用微弹轰击法将GUS基因导入小麦的完整细胞

微弹轰击法将外源DNA导入小麦(Triticum,aestivum)未成熟胚和悬浮细胞系的完整细胞。用pCI GUS作报告基因,质粒DNA涂于钨粉微弹表层,用基因枪轰击使微弹穿透细胞壁进入小麦细胞。处理2天后,用x—glucuronide染色,对GUS基因产物的活性进行鉴定,GUS基因表达的细胞呈深蓝色的小点。小麦幼胚表面的蓝点最多可达40～50个,悬浮细胞系中GUS基因表达的细胞较少。试验表明微弹轰击法是小麦组织水平上进行外源基因导入的一个有效途径。试验对微弹轰击的有关参数及条件进行了讨论。     

粒子枪促进土壤杆菌介导的转化

Pioneer Hi-Bred的科学家D.Bidney及其同事们发现,在用根癌土壤杆菌转化植物组织之前,对该组织进行微弹轰击,可促进转化作用。Bidney的研究小组用钨粒子轰击烟草叶和向日葵顶端分生组织,然后用含GUS或卡那霉素抗性基因的根癌土壤杆菌处理。他们发现,与未经轰击的组织相比,前粒子轰击能提高转化频率。在产生卡那霉素抗性的集落中,对烟草叶进行微弹轰击和土壤杆菌的转化作用相结合至少比只用包有DNA的粒子轰击进行直接转化要有效100倍。在向日葵分生组织衍生的植株中可观察到相似的结果。     

原核增强子样序列的研究

本文采用启动子检测载体和增强子检测载体发现来自大肠杆菌JMl03 DNA的一个1．0kb左右的片段能在痘苗病毒启动子上游增强细菌CAT和β－半乳糖苷酶基因在大肠杆菌中的表达,这种增强效应无明显的方向性,一般可使基因表达水平提高3～6倍,此原核增强子样序列同时也具有启动子功能。此外还测定了增强片段的部分DNA序列。     

超高压在工业微生物诱变选育中的应用初探

超高压对微生物有多方面的影响,它不仅可使微生物细胞组分、体积形态发生变化,还可使微生物的基因表达和核酸结构及其生物学功能发生改变。超高压的这些生物学效应,使其不仅可以应用到食品杀菌、保藏及某些加工过程,而且在微生物菌种诱变方面具有很大的应用潜力。     

家蚕的磁生物学效应研究

综述了近年来对家蚕的磁处理技术及其诱发的生物学效应,分析了家蚕的磁生物学效应机理及其复杂性,研究表明,磁处理可提高家蚕卵的孵化率,促进家蚕的生长发育,增强家蚕的抗病能力,可使当代蚕茧增产增收,这是生物磁技术在家蚕饲育中应用的新成果。     

厨房油烟引起AL细胞遗传损伤和胞内自由基形成

为了解厨房油烟(cooking oil fumes,COF)对细胞的危害及其遗传毒性机制,以A细胞为实验模型,对细胞活力水平、细胞基因突变率、细胞非巯基蛋白化合物水平(NPSH)以及细胞内活性氧(ROS)产生的变化规律进行了研究。实验发现：用厨房油烟(COF)处理后,A细胞的活力下降,细胞CD59基因的突变率随着处理浓度的增加而增加,NPSH水平随着处理浓度的增加而降低,且存在一定的剂量一效应关系。检测胞内产生的ROS,发现400μg／ml COF处理30min后,细胞内ROS含量高于对照3倍多。实验结果表明：COF可引起细胞氧化胁迫,诱导哺乳动物细胞基因突变。     

诱导子人参寡糖对红花培养细胞的生理效应

从人参(Panax ginseng)培养细胞中分离纯化出不同寡糖。这些寡糖能促进红花(Car-thamus tinctorius)培养细胞的生长及提高细胞中α-生育酚的含量。其中以Ⅶ、Ⅷ、Ⅵ等三种寡糖的效果较为显著。这三种寡糖的最适浓度在愈伤组织培养(5—8 mg/L)中要比在细胞悬浮培养(1—2mg/L)中高。对Ⅶ、Ⅷ两种寡糖不同时期加入的效应进行了试验,结果发现,加入寡糖后1—3天,α-生育酚的含量即提高。在红花细胞悬浮培养过程中同时加入2mg/L 的寡糖Ⅵ和寡糖Ⅶ及1mg/L 的寡糖Ⅷ,可使红花细胞生长速率提高18.11%,α-生育酚含量比对照提高3.5倍,其产率比对照提高4.3倍。     

离心处理对水稻花粉诱导的作用

离体培养前用离心处理花药,可显著地提高水稻花粉诱导物的产生频率,用每分钟2000转离心花药10分钟得到最佳的处理效果,花粉绿苗的诱导率比对照提高了1.65倍;发现从不同季节生长的同一材料对离心力的反应并不相同,也观察到作用于细胞的离心力有方向性效应,在离心管中竖置的花药可比倒置或横置的花药具有更大的刺激效果。     

维甲酸对肝癌细胞HepG2糖基化磷脂酰肌醇特异性磷酯酶D表达及细胞生物学特性的影响

应用MTT、流式细胞仪、免疫印迹法检测全反式维甲酸(ATRA)单独或联合糖基化磷脂酰肌醇特异性磷酯酶D(GPI-PLD)特异性抑制剂1,10-二氮杂菲对肝癌细胞HepG2生物学特性的改变.ATRA使肝癌细胞HepG2 GPI-PLD基因表达及酶活性上调,并呈现剂量和时间依赖性.ATRA可抑制肝癌细胞HepG2增殖,使肝癌细胞Caspase-3表达水平显著增加,Bcl-2表达水平下调,促进肝癌细胞凋亡(P<0.05).ATRA联合1,10-二氮杂菲诱导组细胞,Bcl-2、细胞增殖活性较ATRA单独诱导组显著增强,Caspase-3、凋亡率显著下降.维甲酸可促进肝癌细胞HepG2 GPI-PLD基因表达上调,高活性的GPI-PLD有助于维甲酸抑制肝癌细胞增殖,促进肝癌细胞凋亡.     

电气石对绿豆培养细胞生长的影响

目的：研究电气石对植物细胞生长的影响。方法：绿豆（Vigna radata Wilczek）胚乳细胞悬浮培养中添加电气石,测定电气石对细胞数目和生物量增长的作用及其浓度效应。结果：电气石能够促进绿豆悬浮细胞生长。在30mL的悬浮液中分别加入3、6、9和12g电气石,3g电气石处理对细胞生长的促进作用不显著;12g电气石处理表现出过量反应。6g和9g电气石处理对细胞生长的促进作用较理想,处理lOd后细胞数目分别比对照增加33％和38％;6g电气石处理12d后细胞的生物量为对照的1．8倍。电气石处理对细胞大小无显著影响。结论：电气石通过促进细胞增殖而显著促进绿豆细胞生长和生物量的增加。     

植物遗传工程

940312稳定转化的植物细胞中骨架连接区增强报道基因表达〔英〕/Allen,G.C.…/Plant Cell一1993,5(6)一603~613〔译自DBA,1993,12(17),93一09903〕 酿酒酵母自主复制片段ARS一1含有一个能离体与植物核骨架结合的骨架连接区(S AR)。为了试验对基因表达的效应,将一个位于该片段侧翼的、在CaMV 355启动子调控下的,GUS基因的构建物通过微轰击转送到烟草NT一1悬浮细胞中。在稳定转化的细胞系中,含两个侧翼SAR构建物的GUS活性比缺少SAR的对照平均高12倍。表达水平不与基因拷贝数成比例。而在某些含多基因拷贝的转化体中,该片段似乎是…     

无花果叶片多糖抑制胃癌细胞增殖与促进凋亡效应

为了明确无花果叶片多糖抑癌效应,本文以‘布兰瑞克’、‘玛斯义陶芬’和‘波姬红’三个无花果品种为材料,分别从7月至11月份叶片中提取多糖,并且研究其对人体胃癌SGC-7901细胞增殖的抑制效应,发现‘布兰瑞克’9月份叶片多糖抑制效应最高,2 mg/mL的抑制率达46.67%。以该时期叶片多糖为材料,研究发现,不同浓度多糖对癌细胞周期具有明显的阻滞作用。经多糖处理的癌细胞,活性氧含量和细胞凋亡率上升,促细胞凋亡基因Bax和p53表达量在mRNA水平上升,抗凋亡基因Bcl-2以及细胞周期相关基因,包括Cyclins和CDKs等表达量下降。以上结果表明,无花果叶片多糖可以诱导人体胃癌细胞SGC-7901细胞凋亡基因表达,抗凋亡基因和周期基因表达受抑,细胞活性氧上升,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡。本研究结果为无花果叶片多糖运用于抗肿瘤药物开发提供了理论依据。     

叶酸受体基因转染细胞诱导后的类脂改变对叶酸摄取的影响

用胆固醇合成抑制剂Ｌｏｖａｓｔａｔｉｎ（洛伐他汀,暂译名）和神经鞘脂类合成抑制剂ＦｕｍｏｎｉｓｉｎＢ１（抑鞘脂素Ｂ１,暂译名）处理能表达糖基化磷脂酰肌醇锚定叶酸受体（ＧＰＩＦＲ）的基因转染细胞（ＦＲα·ＴＲＶＢ－１）３ｄ,发现前者可使细胞的胆固醇含量减少约３５％,而后者可使神经鞘脂类减少４４％以上;同时发现,处理组细胞结合叶酸的能力减少约４０％,其对５－甲基四氢叶酸的摄入率减少逾８０％．这主要是由于细胞质膜中胆固醇和神经鞘脂类含量减少,从而导致膜内ＧＰＩＦＲ结合叶酸功能降低及ＧＰＩＦＲ摄入叶酸的内化过程障碍所致．其详细作用机制尚待进一步研究     

IER5基因对HeLa细胞辐射敏感性的影响

为寻找放射敏感性基因,采用基因芯片技术筛选出辐射可诱导表达mRNA上调的基因,其中就有IER5．为探索IER5基因的生物学功能及其在宫颈癌放疗中的作用,采用RNA干扰技术构建IER5基因表达抑制的质粒载体并构建IER5-siRNA-HeLa细胞系．对该细胞系与HeLa细胞进行辐射,旨在了解IER5-siRNA-HeLa的细胞生长曲线、细胞周期等实验参数的变化,揭示了IER5基因在辐射诱导中的生物学功能．实验发现,IER5基因表达抑制可提高细胞分裂进入S期与G2-M期的比例,促进细胞分裂,促进细胞生长,提高细胞对辐射的拮抗性,同时发现IER5-siRNA-HeLa细胞在尺寸上大于HeLa细胞．研究表明,IER5基因表达抑制可促使细胞受辐射后发生S期与G2-M期的阻滞,IER5参与辐射细胞周期的调控,对临床宫颈癌放疗有一定的潜在应用价值．     

PI3K活性与BHA诱导小鼠胎肝细胞表达神经组织细胞特异基因有关

目的：了解丁羟回醚（BHA）对小鼠胎肝（FL）细胞神经组织特异基因表达的影响及其信号途径。方法：小鼠胎肝细胞,以DMEM／F12＋10％胎牛血清培养液培养;第4d后,去悬浮细胞,留黏附细胞,加入或者不加入磷酸肌醇3羟基激酶（PI3K）抑制剂LY294002（20μmol／L）处理24h,再加入BHA至终浓度0．2mmol／L,然后继续培养5d。用Western blot和半定量RT—PCR方法分析BHA处理前后神经组织细胞特异基因表达。结果：胎肝细胞本身表达神经组织特异基因水平较低或者不表达。BHA则促进了胎肝细胞内神经组织特异基因表达：NF-L mRNA增加5．8倍、NF—H mRNA增加8．0倍、TH mRNA增加30倍、BF-1 mRNA增加2．68倍;NF-L蛋白增加11．29倍、NF—H蛋白增加5,5倍、BF-1蛋白增加2．53倍、TH蛋白增加4．76倍。而LY294002能明显抑制BHA诱导的神经组织细胞特异蛋白NF—L、NF-H、BF-1和TH的表达。结论：PI3K活性与BHA诱导小鼠胎肝细胞表达神经组织细胞特异结构和功能基因有关。     

乙酰胆碱协同剂对蚕豆保卫细胞原生质体内向钾电流的调节作用

用膜片钳全细胞记录方式研究了乙酰胆碱对蚕豆保卫细胞原生质体内向钾电流的作用与机理。发现乙酰胆碱的协同剂———烟碱和毒蕈碱分别促进内向钾电流 30 %～ 40 %。EGTA处理能有效减弱毒蕈碱对内向钾电流的促进效应 ,但不影响烟碱对内向电流的促进效应。这些结果提示 ,乙酰胆碱促进气孔开放的作用可能是通过受体直接或间接调节内向钾电流实现的     

两株链霉菌对玉米的促生增产作用及机理

为探索娄彻氏链霉菌(D74)和密旋链霉菌(Act12)及其混合菌剂对玉米生长的影响,采用皿内发芽试验、沙培试验及小区试验观察供试链霉菌无细胞发酵滤液及活菌制剂种子包衣对玉米生物学性状、叶片诱导酶活性、光合作用、穗性状、产量及品质的影响.结果表明: 供试链霉菌无细胞发酵滤液处理玉米种子可促进玉米胚根、胚轴及幼苗生长,提高玉米幼苗叶片诱导酶活性.D74发酵液稀释1000倍处理可使玉米胚根长度、胚轴长度及须根数较对照分别增加43.4%、26.4%和100.7%(P＜0.05);D74原液可使玉米叶片多酚氧化酶(PPO)活性较对照增加40.2%.Act12发酵液稀释100倍处理可使玉米胚根长度、胚轴长度和须根数较对照分别增加36.3%、36.3%和117.5%(P＜0.05),玉米幼苗总鲜质量、根系鲜质量分别较对照增加31.1%、36.6%(P＜0.05);Act12稀释10及1000倍处理玉米种子可使玉米叶片PPO活性分别较对照增加38.1%和39.5%(P＜0.05).混合菌剂种子包衣具有以下作用:1)促进玉米根系发育;2)显著增强叶片光合能力;3)显著改善穗性状并提高籽粒产量;4)显著促进籽粒灌浆速度;5)明显提高灌浆期玉米叶片诱导酶活性.表明供试链霉菌制剂包衣玉米种子可显著影响玉米的生物学特性、光合生理及生化代谢,刺激根系发育,促进玉米生长,提高产量.     

SO2体内衍生物诱发蚕豆根尖细胞微核

以蚕豆为材料 ,研究 SO2 体内衍生物 -亚硫酸钠与亚硫酸氢钠混合液 (3:1)对根尖细胞的遗传毒效应。结果表明 :0 .0 5～2 .0 0 mmol/ L的 SO2 衍生物处理可诱发两品种蚕豆根尖中的微核细胞明显增加 ;不同浓度 (0 .0 5～ 15 .0 0 mmol/ L ) SO2 衍生物处理 12、2 4、36 h后 ,根尖微核细胞率是对照组的 2 .5～ 5 .0倍 ,显著高于对照组。在一定浓度范围内 ,蚕豆根尖细胞微核率与SO2 衍生物浓度之间具有正的线性相关。研究结果表明 ,SO2 衍生物能够破坏蚕豆根尖细胞的遗传稳定性。     

在Yunnanese(Aγδβ)0-地贫3′缺失端点下游鉴别到两个增强子样顺序

利用荧光酶报告基因系统搜索了Yunnanese(Aγδβ)0-地中海贫血缺失3′端点下游11.5 kb区域内的调控顺序.确定缺失3′端点立即下游区1.7 kb片段,在人红白血病细胞K562及鼠红白血病细胞MELGM979中,可使γ-珠蛋白基因启动子驱动的荧光酶基因表达增加3.8～4.0倍,而在HeLa细胞中仅增加1.5倍.位于缺失3′端点约10 kb的一个长1.4 kb片段在K562和MELGM979中,可使γ-基因启动子驱动的荧光酶基因表达增加2.4～2.9倍,而在HeLa细胞中无增加.结果说明这两段顺序均有增强子活性,并且这种活性具有一定的红细胞特异性.进一步证明1.7 kb片段内包含多个转录调节蛋白结合模体的430 bp片段包含了1.7 kb片段的大部分增强子活性.这些结果为缺失导致增强子样顺序并入到接近Gγ-基因,是Yunnanese(Aγδβ)0-地贫缺失突变体中胎儿Gγ-珠蛋白基因,在成人期持续活跃表达原因的假设提供了实验证据.     

IGF-1对不同年龄缺血性脑损伤大鼠神经发生的影响

目的:检测胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对青年和老年大鼠局灶脑缺血后神经发生及其后细胞生存的影响.方法:健康雄性SD青年鼠(3-4个月)和老年鼠(1年)随机分组,侧脑室注入IGF-1,1天后进行大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO),对照组由生理盐水取代.采用BrdU标记方法鉴定MCAO后7d和28d的增殖细胞.BrdU于MCAO后第6d由腹腔注入.免疫组化法检测7天后BrdU、PSA-NCAM标记细胞和28天后BrdU、BrdU/MAP2双标细胞.结果:老年组中BrdU阳性细胞的数目7d后较对照组增加5.1倍;青年纽中BrdU阳性细胞的数目7d后较对照组增加5.5倍.28d后,BrdU阳性细胞的残留率在青年IGF-1处理组和老年IGF-1处理组中分别是79.2%和75.1%,分别相对于对照组的77.1%和52.3%.老年组中PSA-NCAM阳性细胞的数目7d后较对照组增加3.2倍;青年组中PSA-NCAM阳性细胞的数目7d后较对照组增加3.7倍.28d后,BrdU/MAP2阳性细胞在青年IGF-1处理组较对照组增加7.0倍,在老年IGF-1处理组较对照组增加4.9倍.结论:此结果提示局部应用IGF-1进行缺血前预处理,在青年鼠和老年鼠中均能诱导神经发生,且在老年鼠中能明显提高神经发生后的增殖细胞的生存率和向神经元分化的能力.这一研究结果将有助于研究IGF-1在中老年脑损伤病人中的治疗性应用.