：①毛百合Ｌｉｌｉｕｍ ｄａｕｒｉｃｕｍ Ｋｅｒ．－Ｇｅｗ１．２ｎ＝２４＝２ｍ（２ＳＡＴ）＋２ｓｍ（２ＳＡＴ）＋８ｓｔ（２ＳＡＴ）＋１２ｔ（２ＳＡＴ）;②有斑百合Ｌ．ｃｏｎｃｏｌｏｒ Ｓａｌｉｓｂ．ｖａｒ．ｂｕｓｃｈｉａｎｕｍ（Ｌｏｄｄ．）Ｂａｋｅｒ ２ｎ＝２４＝２ｍ（２ＳＡＴ）＋４ｓｍ（４ＳＡＴ）＋６ｓｔ（２ＳＡＴ）＋１２ｔ;③兰州百合Ｌ．ｄａｖｉｄ     

背角无齿蚌碱性磷酸酶的分离,纯化及其动力学研究

作者对背角无齿蚌外套膜的碱性磷酸酶（ＡＫＰ）进行了分离纯化,并对其动力学性质进行了初步研究,外套膜匀浆,经正丁醇抽提,盐析,ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００凝胶过滤等步骤,得到了比活力主国１４９．６单位／ｍｇ蛋白的酶制品,通过动力学方法测得其最适ｐＨ值为９．５,最适温度为４０℃,以磷酸苯二钠作底物的Ｋｍ值为０．５７ｍｍｏｌ／Ｌ,Ｍｇ＾２＋,Ｃａ＾２＋对酶有激活作用,而Ｃｕ＾２＋,Ｚｎ＾２＋,ＫＨ２ＰＯ４     

南方鲇碱性磷酸酶的分离纯化及部分性质的研究

用正丁醇抽提,硫酸铵分级沉淀,ＤＥＡＥ－纤维素和ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－２００柱层析,从南方鲇（Ｓｉｌｕｒｕｓ　ｍｅｒｉｄｉｏｎａｌｉｓ　Ｃｈｅｎ）肠粘膜中提取出碱性磷酸酶（ＡＫＰ）。提纯倍数为３９．５０倍,比活为６８．３５μ／ｍｇ蛋白,提取酶液经ＰＡＧＥ和ＳＤＳ－ＰＡＧＥ只呈现一条区带。该酶的分子量为１３２１４０,Ｎ末端氨基酸为门冬氨酸,最适ｐＨ为１０．１０,７．５＞ｐＨ＞１１．５时不稳定,最适温度为４０℃左右,对热不很稳定,以磷酸苯二钠为底物其Ｋ_ｍ值为１．７２×１０~（－３）ｍｏｌ／Ｌ。Ｍｇ~（２＋）、Ｍｎ~（２＋）为该酶的激活剂,ＫＨ_２ＰＯ_４、Ｌ－ＣｙＳ、ＭＥ、ＤＦＰ、ＥＤＴＡ－Ｎａ_２为抑制剂。选用ＫＨ_２ＰＯ_４和ＤＦＰ作抑制类型的判断,结果表明,ＫＨ_２ＰＯ_４属竞争性掏剂,其抑制常数为２．３ｍｍｏｌ／Ｌ;ＤＦＰ为非竞争性抑制剂,抑制常数为１．０５ｍｍｏｌ／Ｌ。     

青藏高原毛茛科3种特有植物核型和进化研究

对青藏高原高山冰缘地区毛茛科３种特有植物的核型进行了分析。它们的核型公式（Ｋ）、染色体相对长度组成（Ｃ．Ｒ．Ｌ．）和核型不对称系数（Ａｓ．Ｋ％）分别为：青藏金莲花Ｔｒｏｌｉｕｓｐｕｍｉｌｕｓｖａｒ．ｔａｎｇｕｔｉｃｕｓ：Ｋ（２ｎ）＝６ｍ＋８ｓｍ（２ＳＡＴ）＋２ｓｔ,Ｃ．Ｒ．Ｌ．＝４Ｌ＋４Ｍ２＋４Ｍ１＋４Ｓ,Ａｓ．Ｋ％＝６３．５７,核型属２Ｂ型;甘青乌头Ａｃｏｎｉｔｕｍｔａｎｇｕｔｉｃｕｍ为Ｋ（２ｎ）＝６ｍ＋１０ｓｍ,Ｃ．Ｒ．Ｌ．＝４Ｌ＋８Ｍ１＋４Ｓ,Ａｓ．Ｋ％＝６２．５４,２Ｂ型;单花翠雀花Ｄｅｌｐｈｉｎｉｕｍｃａｎｄｅｌａｂｒｕｍｖａｒ．ｍｏｎａｎｔｈｕｍ为Ｋ（２ｎ）＝６ｍ＋８ｓｍ＋２ｓｔ,Ｃ．Ｒ．Ｌ．＝４Ｌ＋４Ｍ２＋４Ｍ１＋６Ｓ,Ａｓ．Ｋ％＝６４．３４,属３Ｂ型。经同相关近缘种核型资料比较,青藏金莲花核型不对称性和进化程度比金莲花Ｔ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ低;甘青乌头的核型不对称性和进化程度在其近缘类群（乌头组Ｓｅｃｔ．Ａｃｏｎｉｔｕｍ）已报道的种之内最低;单花翠雀花核型不对称性和进化水平比翠雀组（Ｓｅｃｔ．Ｄｅｌｐｈｉｎａｓｔｒｕｍ）已报道的展毛翠雀花Ｄ．ｋａｍａｏｅｎｓｅｖａｒ．ｇｌａｂｒｅｓｃｅｎｓ、     

人血红细胞酷氨酸蛋白磷酸酶（PTPP）的研究：Ⅱ.胞浆PTPP的分离纯…

人血红细胞胞浆部分经（ＮＨ４）２ＳＯ４沉淀,ＤＥＡＥ－纤维素（ＤＥ２）柱层析,磷酸纤维素柱层析（Ｐ１１）得到部分纯化的ＰＴＰＰ,产率;５．７％,提纯１０７５倍。以＾３２Ｐ－Ｔｙｒ－Ｐｏｌｙ（Ｇ４：Ｔ）作底物,测得其表征Ｋｍ约为０．５－０．８μｍｏｌ／Ｌ。该酶的最适ｐＨ和最适温度分别为７．０－７．８及３７－４０℃。Ｚｎ＾２＋等二价金属离子及Ｎａ３ＶＯ４等酸根基团对其活性有明显的抑制作用;ＥＤＴＡ、甘