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用Bacillussphaericus63菌为材料,经DNA-Sepharose和CibacronBlueF3GA-Sepharose两步亲和层析,将Bsp63Ⅰ纯化到均一程度。酶比活力达61400U/mg蛋白。用凝胶过滤法测得该酶分子量为113800。该酶样品在SDS-PAGE中呈现为一条蛋白带,并测得其亚基分子量为56800。用DNS-Cl法测得该酶N-末端氨基酸为丙氨酸。上述结果表明该酶分子是由两个相同亚基组成。 相似文献
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柯为 《中国生物工程杂志》1983,3(1):41-44
限制性核酸内切酶(简称限制酶)是遗传工程研究不可缺少的工具酶。曾作过一些介绍,新酶不断地扩大,这里仅就Boehringer Mannheim公司商品化生产的几种限制酶列表做一介绍: 相似文献
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目前对那些在原核生物中看来普遍存在的特异位点核酸内切酶的看法,由于探索重组DNA技术学的工具而受到了严重地歪曲。仅分离到了具有识别3—7个特异碱基范围序列的酶。当然这些内切酶在复合组基因的分析、“逆转遗传学”(“reverse genetics”)的兴起以及在真核中基因表达区的最近突破,特别是在了解肿瘤病毒RNA的作用过程中和免疫球蛋白的表达中基因重排等方面的用途上在过去的五年深为分子和细胞生物学家们体会到了。已发现了在识别顺序中有交错、对称、不对称及简并巨大多样性。同时考虑到特异位点重组和(或)DNA降解方面的遗传学资料,说明我们现在所收集的内切酶只能代表一个程度极其复杂的特异性窄谱。这些酶本身也为生物物理学家们和生物化学家们提供了探索DNA—蛋白质相互作用的微妙问题的丰富材料。 相似文献
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目前对那些在原核生物中看来普遍存在的特异位点核酸内切酶的看法,由于探索重组DNA技术学的工具而受到了严重地歪曲。仅分离到了具有识别3-7个特异碱基范围序列的酶。当然这些内切酶在复合组基因的分析、“逆转遗传学”(“reverse genetics”)的兴起以及在真核中基因表达区的最近突破,特别是在了解肿瘤病毒RNA的作用过程中和免疫球蛋白的表达中基因重排等方面的用途上在过去的五年深为分子和细胞生物学家们体会到了。已发现了在识别顺序中有交错、对称、不对称及简并巨大多样性。同时考虑到特异位点重组和(或)DNA降解方面的遗传学资料,说明我们现在所收集的内切酶只能代表一个程度极其复杂的特异性窄谱。这些酶本身也为生物物理学家们和生物化学家们提供了探索DNA-蛋白质相互作用的微妙问题的丰富材料。 相似文献
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芽孢杆菌中的限制性核酸内切酶 总被引:3,自引:0,他引:3
我们从66株国内收集的芽孢杆菌中筛选出10株菌株,它们含有限制性核酸内切酶活力。这些酶已经分别部分纯化并鉴定了其专一性。Bsp211Ⅰ、Bsp226Ⅰ及Bce71Ⅰ是HaeⅢ的异源同功酶,识别顺序是■,Bsp211Ⅰ的切点如箭头所示。Bsp105Ⅰ、Bsp67Ⅰ、Bsp64Ⅰ、Bsp74Ⅰ及Bsp76Ⅰ和MboⅠ有相同的识别顺序:■。此顺序中腺嘌呤被甲基化后,Bsp105Ⅰ与MboⅠ一样不能切割,而Bsp67Ⅰ不论此顺序中腺嘌呤是否甲基化均能识别并切断,它们的切点如箭头所示。Bsp63Ⅰ及Bsp78Ⅰ是PstⅠ的异源同功酶,识别顺序是:■,Bsp63Ⅰ的切点如箭头所示。 相似文献
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利用基因重组技术的研究以及产品的制造得到广泛普及,其中的有功之臣就是限制性核酸内切酶。具有识别特定的碱基序列并加以切割的功能。日本东京大学的小宫山真教授为我们就其有关机理及应用用研究进行阐述。[编者按] 相似文献
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我们从66株国内收集的芽孢杆菌中筛选出10株菌株,它们含有限制性核酸内切酶活力。这些酶已经分别部分纯化并鉴定了其专一性。Bsp211Ⅰ、Bsp226Ⅰ及Bce71Ⅰ是Hae Ⅲ的异源同功酶,识别顺序是,Bsp211Ⅰ的切点如箭头所示。Bsp105Ⅰ、Bsp67Ⅰ、Bsp64Ⅰ、Bsp74Ⅰ及Bsp76Ⅰ和MboⅠ有相同的识别顺序:此顺序中腺嘌呤被甲基化后,Bsp105Ⅰ与MboⅠ一样不能切割,而Bsp67Ⅰ不论此顺序中腺嘌呤是否甲基化均能识别并切断,它们的切点如箭头所示。Bsp63Ⅰ及Bsp78Ⅰ是PstⅠ的异源同功酶,识别顺序是:Bsp63Ⅰ的切点如箭头所示。 相似文献
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限制性核酸内切酶(以下简称限制酶)是一类水解DNA的磷酸二酯酶。因为它能识别特定的碱基序列并能在特异位点切割DNA,在分子生物学、遗传工程等研究中已成为一种极有用的工具酶,并为研究蛋白质与核酸的相互作用提供了一个理想的模型。限制酶是在研究噬菌体与寄主相互关系这个问题时发现的。Meselson等人在1968年从大肠杆菌K_(12)中分离到第一个限制酶。从1968年至今,已发现了近500种限制酶,具有103种不同的专一性。 相似文献
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限制性核酸内切酶与DNA相互作用研究进展 总被引:1,自引:0,他引:1
蛋白质对DNA识别的模体中,除了锌指结构、螺旋—转角—螺旋、亮氨酸拉链和β带外,近年来发现,Ⅱ型限制性内切酶与DNA作用的模体有许多特别之处。通过对EcoRI、BamHI、EcoRV等与DNA复合物的空间构象、一级结构分析,发现酶分子存在催化性裂缝,并且氨基端形成臂结构包绕DNA;同时DNA发生构象变化、螺旋扭结。这些有趣的结构有利于酶对底物的特异性结合和催化作用。 相似文献
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在肉色诺卡氏菌C-212株Nocardia carnea C-212中筛选到一种Ⅱ型限制性核酸内切酶NcrⅠ,经与BglⅡ的λDNA降解物的酶谱比较,以及酶识别特异性和切割位点的检测,证明了NcrⅠ是已知的限制酶BglⅡ的同切限制酶,而且其切割位点也与BglⅡ相同,其为: 相似文献
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为了获得单纯疱疹病毒(HSV)基因组的限制性核酸内切酶(RE)分析资料和选择合适的RE去研究HSV感染,用11种常用的RE对HSV两个型别的实验室标准毒株的基因组分别作了分析。比较研究的结果表明,BamHI、HpaI和PstI等RE较适于HSV的研究和分型。本研究所采用的小量提取HSV DNA的方法具有快速、简便和实用的特点,值得在HSV感染的诊断、分型和HSV分子流行病学诸研究中推广使用。 相似文献
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限制性核酸内切酶及其在遗传学上的应用 总被引:1,自引:0,他引:1
限制性核酸内切酶(简称限制酶)是细菌细胞中存在着的一类水解DNA的磷酸二脂酶,属于核酸内切酶类,能把侵入细菌细胞的外源DNA切成片段而保护了细菌细胞。1968年M.Meselson和R.Yan从大肠杆菌K_(12)菌株(E.coli K_(12))提纯了第一个限制酶EcoK以来,迄今所发现的限制酶已有一百多种,广泛应用于遗传学研究上。 相似文献
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用磷酸纤维素(P11)柱和肝素-Sepharose 4B柱二步法,分离纯化特异位点脱氧核糖核酸酶Bsu1076,可以达到较高的纯度,经50—150酶活单位的过酶量实验,酶解图谱清晰,无杂酶现象。切割、连接、回切图谱也完全合格。Bsu1076对λDNA、SPP1DNA、φX174DNA、SV40DNA及Ad-2DNA的酶解图谱与HaeⅢ完全一致。它在磷酸纤维素(P11)柱上的NaCl洗脱梯度为0.83—0.87M,在肝素-Sepharose 4B柱上的NaCl洗脱梯度为0.80— 相似文献
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