两种培养液对人外周血单个核细胞活力影响的比较观察

本文比较了自制细胞培养基和日本1640产细胞培养基对人外周血单个核细胞活力的影响,结果表明两种细胞培养基用于PBMC培养24h、48h、72h后、自制细胞培养基培养的细胞存活率均明显高于日本产1640培养基(P<0.01).说明自制细胞培养基可取代日本产1640培养基而用于人PBMC的实验培养.     

不同诱导因子对人外周血单个核细胞P2X7受体表达的作用

ATP激活P2X7受体可产生一系列的白细胞功能反应,因此P2X7受体的表达调控引起我们的兴趣。然而P2X7受体在正常人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)、单核细胞中的表达调控机制尚未阐明。本文用半定量RT-PCR方法检测多种细胞因子、细菌抗原、丝裂原对P2X7受体表达的诱导作用,探索P2X7受体的诱导表达模式。结果表明,单个核细胞和单核细胞可检出P2X7受体的表达;白细胞介素2、4、6(interleukin-2、-4、-6,IL-2、IL-4、IL-6)、肿瘤坏死因子仪(tumour necrosis factor-α,TNF-α)等细胞因子和金黄色葡萄球菌CowanⅠ株(Staphylococcus aureus Cowan strainⅠ,SAC)、脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)能上调PBMC的P2X7受体表达,而γ干扰素(interferon-γ,IFN-γ)、粒-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony-stimulating factor,GM-CSF)、巨噬细胞集落刺激因子(macmphage colony-stimulating factor,M-CSF)和植物血凝素(phytohemagglutinin-M,PHA-M)等则没有作用;LPS和M-CSF可以提高单核细胞的P2X7受体表达,IFN-γ、TNF-α、GM-CSF作用较弱,但是这些因子的预处理并不能增强LPS对P2X7受体表达的诱导。炎症因子促进P2X7受体的表达,提示P2X7受体可能在对抗细菌感染的免疫反应中起一定作用,这有待于进一步研究。     

生长因子诱导下人脐血单个核细胞向肝细胞的分化

目的：探讨在体外培养条件下人脐血单个核细胞向肝细胞的分化。方法：用FGF4、HGF诱导新鲜分离的脐血单个核细胞,并于培养16d通过RT—PCR、免疫细胞化学染色方法等方法检测肝细胞标志物的表达情况。结果：培养16d后。生长因子组贴壁的脐血MNCs中出现细胞体积增大、胞质丰富的双核细胞,RT—PCR和免疫细胞化学染色显示有肝细胞标志物的阳性表达（P〈0．05）。结论：在生长因子诱导下。脐血单个核细胞能够分化为类肝细胞。     

伏马菌素B1对人外周血单个核细胞抗原加工相关转运子表达的影响

探讨伏马菌素B1(FB1)对体外培养的人外周血单个核细胞(hPBMC)抗原加工相关转运子(TAP-1)表达的影响。采用流式细胞定量检测(FCM)、免疫印迹(Western印迹)及半定量RT-PCR方法,研究不同浓度FB1(0,10和50μmol/L)处理后人外周血单个核细胞TAP-1在mRNA和蛋白质水平表达的影响。RT-PCR检测结果表明,10和50μmol/L FB1处理24h后,处理组细胞TAP-1mRNA明显低于对照组。在蛋白质水平,FCM定量分析表明,两个处理组细胞表面TAP1的平均荧光强度均较对照组降低,以50μmol/LFB1处理组降低显著(P<0.05)。免疫印迹结果亦表明,FB1处理组TAP-1的表达均较对照组降低。10和50μmol/LFB1可抑制体外培养的hPBMCTAP-1mRNA和蛋白质表达。     

外周血单个核细胞计数与2型糖尿病的相关性分析

目的:将传统的外周血单个核细胞分离计数方法加以改进,并探讨2型糖尿病(DM)患者外周血单个核细胞数量与疾病的相关性。方法:密度梯度离心分离30例健康体检者单个核细胞,不同染色稀释液重悬细胞,充入改良牛鲍计数板连续计数5天,计算批内、批间变异;采用上述方法分离2型DM患者抗凝全血29例,计算单个核细胞数量;采用全自动生化分析仪检测对照组和2型DM组患者血脂。结果:两组的单个核细胞经3种前处理染液稀释重悬细胞后,计数结果间无统计学差异(P0.05);2型DM组与健康对照组比较,外周血单个核细胞计数绝对值无显著性差异(P0.05),血清TG、TC、LDL水平明显升高,差别具有统计学意义(P0.05),而其他指标结果间比较无差异。在对照组中,单个核细胞计数结果与白细胞呈正相关(r=0.611,P0.05),与血清TC、LDL水平呈负相关(r1=-0.550,r2=-0.605,P0.05)。而T2DM组,单个核细胞计数结果仅与LDL水平呈负相关(r=-0.104,P0.05)。结论:外周血单个核细胞数与2型糖尿病无明显相关性。     

利用人脐血单个核细胞重建急性肝损伤小鼠肝组织的实验研究

利用人脐血单个核细胞重建急性肝损伤小鼠肝组织,探索建立人-小鼠嵌合肝模型方法。15只SCID小鼠,以四氯化碳(CCL4)制备急性肝损伤模型,24h后行2/3肝切除,然后分为三个实验组细胞移植组(7只)、阴性对照组(3只)及空白对照组(5只);将人脐血单个核细胞悬液注入细胞移植组小鼠脾脏内,阴性对照组小鼠脾脏内注入等量磷酸盐缓冲液(PBS),空白对照组不注射细胞悬液和PBS。术后7d、14d及21d取小鼠肝组织观察病理变化、检测人白蛋白(ALB)及细胞角蛋白19(CK19),同时检测小鼠血清及肝组织匀浆中人ALB含量。全部小鼠表现出急性肝损伤组织学特征;细胞移植组小鼠术后7d、14d、21d肝组织内均见大量人ALB及CK19阳性表达细胞,血清及肝组织匀浆可检测出人ALB;阴性对照组小鼠肝组织未见人ALB及CK19阳性表达,血清及肝组织匀浆中未检测出人ALB。人脐血单个核细胞在部分肝切除的急性肝损伤小鼠肝组织内可大量分化为人肝细胞及胆管细胞,在建立模型方面已取得关键突破。     

脐血单个核细胞对缺血性脑卒中的临床干预

目的观察多份人脐血单个核细胞(MNC)静脉输注对缺血性脑卒中患者神经功能的改善作用。方法选择2008年4月至2015年5月在郑州市第二人民医院、郑州大桥医院住院和门诊收治的缺血性脑卒中患者76例(参照第四届全国脑血管病学术会议修订的脑卒中诊断标准,并经CT、MRI确诊),按照治疗方案的不同分为脐血MNC组和对照组,急性期对照组采用常规治疗,慢性期对照组采用康复治疗,脐血MNC组在常规治疗或康复治疗的基础上加用脐血MNC手背浅静脉输入,每例输入6次,每次细胞数大于或等于1×10~8个,每次间隔1~7 d。治疗前后神经功能缺损程度(NFD)、患侧肢体运动功能评价Fugl-Meyer(FMA)及日常生活评价(ADL)的比较采用配对t检验,组间比较采用独立t检验。结果脐血MNC组急性期治疗后NFD评分(11.50±2.58)明显低于急性期脐血MNC组治疗前(26.83±5.55,t=6.186,P<0.01)和对照组治疗后(24.33±5.16,t=5.442,P<0.01),脐血MNC组慢性期治疗后NFD评分(12.41±3.83)明显低于慢性期脐血MNC组治疗前(23.10±4.54,t=10.184,P=0.000)和对照组治疗后(23.09±3.94,t=11.012,P<0.01);脐血MNC组急性期治疗后Fuel-Meyer(上肢22.16±2.63,下肢32.00±5.32)明显低于急性期脐血MNC组治疗前(上肢11.66±2.94,t=-6.505,P<0.01;下肢12.66±3.01,t=-7.5386,P<0.01)和对照组治疗后(上肢15.00±3.63,t=-3.871,P=0.003;下肢16.83±4.91,t=-5.048,P<0.01),脐血MNC组慢性期治疗后Fuel-Meyer(上肢15.10±2.08,下肢15.03±1.86)明显低于慢性期脐血MNC组治疗前(上肢8.81±2.19,t=-11.748,P<0.01;下肢8.84±2.30,t=-12.619,P<0.01)和对照组治疗后(上肢9.16±2.60,t=-10.069,P<0.01;下肢9.69±2.98,t=-11.441,P<0.01);脐血MNC组急性期治疗后Barthel指数评分(65.83±7.35)明显低于急性期脐血MNC组治疗前(21.66±5.57,t=-11.916,P<0.01)和对照组治疗后(42.50±5.20,t=-6.387,P<0.01),脐血MNC组慢性期治疗后Barthel指数评分(63.40±9.19)明显低于慢性期脐血MNC组治疗前(25.20±3.81,t=-21.733,P<0.01)和对照组治疗后(29.90±5.36,t=20.361,P<0.01)。结论多份人脐血MNC手背浅静脉移植,方法简便、安全有效,有望成为治疗缺血性脑卒中的有效手段。     

体外培养脐血单个核细胞与CD34+富集细胞

对比MNC和CD34 +富集细胞在SCF +IL 3+IL 6 +FL +Tpo细胞因子组合下的体外扩增特性 ,发现 :CD34 +富集细胞具有很高的扩增潜力 ,在本实验条件下其总细胞持续扩增了 8周 ,扩增倍数达 312 70 9± 86 40 5倍 ;而MNC在培养至第 4周扩增就已呈现下降趋势 ,最大仅扩增了 5 3 3± 6 2倍。对比集落和CD34 +细胞的扩增发现 ,MNC的集落密度和CD34 +细胞含量由第 0天至第 7天有一个上升的过程 ,而CD34 +富集细胞在培养过程中 ,集落密度和CD34 +细胞含量却始终呈下降趋势。在体外培养过程中 ,CD34 +富集细胞的CFU GM和CD34 +细胞最大分别扩增了 185 7± 14 1和 191 7± 188 8倍 ,明显高于MNC的 12 4± 3 2和 5 0 6± 33 2倍 ;而CD34 +富集细胞和MNC的BFU E则只实现了少量扩增 ,分别为 7 2± 5 2和 10 1± 3 4倍。结果显示 ,从CD34 +富集细胞出发扩增造血干 祖细胞 ,可以得到更多的CD34 +细胞和CFU GM集落形成细胞     

外周血单个核细胞中肺炎衣原体的分离、培养及连续传代

开发一种分离并增殖肺炎衣原体(Cpn)的简易方法极具意义。该方法先分离血液标本中的外周血单个核细胞(PBMC),用PEG使Cpn-Ag阳性的PBMC裂解释放出Cpn,然后与人喉表皮癌细胞(Hep-2)一起离心,继续培养Hep-2细胞,再将Hep-2细胞冻融破碎后,放入到新的Hep-2细胞中进行离心,以完成Cpn的1次传代,然后以同样的方法进行2-4次传代。分别用微量免疫荧光法(MIF)及PCR法检测Hep-2细胞中的Cpn-Ag和CpnDNA,并用FITC标记的属特异性衣原体脂多糖单克隆抗体检测实验分离以及进口菌株传代后的包涵体形成单位数量。结果显示MIF法检测Cpn感染后的Hep-2细胞,其胞内Cpn-Ag强阳性;MIF法检测1次传代及2次传代的Hep-2细胞,其胞内Cpn-Ag亦均强阳性,3次传代为阳性,而4次传代为阴性;PCR法检测2次传代后CpnDNA阳性。该简化方法可以实现PBMC中Cpn的分离,分离菌株传代4次后出现退化(优于进口菌株),但该方法仍可实现进一步的培养及传代。     

脐血单个核细胞移植对帕金森病的临床疗效研究

目的观察经寰枕间隙侧方穿刺术移植人脐血单个核细胞（hUCB-MNCs）治疗帕金森病（PD）的临床疗效。 方法选取聊城市人民医院神经内科经寰枕间隙侧方穿刺术移植hUCB-MNCs治疗的31例PD患者，于治疗前及治疗后1、3、6、12个月，采用统一帕金森评估量表（UPDRS）第Ⅱ部分、第Ⅲ部分和帕金森非运动症状评价量表（NMSS）、匹兹堡睡眠质量指数量表（PSOI）对患者进行评分，并记录左旋多巴等效剂量（LED）。采用重复测量资料方差分析对治疗前后多个时间点的评分及左旋多巴等效剂量进行比较，两两比较采用Bonferroni检验。 结果（1）与治疗前比较，治疗后3、6、12个月UPDRS Ⅱ评分[（17.75±6.81）分比（13.67±5.62）分、（12.54±4.39）分、（10.41±4.31）分]均降低；治疗后3、6、12个月UPDRS Ⅲ评分[（28.53±14.75）分比（21.65±10.11）分、（19.37±9.26）分、（16.12±7.44）分]亦均降低，差异有统计学意义（P < 0.05）。（2）与治疗前比较，治疗后1、3、6、12个月NMSS评分[（58.94±35.74）分比（50.27±31.06）分、（41.38±28.25）分、（38.42±25.73）分、（36.15±24.56）分]均降低，差异有统计学意义（P < 0.05）。PSOI评分亦有相同变化趋势。（3）与治疗前比较，治疗后6、12个月LED[（629.57±205.33）mg/d比（435.54±160.62）mg/d、（300.71±135.83） mg/ d]下降，差异有统计学意义（P < 0.05）。 结论经寰枕间隙侧方穿刺术移植hUCB-MNCs治疗能改善PD患者的运动及非运动症状，延缓病情的进展。     

基因Ⅲ型新城疫病毒感染鸡外周血单个核细胞后的靶细胞分析

新城疫(ND)是鸡新城疫强毒株引起的一种鸡的烈性传染病,目前疫苗接种是防治该病的主要手段。临床上曾分离到与中等毒力疫苗株Mukteswar高度同源的强毒株JS/7/05/Ch,其通过静脉注射后毒力显著增强。为了探究JS/7/05/Ch经血液途径毒力增强的机制,本研究选用鸡外周血单个核细胞(PBMC)作为研究模型,分析基因Ⅲ型NDV在PBMC中的靶细胞。细胞分选结果表明病毒感染可诱导PBMC中单核细胞的增殖。实验组病毒感染后单核细胞相对占比上升,感染后1d Mukteswar组(Muk组)单核细胞占比16.3%,JS/7/05/Ch组(JS组)为13.21%,而对照组单核细胞仅占比3.18%。荧光定量PCR测定分选后各细胞中的病毒载量,感染后3d JS组单核细胞中的病毒含量与感染后1d相比极显著性增加(P<0.01)。感染后1d病毒以感染淋巴细胞为主,而在感染后3d单核细胞的相对病毒含量均超过淋巴细胞占据主导地位,Muk组和JS组分别为54.2%和60.2%。综上所述,基因Ⅲ型NDV在PBMC中的靶细胞是单核巨噬细胞。这为进一步研究这对基因Ⅲ型模式病毒毒力差异的机制奠定了一定基础。     

H1N1亚型流感病毒诱导外周血单个核细胞凋亡研究

A型流感病毒能诱导淋巴细胞、单核巨噬细胞的凋亡,为进一步探讨淋巴细胞和单核巨噬细胞在凋亡中可能存在的相互作用,用H1N1亚型流感病毒诱导人外周血淋巴细胞和单核巨噬细胞的凋亡．结果显示,前48 h,H1N1流感病毒能诱导淋巴细胞和单核巨噬细胞的凋亡,但在培养48 h后,流感病毒对单核巨噬细胞表现为凋亡抑制作用,同时流感病毒对淋巴细胞吸附不同时间后,荧光染色和流式细胞术检测凋亡未见明显差异,说明细胞凋亡与病毒吸附时间长短并无相关性．检测p53抑制剂Pifithrin-α(PFT-α)加入前后淋巴细胞和单核巨噬细胞的凋亡情况,结果显示,淋巴细胞和单核巨噬细胞的凋亡均被抑制, 提示通过p53诱导的凋亡可能是流感病毒诱导细胞凋亡的一条重要途径．     

人外周血单个核细胞与脐带间充质干细胞共培养的AFM研究

采用原子力显微镜与倒置显微镜在细胞层次上观察了人外周单个核细胞(PBMCs)与同种异源脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)共培养的过程,并在单细胞水平上分析了共培养前后人外周单个核细胞的形貌和生物物理性质。结果发现:共培养后贴壁人外周单个核细胞的形态发生了很大的改变,并且表面分布着大小不一的颗粒状聚合物。利用AFM高空间分辨的力位移曲线测量系统,发现共培养72h后培养上清中人外周单个核细胞、贴壁的人外周单个核细胞的粘滞力分别是单纯培养72h的人外周单个核细胞的2倍、5倍,而细胞的硬度分别是单纯培养人外周单个核细胞的1.5倍、2倍。CCK-8检测提示,共培养过程中,干细胞的生长与外周血单个核细胞的生长出现了竞争作用。通过AFM探测人外周单个核细胞与脐带间充质干细胞共培养的可视化数据,有助于更好地了解间充质干细胞与外周血单个核细胞的相互作用。     

五种益生菌菌株对脐血单个核细胞免疫作用的实验研究

目的比较不同剂量的5种不同益生菌菌株的免疫调节作用,为选择适当的菌株进行治疗提供依据。方法取7例健康孕妇的脐血分离出的脐血单个核细胞(cord blood monocular cells,CBMC),分别与长双歧杆菌6-1株、婴儿双歧杆菌CGMCC313-1株、嗜酸乳杆菌YIT2004株、粪链球菌YIT0072株和酪酸梭状芽胞杆菌CGMCC313-2株,以菌和CBMC比例2∶1(低)、20∶1(中)和200∶1(高)共培养24~36 h,同时设阴性对照(PBS)和阳性对照(脂多糖,LPS)。然后采用流式细胞仪检测各组CBMC表面CD4、CD25分子表达情况,用ELISA方法检测培养上清中IL-10、IL-12、IL-4、TGF-β1和IFN-γ的水平。结果 (1)与阴性对照(PBS)组相比,除200∶1比例的酪酸梭状芽胞杆菌CGMCC313-2株能够显著提高CBMC表达CD4CD25(10.45±3.16 vs 5.84±2.32,P=0.009)以外,其余益生菌菌株对表达CD4CD25差异均无统计学意义(P0.05)。(2)长双歧杆菌6-1株在中高剂量下,能够刺激CBMC产生IL-10和IFN-γ,对产生IL-12无明显影响。(3)婴儿型双歧杆菌CGMCC313-1株在各个剂量下均能够刺激CBMC产生IL-10,对IL-12和IFN-γ产生无明显影响。(4)酪酸梭状芽胞杆菌CGMCC313-2株在中高剂量下,能够刺激CBMC产生IL-10,对IL-12和IFN-γ产生无明显影响。(5)粪链球菌YIT0072株在低中剂量下,能够刺激CBMC产生IL-10、IL-12和IFN-γ,而高剂量则无影响。(6)嗜酸乳杆菌YIT2004株在中高剂量下,能够刺激CBMC产生IL-10,在中剂量下,能够刺激CBMC产生IFN-γ,对IL-12无影响。(7)在本研究中均未能检测出IL-4和TGF-β1。结论在目前国内使用的益生菌菌株中,仅酪酸梭状芽胞杆菌CGMCC313-2株能够显著提高CBMC表达CD4CD25。5种菌株均能够刺激CBMC产生抗炎症因子IL-10;长双歧杆菌6-1株、粪链球菌YIT0072株和嗜酸乳杆菌YIT2004株能够刺激CBMC产生Th1型细胞因子INF-γ,仅粪链球菌YIT0072株能够刺激CBMC产生IL-12。各个菌株在不同的剂量下,具有不同作用。提示在应用益生菌治疗免疫等相关性疾病时,应该考虑不同菌株对免疫细胞的不同作用机制。     

系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞中HCMV基因表达谱及其特异性抗体特征

人类巨细胞病毒(Human cytomegalovirus,HCMV)感染是系统性红斑狼疮(Systemic lupus erythematosus,SLE)的重要病因,并会加剧疾病进展。然而,SLE患者外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中HCMV基因的表达谱及其特异性抗体特征尚未完全阐明,并且HCMV蛋白特异性抗体水平与SLE患者临床特征的相关性尚未得到证实。通过Poly(A)建库的mRNA转录组测序(Poly(A)RNA-Seq)检测3例SLE患者和3例健康对照者(Healthy control,HC)的PBMC中的HCMV基因表达谱。然后在10例SLE患者和10例HC的链特异性建库的mRNA转录组测序(strand-specific RNA-seq)结果中验证检测到的HCMV基因。除此之外,通过免疫信息学分析筛选HCMV基因的B细胞表位。ELISA用于检测120例SLE患者和75例HC血清中的HCMV特异性抗体水平,并将其与患者的临床特征相关联。本研究在SLE患者和HC的PBMC中检测到8个HCMV基因。免疫信息学分析筛选出7个HCMV基因的优势B细胞表位。与HC相比,SLE患者血清中UL32和UL82特异性抗体显著降低。UL32特异性抗体可能与SLE患者血细胞功能异常有关。UL82特异性抗体可能参与SLE患者免疫系统功能异常和肾脏功能障碍。受试者工作特征曲线(Receiver operating characteristic,ROC)分析表明,其中UL32特异性抗体可以有效区分SLE患者和HC。     

当归多糖对辐射损伤小鼠骨髓单个核细胞凋亡的影响

目的探讨当归多糖(Angelica polysaccharides,APS)对辐射损伤小鼠骨髓单个核细胞(Bone marrow mononuclear cell,BMNC)凋亡的影响,旨在阐明APS对辐射性造血损伤保护作用的分子机制。方法结果结论方法 C57BL/6小鼠随机分为10组,正常组不作任何处理,其余9组经X射线(4.0Gy)照射后分别给予不同剂量APS或生理盐水,并于照射后第1、3、7d处死小鼠,流式细胞术检测BMNC凋亡率、Bcl-2表达率,Western Blot法(WB)检测P53蛋白、Caspase-3蛋白的表达。结果与正常组相比,生理盐水组BMNC凋亡率、P53蛋白、Caspase-3激活片段(12+17KD)的表达升高,Bcl-2及Caspase-3全长片段(35KD)的表达降低。与生理盐水组相比,2mg/kg APS组和8mg/kg APS组均能降低凋亡率,P53蛋白及Caspase-3激活片段的表达,升高Bcl-2和Caspase-3全长片段的表达。结论 APS对辐射引起的细胞凋亡具有一定的保护作用。     

用PCR法检测献血员单个核细胞中的CMV—DNA

107份自愿献血新鲜血标本和22份库存血标本分别用PCR检测单个核细胞中巨细胞病毒DNA（CMV－DNA）和用ELISA检测其血浆中CMV－IgG。结果CMV－DNA阳性率达80．4％和77．3％,CMV－IgC阳性纺为65．9％。其中CMV－IgG阳性者,基本上都携带CMV－DNA;CMV－IgG阴性者,亦有部分携带CMV－DNA。因此认为献血员血液中CMV高带毒率应引起临床有关部门的高度重视;PCR是筛选无传播CMV危险性血液制品的最可靠方法。     

氧化性低密度脂蛋白对人单个核细胞Toll样受体表达及炎症介质的影响

目的:探讨氧化性低密度脂蛋白(ox-LDL)对单个核细胞Toll样受体1～10(TLR1～10)表达的影响及对炎症因子TNF-α、IL-6的调控作用。方法:用逆转录-聚合酶链反应检测健康人单个核细胞中TLR1～10 mRNA的组成型表达;用实时定量-聚合酶链反应检测ox-LDL刺激单个核细胞后,TLR1～10mRNA表达的变化;结合抗体阻断实验,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测培养上清液中TNF-α和IL-6的含量。结果:人单个核细胞有TLR1～10 mRNA的组成型表达,ox-LDL刺激可上调人单个核细胞TLR2、TLR4 mRNA的表达。经ox-LDL刺激后,单个核细胞分泌TNF-α、IL-6上升,受体阻断剂阻断TLR2、TLR4后,可以减少ox-LDL诱导的TNF-α、IL-6分泌。结论:ox-LDL可能是TLRs的内源性配体,ox-LDL可通过TLR信号通路调节单个核细胞炎性细胞因子的生成。