弓形虫优势表位融合于HPV16L1“N端”的融合体可显著提高表位免疫反应性

弓形虫和人乳头瘤病毒 (HPV) 具有共同的免疫保护人群,选择HPV16型晚期结构蛋白1 (HPV16L1) 为载体,携带弓形虫多表位 (RSepitope) 以期提高表位免疫原性同时可实现共免疫效应。文中分别以构建的融合体RSepitope-HPV16L1 (RSepitope融合于HPV16L1“N”端)以及HPV16L1-RSepitope (RSepitope融合于HPV16L1“C”端),脂质体转染COS-7细胞后,RSepitope-HPV16L1融合体形式可以在转染细胞中得到有效转录和翻译,分别可检测到相应的RSepitope和HPV16L1的mRNA和蛋白,但HPV16L1-RSepitope融合体形式在转染细胞中检测不到目标抗原的mRNA和蛋白。融合体采用“DNA初免-蛋白质加强免疫”的方案免疫BALB/c小鼠,酶联免疫吸附试验 (ELISA) 和酶联免疫斑点试验 (ELISPOT) 分别检测到RSepitope-HPV16L1免疫鼠血清中显著升高的体液和细胞免疫反应 (即最高水平的RSepitope特异性抗体IgG和IFN-γ),且比较单独RSepitope免疫组 (不与HPV16L1融合),产生的是显著升高的Th1和Th2免疫反应类型,提示HPV16L1作为表位载体的优势效应。而HPV16L1-RSepitope融合体形式体内也未能诱导有效的免疫反应。以上研究提示,HPV16L1“N”端可能是较为合适的表位融合位置,融合体表位特异性免疫学效应显著提高,研究结果为提高表位疫苗的免疫原性提供了一个合理的载体融合策略。     

相同交配型酵母原生质体电融合及融合体的分析

本文报道了用电场诱导相同交配型啤酒酵母单倍体菌株原生质体融合。电场诱导的融合率比聚乙二醇(PEG)诱导的融合率高2—4倍。并对融合体进行了分析,融合体的细胞体积约为亲株细胞体积之和,DNA含量也比亲株高,有的为亲株的两倍,有的为亲株的三倍左右,融合体的生物量也比亲株高,如FD－5的生物量约为亲株的三倍,具有一定的生产应用价值。     

棘孢小单孢菌和灰色链霉菌原生质体融合的研究

用庆大霉素产生菌——棘孢小单孢菌Micromonospora echinospora 814(Gm~r,Km~r)和链霉素产生菌Streptomyces griseus No. 45(Sm~r,Lm~r)进行了原生质体融合。以抗性为选择标记,选出了融合体。其融合频率在10~(-3)—10~(-4)之间。在电镜条件下,观察了原生质体融合的详细过程,测定了融合体的产抗生素能力,其中一株融合体F106的抗生素产量比亲本菌株814高58％。用羧甲基纤维素薄层对发酵液层析表明,有一个融合体的发酵液比亲本菌株814多一个组份,但没有测出其生物活性。     

酵母菌属间原生质体融合获得能发酵乳糖生产酒精的融合体

本文报道了用聚乙二醇(PEG)诱导酿酒酵母 （Saccharomyces cerecisiae)和乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)属间原生质体融合。融合体的细胞体积约为两亲株之和;融合体的DNA含量约为亲株的两倍;融合体具有双亲株的遗传标记。融合体不仅能发酵葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、半乳糖、棉子糖和蜜二糖,而且也能发酵乳糖。在以乳糖为碳源的培养基中,融合体的发酵力是亲株乳酸克鲁维酵母的两倍多;在以葡萄糖为碳源的培养基中,融合体与亲株酿酒酵母的发酵力接近。     

胡萝卜苷抑制HepG-2细胞增殖和迁移及拓扑异构酶表达

目的探讨胡萝卜苷对HepG2细胞增殖、迁移及DNA拓扑异构酶(topoisomerase,TOPO)Ⅰ和Ⅱ表达的影响。方法体外培养人肝癌HepG2细胞。CCK-8实验观察不同浓度(200μg/ml、150μg/ml、100μg/ml和50μg/ml)胡萝卜苷对HepG2细胞增殖的影响。qRT-PCR实验观察200μg/ml胡萝卜苷对HepG2细胞TOPOⅠ和TOPOⅡmRNA表达的影响。Transwell小室模型检测200μg/ml胡萝卜苷对HepG2细胞迁移的影响。结果胡萝卜苷对HepG2细胞增殖有明显抑制作用,并在一定范围内(0μg/ml~200μg/ml)呈现浓度依赖性。与未用胡萝卜苷处理的HepG2比较,经200μg/ml胡萝卜苷作用的HepG2细胞穿越基膜的数量显著减少,TOPOⅠ和TOPOⅡmRNA相对表达量显著降低。结论胡萝卜苷可能通过下调TOPOⅠ、TOPOⅡ基因表达而抑制HepG2细胞增殖,并具有抑制HepG2细胞迁移的能力。     

植物细胞类角蛋白的纯化、序列分析与类中间纤维cDNA的克隆

从胡萝卜悬浮培养细胞中纯化了64,55 ku两种类角蛋白,并对其部分氨基酸序列进行了测定,同源性比较结果表明64 ku蛋白与β-葡糖苷酶同源,55 ku蛋白未发现同源序列.以动物中间纤维蛋白的保守序列为引物,从胡萝卜悬浮培养细胞中克隆到一个cDNA片段,Southern,Northern杂交结果表明该片段为单拷贝,并在胡萝卜悬浮培养细胞及叶片中均表达,同源性比较揭示其与一些含有α-螺旋的基因序列有一定的同源性.以上结果为从分子水平上证明植物中间纤维的存在提供了一条线索.     

胡萝卜花药发育的组织化学研究

胡萝卜四分体时期的花药在药室内壁和绒毡层细胞中积累淀粉粒,随着花药的发育,花粉先出现大液泡,同时药室内壁和绒毡层细胞中淀粉粒消失;以后花粉中的大液泡消失,在花粉细胞质中出现淀粉粒。伴随着花粉的发育,绒毡层细胞退化,在细胞中积累较多的脂类物质,同时花粉中脂类物质含量也明显增加。胡萝卜成熟花粉粒的储存物主要为脂滴,也有少部分淀粉颗粒。胡萝卜花药在特定时间和特定部位积累营养储存物的过程也是其发育的一个特征。     

胡萝卜培养细胞胚胎发生能力的差异

异质的培养细胞是植物细胞变异的一个重要来源。由Bergman建立的平板培养技术已在许多方面得到应用,其中特别有意义的是获得次生物质含量不同的细胞系和具有较好农艺性状的栽培植物品系。胡萝卜培养细胞是研究植物体细胞胚胎发     

烟草原生质体微滴培养及细胞早期分裂的定点观察

原生质体培养的常规技术是群体培养。而建立单个(或少数)原生质体培养技术则可以跟踪每一原生质体的动态变化与研究不同类型原生质体之间的相互关系,从而使有关的细胞生物学研究更加精确深入;还可以有选择地单独培养细胞融合体、突变体、转化细胞等遗传操作     

植物细胞核基质（Nuclear Matrix）的形态结构及其NuMA蛋白成份的…

应用细胞选择性抽提并结合ＤＧＤ包埋去包埋剂电技术对植物细胞核基质的形态结构进行了观察。结果显示胡萝卜悬浮培养细胞、银杏花粉细胞和精子细胞的细胞核内存在一个非染色质性的纤维蛋白网络体系。     

烟草花粉原生质体与叶肉原生质体的融合及培养早期变化

用ＰＥＧ—高Ｃａ高ＰＨ法诱导抗卡那霉素的烟草（Ｎｉｃｏｔｉａｎａｔａｂａｃｕｍ）品系Ｎ３６４＋Ｋｍ＋花粉原生质体和黄花烟草（Ｎｉｃｏｔｉａｒｕｓｔｉｃａ）叶肉原生质体融合。幼嫩花粉原生质体和叶肉原生质体之间的融合体培养启动胚胎发生分裂,经卡那霉素筛选后,少数多细胞团存活并形成小愈伤组织。成熟花粉原生质体与叶肉原生质体之间的融合体则仅产生管状结构。这一结果表明,作为融合一方的花粉原生质体的发育时期对融合产物的发育途径有重要影响。     

乙肝病毒表面抗原基因在胡萝卜中的克隆及表达

构建HBV表达抗原（HBsAg)植物表达载体并在胡萝卜植株中表达。采用自行构建adr亚型HBsAg基因克隆T-adr,再次酶切获得860bp含PreS2的HBsAg基因片段,将其插入到植物表达载体pBPC55,新质粒命名为pBPC91adr。将其与含除草剂抗性基因及GUS蛋白基因的筛选质粒pBPC93共同经基因枪（PDS-1000/He)转化胡萝卜悬浮细胞,经含除草剂（Biolaphos)的培养基筛选及植物激素诱导分化,获得除草剂抗性胡萝卜幼苗,结果为转化后8周,自胡萝卜细胞中分化出除草剂抗性胡萝卜幼苗,提取新分化幼苗总DNA,特异性引物PCR扩增后可见860bp扩增带;Southern-Blot证明有HBsAg基因整合,胡萝卜蛋白萃取物的Western-Blot及ELISA检测证实有HBsAg蛋白表达。利用基因枪转化使质粒pBPC91adr中HBsAg基因在胡萝卜幼苗内整合并表达,提示以植物生产疫苗具有可行性。     

烟草雌性细胞原生质体的融合实验

将聚乙二醇诱导的单对原生质体融合技术应用于烟草（Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｔａｂａｃｕｍ ）雌性细胞体外融合,成功地进行了雌性细胞间,雌、雄性细胞间,雌性细胞与体细胞间各种组合的融合实验。此外,应用微滴培养与微室饲养培养两种方法诱导了体细胞原生质体分裂并形成细胞团,为数目有限的性细胞融合体的培养奠定了技术基础     

啤酒酵母菌的细胞融合

啤酒多倍体酵母菌原生质体已成功地与单倍体原生质体进行融合。经细胞壁再生后,稳定的融合重组体被分离出来。这些融合体的基因分析表明,融合体中含有双亲的基因型。孢子形成良好,且每个子囊中含有四个孢子,每个孢子确实是二倍体。这样原生质体融合就提供了一个对啤酒酿造酵母进行遗传分析的方法。但是如果没有一个方便的杂交技术,这个方法将是很困难的。     

NAA对胡萝卜（Daucus carota）悬浮细胞茄红素合成的影响

通过对胡萝卜新透心红 DaucuscarotaCV.XinTouxinhong 细胞悬浮系单位鲜重细胞的茄红素含量、细胞总产量以及茄红素总产量的分析比较,研究了培养基中不同NAA浓度对胡萝卜细胞悬浮系茄红素代谢的影响.结果表明,NAA具有增强细胞茄红素代谢水平、提高单位鲜重细胞中茄红素的含量的作用,但对细胞的生长具有抑制作用.从茄红素单产和总产量综合评价,培养基中加入3.0mg·L-1NAA效果最佳.     

链霉素生产菌—灰色链霉菌和热灰紫链霉菌的原生质体融合的研究

本文采用原生质体融合技术,把链霉素生产菌——灰色链霉菌No．45 Streptomyces griseus No.45(Lin,Rif‘)同耐高温的不产生抗生素的热灰紫链霉菌T272 Strep-griseus thermogriseoviolaceus T272(Lin^s,Rif^f)进行了原生质体融合。以抗性为选择标记,以PEG6000为助融剂,选出了融合体。制备超薄切片后在电镜下观察了原生质体融合的详细过程。在链霉素生物合成受抑制的高温(37℃)下,测定了融合体的抑菌括性,从形态上与两亲株不同的46株融合体中发现6．3％的融合体既有耐高温的特性也有抑菌的活性。     

杂交瘤在临床和科研实验室中的作用

<正>迄今,临床和科研实验室的血清抗体依靠人源或动物源性。因此,长期以来存在着不少悬而未决的问题。杂交瘤的发现,已有可能排除这些问题中的一部分。一种杂交株是含有混合的核物质的细胞,它是小鼠骨髓瘤细胞与免疫小鼠脾细胞的融合体。当它单性增殖时,能继续不断产生单克隆抗体。单克隆抗体所显示的优点,已众所周知。它在科研和临床工作中的应用,已引起人们广泛的兴趣。     

体细胞胚胎发生标记

De Danske Sukkerfabrikker和丹麦皇家农业大学的M.Joersbo等人已分离出一种对胚胎发生细胞有专一性的异过氧化物酶。他们使用琼脂糖凝胶上提取蛋白的等电聚焦法,从无植物生长素的培养基上再培养2～6天的胡萝卜胚胎发生细胞悬浮系中发现了同功酶。而在无胚胎发生细胞系中只发现极小量的同功酶。在培养基中加入2,4-D既抑制了细胞的胚胎发生又抑制了异过氧化物酶的活性。荷兰瓦赫宁根农业大学研究人员P.F.Fransz等人在玉米胚胎发生愈伤组织培养物中     

凤尾菇和桃红平菇种间原生质体电融合获杂种菌株

以有自然标记的双核风尾菇(Pleurotus sajor-caju)和桃红平菇(P．Rhodophyllus)为出发菌株,以它们携带营养缺陷型标记的单孢菌株为直接亲本,采用BAEKON 2 000基因转移仪进行侧耳属种间原生质体电融合,成功地获得若干株融合体,其中有一株编号为F57的融台体已培育出子实体。比较了融合体F57与亲本的形态、生理、生化和遗传等性状,结果证实,融合体F57是一株新的种间杂种菌株。     

一种利用基因表达变化检测、鉴别抗生素的新方法

本研究利用基因表达变化构建一个高通量检测筛选抗生素化合物的新方法。采用含luxCDABE报道子的质粒pCS26和pMS402为载体,构建大肠杆菌重组质粒、筛选铜绿假单胞菌以及沙门氏菌的随机启动子库,获得对抗生素有反应的启动子-报道子融合体,构成抗生素筛选体系。通过重复实验筛选出15个启动子-报道子融合体,它们对不同抗生素有不同的反应,通过这一系统可以检测样品中的抗生素,并初步判断与现有抗生素的异同。使用这种方法可以进行高通量筛选潜在的抗菌物质。