一种快速简单的质粒DNA纯化方法

本文介绍一种快速获取高纯度质粒DNA的方法。本法对煮沸提取法进行改良后,快速提取质粒DNA粗制品,然后用国产滤纸从琼脂糖凝胶中回收纯化质粒DNA。同时对本法所提取的质粒DNA的回收率、浓度、纯度及可能的用途进行验证和讨论,证明此法简易,所得样品纯度高,可直接用于转化、酶切和基因克隆。     

琼脂糖凝胶电泳分离纯化和制备质粒DNA

分离纯化质粒DNA,在遗传工程和质粒的 分子遗传学研究中是重要的一环。分离和制备 质粒DNA的方法很多,有：澳化乙锭密度梯度 祛^[2-5]、两相法^[6]、酸酚法^[7][碱变性法^[8]p、甲基化 白蛋白（MAK）柱层析法^[9]硝酸纤维素法^[10]、电 泳法^[11]等,这些方法都各有所长。根据质粒的超 卷曲结构、开环结构和线状结构的不同,各个质 粒分子量大小的不同,以及质粒DNA与RNA 和染色体DNA在电泳中迁移率的不同,在我 们实验室的条件下,研制了一种琼脂糖凝胶电 泳分离纯化和制备质粒DNA装置。运用这种 装置,纯化制备了以下质粒： pBR322, pASI, pUB110、F}lac+proA+B+, pVA517A, pVA517B, pVA517C, pVA517D, pVA517E, pVA517F, pVA517G和pVA517H。并且对它们进行了电 镜观察,对其中纯化过的pBR322和pASI质粒 进行了转化实验,证明它们有生物活性。同时, 应用这种装置,可以一次分离具有不同分子量 大小的几种质粒,回收率约为85多。结果表明, 这种装置结构简单,操作方便,是纯化制备质粒 DNA的一种可用工具。     

一种改进的快煮制备质粒DNA和噬菌体DNA的方法

质粒DNA和噬菌体DNA的提取,是基因操作过程中最基本的、也是比较重要的一个步骤。而制备纯度高的制品,缩短操作时间,又是人们普遍感兴趣的。提取闭合环状共价DNA(cccDNA)(包括质粒DNA和噬菌体DNA)的基本原理是利用大分子染色体DNA片段与环状共价DNA的理化性质差别来进行的,方法多种:SDS法,酸酚法,PEG法,煮     

快速鉴定和大量纯化质粒DNA的方法

为了快速鉴定重组质粒DNA, Birnboim等 人^[1]建立了快速碱性抽提法。在此基础上,我 们作了某些修改,不仅较有效地防止了质粒 DNA变性形式的出现,而且可以用来大量抽提 质粒DNA。若再协同轻基磷灰石柱层析121和酸 酚法^[6]处理,可获得纯度较高的质粒DNA。我 们用修改法提取了分子量从2.6X10^[6]-26X10^[6] 道尔顿的4种不同质粒DNA,均收到了比较理 想的结果,特别对于难于抽提的或大质粒DNA 更为有效。     

一种经济高效的用Silica提取纯化质粒DNA的方法

目的：为了达到批量提取质粒DNA的目的,在多次实验的基础上,建立一种经济、高效的质粒提取方法。方法：以pUC18、pET28b、pCAMBIA1304等3种质粒为材料,分别采用silica法和碱裂解法提取质粒DNA,通过质粒DNA浓度的紫外分光光度法定量测定、电泳分析和HindⅢ酶切鉴定,对两种质粒提取方法的效果进行了比较与评价;对silica法进行了改进和优化,进行大批量重组子的提取和验证。结果：silica法和碱裂解法提取质粒DNA效果相当,都可进行后续实验,但silica法具有经济、高效、无毒的优势。结论：silica法是一种简单、经济、高效的质粒提取方法,可用于批量质粒DNA提取。     

分离纯化质粒DNA方法的比较

质粒的研究在遗传工程上占有重要地位。其分离纯化是一项费工费时和得率甚微的工作。一般常用的方法有制备性电泳,平衡等密度超离心和速度区带超离心等,这些方法各有特点,作者对它们进行了比较。质粒DDNA从苏芸金杆菌(Bacillus thuri-ngiensis)变种 isvaelensis 4Q_2-22和变种     

一种改进的质粒DNA提纯方法

在重组DNA实验中,获得高纯度的质粒DNA是构建载体所必须的步骤之一。目前,国内外多数实验室沿用氯化铯梯度离心法纯化质粒DNA,本文介绍了一种改进的提取和纯化质粒DNA方法,简便易行。 材料和方法 材料 RNase(Oxioid England),胰蛋白胨(Oxioid England),琼脂糖(Sigma Ⅰ型),BamHI(Bio Lab)。其它试剂均为国产分析纯。所用菌种为E.coli JA221(hsd R.trp E5.Leu     

一种提取质粒DNA的改良方法

本文详细介绍了一种改良碱裂解法提取质粒ＤＮＡ的方法,该法采用ＮＨ４Ａｃ代替苯酚和氯份的抽提过程,得率高,质量好,完全达到了分子生物学常规实验的要求,如酶切、连接、转化大肠杆菌、ＰＣＲ等,甚至用于序列测定和植物遗传转化,该法重复性好,操作简单、实用．     

质粒DNA制备方法的改进

目的：改进碱裂解制备质粒ＤＮＡ的方法。方法：在小规模制备中,采用７．５ｍｏｌ／Ｌ ＢＨ４Ａｃ中和碱溶液及室温下异丙醇沉淀;在中规模制备中,采用三步沉淀将质粒分离纯化;在大规模制备中,用两步清洗弃去由于量大而不宜除掉的杂物（碎屑物、杂蛋白等）。结果：建立了一套快速、高效、无毒、经济的方法。     

质粒和λ噬菌体DNA简便的分离纯化方法

用甲酯化白蛋白硅藻土(MAK)柱层析方法分离纯化的质粒pBR322,ColE_1,pSC101,pCRl 和λDNA,经EcoR_1限制性内切酶作用,琼脂糖凝胶电泳分析,抗药因子转化,结果表明这些材料可以用作DNA 重组体的载体和限制性内切酶的底物。     

质粒和λ噬菌体DNA简便的分离纯化方法

用甲酯化白蛋白硅藻土(MAK)柱层析方法分离纯化的质粒pBR322,ColE_1,pSC101,pCR1和λDNA,经EcoR_1限制性内切酶作用,琼脂糖凝胶电泳分析,抗药因子转化,结果表明这些材料可以用作DNA重组体的载体和限制性内切酶的底物。     

一种高纯度、高得率的质粒DNA纯化法

一种高纯度、高得率的质粒ＤＮＡ纯化法汤乃梅,王晓民,韩济生（北京医科大学神经科学研究中心,北京１０００８３）关键词质粒ＤＮＡ纯化本文介绍一种方法,它不仅可以得到高纯度质粒ＤＮＡ,而且在同等纯度下的得率也高于其它方法,其操作流程如下：１．５００ｍｌ菌液...     

一种从少量细胞中高效制备DNA的简易方法

随着分子生物学技术对医学领域的渗透,利用DNA杂交技术进行基因诊断和研究,已逐渐进入临床各个学科。但常规提取细胞DNA的方法,不仅费力耗时,而且DNA在有机溶剂提取、透析和乙醇沉淀时丢失较多,因此不适合于临床大批标本制备DNA和标本量小的病例。本研究参照并改进Waldmann等人的方法,建立了从少量细胞中提取DNA的方法。经与常规方法比较以及在Southern杂交中的效果观察,证明这是简单易行,制备效率高的方法。     

一种琼脂糖凝胶电泳分离质粒DNA的方法

分子无性繁殖已成为扩增特定 DNA 片段的广为使用的技术,而细菌质粒是很多无性繁殖工作中所选用的载体。近年来分离载体的方法,大多是根据载体 DNA 的共价闭合环状(CCC—DNA)性质及其对变性的抗性.在氯化铯—溴化乙锭梯度中,CCC—DNA 密度大,比线状 DNA 沉降快,所以用密度梯度超离心方法可获得高纯度的 CCC—DNA。但超离心方法在时间上、材料上都不够经济,在     

一种简便快速检测质粒DNA的方法

简便、快速检测质粒DNA的方法,无论是 在筛选、鉴定新质粒或重组质粒的研究中都具有重要的意义。我们在将质粒pBR 322 DNA与 A DNA进行体外重组、筛选和鉴定重组子过程 中,摸索了一种简便快速检测质粒及重组质粒 DNA的方法。此法对菌体和溶菌产物不需任 何处理,比较简便易行     

介绍一种提取DNA的简易方法

本文介绍一个中学可做的简易实验,用课堂演示或学生实验来提取动物肝脏中的ＤＮＡ。动物组织细胞中的ＤＮＡ和ＲＮＡ大部分与蛋白质结合成核蛋白。在１～２ｍｏｌ／Ｌ的浓氯化钠溶液中,ＤＮＡ核蛋白的溶解度很大,ＲＮＡ核蛋白的溶解度很小;而在０．１４ｍｏｌ／Ｌ的稀...     

一种有效纯化低拷贝质粒DNA的改良硅藻土法

碱法制备的低拷贝质粒因含有大量杂质而无法获得有效的测序结果。为此,以纯λDNA为样品,对硅藻土纯化DNA的方法进行了优化,表明硅藻土悬液的最佳用量是20μl／μgλDNA,回收率达77．31％。应用此改良硅藻土法纯化一长为14953bp的低拷贝质粒pLZ14,所得质粒纯度达23．87％,比未纯化前提高了11．06倍。经纯化的pLZ14质粒测序信号强、无误认碱基,而未经纯化的质粒测序时信号弱、错误普遍存在。     

一种简便经济制备银染序列分析模板质粒DNA的方法

用改良碱裂解法提取的质粒DNA,经RNA酶消化后做银染列分析的模板,所得测序结果清晰、准确,从而使银染法模板的制备更加经济简便。     

一种提高质粒DNA凝胶电泳检测灵敏度的方法

比较了凝胶电泳示检测质粒ＤＮＡ时不同激发波长对ＤＮＡ－ＥＢ荧光强度的影响,发现短波长激发光可增加ＤＮＡ的探测灵敏度。采用２６０ｎｍ作为激光光时可探测到少至０．７ｎｇ的线性ＤＮＡ。且在很广的ＤＮＡ的质量范围内,ＤＮＡ－ＥＢ荧光强度 与ＤＮＡ量或正比。以此改进方法检测电离辐射诱导的ＤＮＡ单、双链断裂岢得到与其它研究结果相一致的Ｇ（ＳＳＢ）和Ｇ（ＤＳＢ）值。